Orientador: Pedro Luiz Rosalen / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-03T19:49:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Murata_RamiroMendonca_M.pdf: 96971 bytes, checksum: 19d79345a58a9558f4c5e6a61bc610fb (MD5) Previous issue date: 2004 / Mestrado

Class of 2012 Abstract / Specific Aims: The primary aim of this study was to determine the time to appropriate therapy for all patients with candidemia and/or bacteriemia (due to either Enterococcus or Streptococcus species) during a one year period in relation to time of blood culture, time of Gram-stain result, time of PNA FISH species result, and time of final species determination result. The secondary and third aims were to compare the time to appropriate therapy based on clinician group that was notified of Gram-stain result and PNA FISH result and compare the time to appropriate therapy based on PNA FISH assay results reported during the day and night microbiology laboratory shifts. Methods: This Institutional Review Board approved project is a retrospective, chart review evaluation of the 24 hour/ 7 days a week use of PNA FISH assays with therapeutic interventions by infectious diseases pharmacists and physicians on patient outcome measures and time to appropriate therapy. All patients admitted to an academic medical center during a one year period (April 2010-March 2011) with either Enterococcus, Streptococcus, or Candida species isolated from blood were included. Main Results: A total of 168 subjects were identified with Candida species isolated from 31 subjects and Enterococcus/Streptococcus species isolated from blood in 137 subjects. Conclusions: While reporting conditions can affect interpretation and intervention rates, rapid species identification assays such as PNA FISH can be used by pharmacists to provide antimicrobial therapy recommendations based on the species identification and to decrease the time to appropriate antimicrobial therapy.

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Autor no autoriza el acceso a texto completo de su documento / Son más de 700 especies bacterianas identificables en la cavidad oral humana. Entre ellas, Streptococcus mutans se cree que desempeña un papel importante como un factor microbiológico para la iniciación de la caries dental. El manejo clínico de la caries dental se ha dirigido principalmente al tratamiento de las consecuencias del proceso de la enfermedad mediante restauraciones y no en su prevención. Con el uso de tecnología emergente, se podrá evaluar el riesgo de la enfermedad de caries en una fase anterior a la de la lesión incipiente de mancha blanca clínicamente visible. Recientemente se ha demostrado que PCR en tiempo real es un método sensible y rápido para la identificación y cuantificación de las especies microbianas individuales. Para este estudio se seleccionaron 27 niños al azar, de 8 años de edad, provenientes del área norte de la RM. Se recolectó 3ml. de saliva no estimulada, en las primeras horas de la mañana sin cepillado previo, solicitando su depósito en un tubo de plástico estéril, el cual se mantuvo a 4ºC hasta su traslado al laboratorio. La placa supragingival se recogió de todas las superficies dentarias lisas de dientes anteriores y posteriores con curetas periodontales estériles. Las muestras de saliva y placa bacteriana previamente rotuladas, se almacenaron a -80°C para su posterior procesamiento. Los partidores utilizados para cuantificar mediante qPCR el gen gtfB de S. mutans fueron Smut 3368-F y Smut 3481-R. Los resultados obtenidos de la amplificación mediante qPCR tuvo un porcentaje de eficiencia del 98% y el delta entre cada ciclo fue de 3,36. En la curva de melting se obtuvo un solo pick de amplificación a una misma temperatura para todas las muestras. La metodología presentada permite la identificación y cuantificación específica para el gen gtfB de S. mutans en muestras de saliva y biopelícula dental, de manera rápida y exacta. Lo que permite establecer el riesgo cariogénico individual de cada paciente y con ello realizar medidas preventivas, evitando así la aparición de lesiones y su posible transmisión.

Streptococcus mutans ha sido implicado como el principal agente etiológico de la caries dental, la cual es considerada una de las enfermedades infecciosas más comunes en los seres humanos. Por esto, muchas investigaciones están destinadas al estudio de sustancias, tanto químicas como de origen natural, que impidan que el agente patógeno prolifere en el medio bucal. Dentro de las sustancias de origen natural tenemos papaína y Sanitrend. Papaína es una enzima proveniente de la papaya, la cual además de facilitar la digestión, presenta propiedades antinflamatorias, antimicrobianas y antifúngicas. Sanitrend es un biocida orgánico natural basado en extractos de semillas de cítricos, presenta acción antimicrobiana y fungicida de amplio espectro. En el estudio de sustancias con propiedades antibacterianas se puede utilizar la técnica de dilución en agar, en la cual se prepara una serie de placas con agar a las que se les agrega el antimicrobiano a diferentes concentraciones, luego se inoculan con una suspensión estandarizada del microorganismo en estudio. Las pruebas se examinan luego de incubar 48 hrs a 35ºC y se determina la concentración inhibitoria mínima (CIM) del antimicrobiano frente al microorganismo.

