Esta tese teve como objetivo verificar a resposta celular de fibroblastos pulpares após a variação nos parâmetros de fotobiomodulação. Fibroblastos pulpares de dentes decíduos humanos em 4a passagem foram plaqueados, deixados a aderir, submetidos a privação nutricional, e em seguida irradiados com laser de baixa intensidade a 660 nm. Os grupos em estudo foram baseados na variação da potência e tempo, resultando em dosimetrias diferentes, variando entre 2,5 a 6,2 J/cm2. No artigo 1, o efeito dos diferentes parâmetros da fotobiomodulação foram verificados por meio da expressão gênica do COL1 por RT-PCR, nos períodos de 6, 12 e 24 horas. No artigo 2, avaliou-se a síntese proteica de fatores angiogênicos (VEGF-A, VEGF-C, VEGF-D, VEGFR1, VEGFR2, FGF-2, PDGF, PLGF, PECAM-1, e BMP-9) por ELISA Multiplex, nos períodos de 6, 12 e 24 horas após fotobiomodulação, no sobrenadante e lisado celular. Os dados foram analisados por ANOVA a dois critérios seguido pelo teste de Tukey (p<0.05) nos dois artigos. No artigo 1, a comparação intragrupo da expressão gênica do COL1 mostrou que a variação da fotobiomodulação com mais tempo (50 s) e menor potência (5 mW) em uma densidade de energia de 6,2 J/cm2 mudou o padrão de expressão gênica do COL1 pelos fibroblastos pulpares de 12 h para 6 h. A comparação intergrupo da expressão genica COL1 não mostrou diferenças estatisticamente significativas. No artigo 2, fibroblastos pulpares secretaram e produziram todas as proteínas testadas antes e após a fotobiomodulação, exceto PDGF no lisado. A comparação intragrupo, no artigo 2, mostrou padrões similares da síntese proteica dos fatores angiogênicos para todos os grupos: a secreção de VEGF-A, VEGF-C, VEGFR1 e BMP-9 aumentou significativamente no sobrenadante enquanto que FGF-2 e VEGF-A aumentou significativamente no lisado. A comparação intergrupo da sintese de proteínas revelou que a dosimetria 2,5 J/cm2 aumentou a secreção de VEGF-D (p=0.4779), VEGFR1 (p=0.8570) e BMP-9 (p=0.0042) no sobrenadante e VEGFR1 (p=0.0128) e VEGF-D (p=0.0036) no lisado; e diminuiu VEGF-A (p=0.0176), VEGF-C (p=0.0328), PDGF (p=0.0077), PLGF (p=0.0004) no sobrenadante e PLGF (p=0.0094) e BMP-9 (p= 0.5645) no lisado. A dosimetria de 3.7 J/cm2 aumentou VEGF-A p=0.8410), FGF-2 (p=0.4778), BMP-9 (p=0.0042) e VEGFR1 (p=0.8570) no sobrenadante e VEGF-A (p=0.8412), VEGF-C (p=0.5908) e VEGFR1 (p=0.0128) no lisado; e diminuiu VEGF-A (p=0.0176), PDGF (p=0.0077) e PLGF (p=0.0004) no sobrenadante e PLGF (p=0.0094) e BMP-9 (p=0.0276) no lisado. Concluiu-se que as dosimetrias de 2,5 a 6,2 J/cm2 biomodularam a expressão gênica de COL1, e as dosimetrias de 2,5 J/cm2 e 3.7 J/cm2 biomodularam a síntese proteica de vários fatores angiogênicos. Na dosimetria de 6,2 J/cm2, o maior tempo e a menor potência mudaram o padrão da expressão gênica de COL1 pelos fibroblastos pulpares. A dosimetria de 3.7 J/cm2 foi a mais efetiva na produção e secreção de fatores angiogênicos. / This thesis aimed to verify the cellular response of pulp fibroblasts after the variation in photobiomodulation parameters. Pulp fibroblasts at 4th passage were plated, led to adhere, subjected to serum starvation, and subsequently irradiated with 660 nm lowlevel laser. The study groups were based on the variation of the power and time, resulting in different dosimetries ranging from 2.5 to 6.2 J/cm2. In article #1, the effect of different photobiomodulation parameters were verified through the COL1 gene expression by RT-PCR, at 6, 12, and 24 hours. In article #2, the protein synthesis of angiogenic factors (VEGF-A, VEGF-C, VEGF-D, VEGFR1, VEGFR2, FGF-2, PDGF, PLGF, PECAM-1, and BMP-9) was measured by ELISA Multiplex assay, at 6, 12, and 24 hours, in the supernatant and lysate. Data were analyzed by two-way ANOVA followed by Tukey test (p<0.05) in both articles #1 and #2. In article #1, the intragroup comparison of the COL1 gene expression showed that the variation of PBM application with longer time (50 