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Introducción: Streptococcus sanguinis (S. sanguinis) es un colonizador primario de la biopelícula dental asociada a salud. Esta bacteria produce peróxido de hidrógeno (H2O2), un sub-producto del crecimiento y que es bacteriostático para otros streptococci orales, como Streptococcus mutans (S. mutans), quien, bajo condiciones determinadas de pH y disponibilidad de carbohidratos fermentables, se relaciona con el inicio y progresión de la caries dental. En este contexto, actualmente se propone una relación sinérgica entre S. mutans y Candida albicans (C. albicans), levadura comensal de la cavidad oral capaz de causar diversas patologías en humanos. El efecto de S. sanguinis, mediante la producción de (H²O²), en C. albicans no ha sido completamente estudiado. Según lo mencionado anteriormente, el objetivo de este estudio es determinar preliminarmente si existe modulación del crecimiento de C. albicans, en co-cultivo con S. sanguinis. Material y Métodos: Se utilizó S. sanguinis SK36, S. mutans ATCC 25175, C. albicans ATCC 90029 y un aislado clínico de C. albicans (P1-1) (proveniente de un niño con caries activas). Se realizaron ensayos de competencia en medio líquido y sólido de S. sanguinis o S. mutans con C. albicans (cepa de referencia o aislado clínico), se determinó pH y células viables para cada pareja en co-cultivo líquido. Inhibición del crecimiento en medio sólido fue evaluada según presencia de halo inhibitorio próximo a alguno de los microorganismos. Ensayos fueron incubados en microaerofilia a 37 ºC durante 48 h con agitación. Además, se realizó un test de concentración inhibitoria mínima (CIM) de (H²O²) para ambas cepas de C. albicans y también se determinó la cantidad de (H²O²) producida por S. sanguinis, de acuerdo a una curva estándar previamente diseñada. Los datos fueron analizados de manera descriptiva, comparando medianas entre distintos grupos y dentro de un mismo grupo. Resultados: En medio sólido, C. albicans produjo halo inhibitorio sobre S. sanguinis. En medio líquido, S. sanguinis y C. albicans (ATCC y P1-1) aumentaron su crecimiento en co-cultivo, respecto de su crecimiento aislado. Además, generaron siempre una alcalinización del medio, respecto al pH inicial. A 0,1 mM de (H²O²) la sobrevivencia de ambas cepas de C. albicans se redujo en un 70%, definiendo esta concentración como la CIM. La cantidad estimada de (H²O²) producida por S. sanguinis fue de 0,059 µM en todas las etapas de crecimiento. Conclusiones: De acuerdo a los resultados obtenidos y a las limitaciones del estudio, se puede concluir que S. sanguinis no inhibe el crecimiento de C. albicans. Asimismo, ambos podrían contribuir en mantener el pH del microambiente en niveles compatibles con salud oral. El co-cultivo de C. albicans con S. mutans podría beneficiar el crecimiento de la bacteria, en desmedro de la levadura. No obstante, cuando la levadura proviene de una biopelícula cariogénica, su relación con la bacteria podría tornarse más sinérgica. Entonces, el rol de C. albicans dentro del proceso de caries podría depender de la condición que presenta el microambiente, previo a la presencia de la levadura. El (H²O²) podría influir negativamente en el crecimiento de C. albicans, sin embargo, este efecto estaría supeditado a su concentración en el medio. / Adscrito a Proyecto U-inicia Difarp 40/13, VID, U. de Chile.

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Introducción: La utilización de distintos modelos para generar desmineralización incipiente, ya sea en tejidos humanos o animales, es una práctica corriente para investigar los métodos por los que se forma la lesión de caries y también para probar distintos compuestos farmacéuticos que la previenen y limitan. Unos de los métodos más conocidos y efectivos son los modelos que involucran especies bacterianas, ya que son representativos de lo que ocurre en la cavidad bucal. Objetivos: Demostrar que un agente a base de flúor y grafeno tiene acción remineralizante sobre zonas desmineralizadas de discos de hidroxiapatita, generadas por una biopelícula de Streptococcus mutans, a través de la medición de microdureza superficial. Metodología: Se utilizó un modelo desmineralizador de biopelícula monoespecie de dos cepas de S. mutans, ATCC 25175 y ATCC 35668, sobre discos de hidroxiapatita (HA) de manufactura propia. Éstos se expusieron a sacarosa al 10%, 4 veces al día por 5 minutos durante 7 días. Se determinó microdureza superficial de Vickers inicial en cada uno de los discos de HA previo a la exposición de la biopelícula monoespecie de S. mutans, después de exposición a biopelícula, y después de la aplicación del nuevo agente remineralizante. Resultados: Ambas cepas de S. mutans se adhirieron a los discos de HA de manufactura propia. Los valores de microdurezas de Vickers después de la exposición de los discos al modelo de biopelícula monoespecie de S. mutans fueron menores a los valores de microdureza superficial inicial. Los valores de dureza de Vickers después de la aplicación del nuevo agente remineralizador sobre la superficie desmineralizada de los discos de HA fue mayor que los valores de microdureza superficial desmineralizada, pero menor a los valores iniciales de dureza de los discos de HA. Conclusiones: el modelo in vitro de biopelícula monoespecie de S. mutans fue efectivo en la disminución de la microdureza superficial inicial de los discos de HA. El nuevo agente remineralizante aumentó los valores de microdureza superficial de los discos expuestos al modelo monoespecie de S. mutans.

Cell surfaces of aggregation, adherence or hydrophilic variants of Streptococcus sanguis were compared to cell surfaces of the parent strain with regard to their protein and antigenic constituents. Cell surface molecules were released by digestion with mutanolysin. Extraction with SDS-BME, urea, lithium chloride and boiling water did not solubilize any material which stained with silver nitrate in an SDS-polyacrylamide gel. The parent organism S. sanguis 12 which aggregates in saliva, adheres to saliva coated hydroxyapatite (S-HA) and is hydrophobic was found to possess a prominently staining 160,000 MW protein. This protein was almost completely absent from strain I2na, a hydrophobic non-aggregating variant, and was completely absent from the hydrophilic non-aggregating, non-adherent strain 12L. Trypsinization of strain 12 resulted in the coincident loss of the 160,000 MW protein and the ability to aggregate in saliva. Trypsin treatment reduced, but did not eliminate the hydrophobic character of the cells. Boiling destroyed the ability to aggregate but did not alter hydrophobicity. Cell wall digests of strain 12 contained a large number of proteins which were absent from strains 12na and 12L. Mutanolysin digests of the hydrophilic strains contained no material that was visible in a silver stained SDS-polyacrylamide gel. Electron microscopy of phosphotungstic acid stained cells showed a thick capsular material spread evenly over the cell surface of the parent strain 12. This layer was thinner around the cells of strain 12na and appeared patchy on hydrophilic strains. Electron microscopy of uranyl acetate stained cells revealed that strain 12 had short fibrillar structures evenly distributed over the cell surface, and long fibrils which were more concentrated at the end of the cell. The hydrophilic strain 12L lacked both types of fibrils. Crossed immunoelectrophoresis confirmed that the major cell surface antigens were located in the 160,000 MW region. Cell wall digests of strain 12 and 12na inhibited adherence of strain 12 to S-HA by 36% and 19% respectively. The digests of hydrophilic strain 12L were not inhibitory. The inhibitory activity was sensitive to heat and SDS. / Science, Faculty of / Microbiology and Immunology, Department of / Graduate

Orientador : Reginaldo Bruno Gonçalves / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-09-11T21:00:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Kamiya_RegianneUmeko_M.pdf: 3554509 bytes, checksum: 78b3d20deebb1352f618aadcca18f637 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: Os objetivos deste estudo foram: comparar a atividade de produção de mutacinas, a diversidade fenotípica/genotípica de Streptacoccus mutans de voluntários cárie-ativos e livres de cárie, e determinar/comparar o grau de associação e a capacidade discriminatória da Mutacinotipageme a AP-PCR. Um total de 319 cepas de Smutans isoladas a partir da saliva, placa dental e dorso de língua de 8 voluntários cárie-ativos e 8 livres de cárie foram submetidas à Mutacinotipageme à técnica de AP-PCR. O perfil mutacinogênico foi traçado pela Bacteriocinotipagem, utilizando-se 13 cepas indicadoras, entre elas: S. mutans, S. sabrinus, S mitis, S salivarius, S. sanguinis, S. aralis e S cricetus, e o polimorfismo genético foi detectado através da técnica de AP-PCR com os primers OPA-02 e OPA-13. Cerca de 79,62% das cepas de S mutans (254/319) analisadas produziram mutacinas contra pelo menos uma das 13 indicadoras. Através dos métodos de tipagem empregados, detectou-se que não houve relação entre a diversidade fenotípica e/ou genética de Smutans e atividade de cárie. A utacinotipagem permitiu detectar 55 perfis fenotípicos contra 101 perfis genéticos polimórficos detectados pela AP-PCR, e foi limitada para a análise da heterogeneidade da espécie intra-indivíduo. O grau de associação entre as duas técnicas de agrupamento foi em média de 77,38%, sendo o poder discriminatório da AP-PCR (0,975) superior ao da Mutacinotipagem(0,925). Embora a Mutacinotipagemdemonstre limitações para o estudo da diversidade fenotípica, através dela foi possível demonstrar que o potencial mutacinogênico, de S mutans isolados de indivíduos com cárie, possuíram amplos espectros inibitórios contra as diferentes cepas indicadoras, já os isolados de voluntários livres de cárie apresentaram um perfil mais específico contra S. sanguinis, S. aralis e S mitis, que são colonizadores predominantes nesta população. Teoricamente, inibindo seus competidores potenciais, os S mutans teriam uma colonização bem sucedida, seja pela aquisição da hegemonia nutricional ou de receptores de superficie para sua adesão / Abstract: The objectives of this study were: to compare the activity of mutacin production, the fenotypic/genotypic diversity of S. mutans isolated from caries active and caries free individuals, and to evaluate the association index and the power discriminatory of Mutacin Typing and AP-PCR. In the present study, 319 strains of S. mutans isolated from saliva, dental plaque and tongue dorsum of 8 caries active and 8 caries free voluntareers were submitted to Mutacin Typing and AP-PCR. The mutacinogeny profile was traced, using 13 indicator strains between them: S. mutans, S. sobrinus, S. mitis, S. salivarius, S. sanguinis, S. oralis e S. cricetus and the genetic polymorphism was detected with primers OPA-02 and OPA-13. Mutacin was produced by 79,62% out of 319 isolates (245/319) inhibiting one or more of the 13 indicator strains. No corellation was found between the S. mutans fenotypic/genotypic diversity and caries activity, by the typing methods employed. The Mutacin typing allowed to evidence 55 distinct fenotypic patterns whereas AP-PCR detected 101 distinct patterns genotypic. The Mutacin Typing was limited to analyze S. mutans heterogeneity intra individually. The association index mean between Mutacin Typing and AP-PCR was 77,38%, and the discriminatory power of AP-PCR (0,975) was greater than the one Mutacin Typing (0,925). Bacteriocin Typing was limited to study for fenotypic diversity, however it was possible to demonstrate that S. mutans isolated from caries active group showed higher inhibitory activity than S. mutans isolated from caries free group, and the last presented highest antagonic effect against S. sanguinis, S. oralis and S. mitis (the predominant colonizers of this population). Theorically, inhibiting potencial competitors, S. mutans would have succesful colonization, either by nutricional or adhesion receptor aquisitions / Mestrado / Microbiologia e Imunologia / Mestre em Biologia Buco-Dental

The streptococci, as a group, are gram positive cocci which occur in pairs or chains; they are nonmotile, nonsporing, and catalase negative. Most species are facultative anaerobes, and a few are obligate anaerobes. They are chemorganotrophs producing lactic acid as an end product of glucose metabolism. The G + C (guanine + cytosine) content reported for 15 species is 33-42% (Diebel and Seeley, 1974). The genus Streptococcus includes a large number of saprophytic, pathogenic and non pathogenic species. Many of these bacteria are members of the normal body flora. However, man is very susceptible to the pathogenic members, and no organ in the body is completely immune to streptococcal infections. As a result, streptococci cause a greater variety of clinical manifestations than any other genus of bacteria. As far as it known, no biochemical, physiological, or antibiogram pattern studies have been done on streptococci from Stockton or other parts of California. Therefore it is the purpose of this investigation to biochemically and physiologically characterize primarily extra-respiratory streptococcal isolates, study their antibiogram patterns, and relate these characteristics to each other and to other patterns reported in the United States.

A thesis submitted to the Faculty or Science, University of the Witwatersrand Johannesburg, in fulfilment of the requirements for the degree of Doctor of Philosophy. / Two carbohydrates predominate in modern diets namely sucrose and starch. They are metabolized by oral microorganisms to products implicated in dental caries. The influence of sucrose and its metabolites is well documented but starches have received less attention. This study investigated the secretion of starch hydrolysing enzymes by oral streptococci and the production of sugars, acids and polysaccharides from the two ccmponents of starch, amylose and amylopectin. ( Abbreviation abstract ) / AC2017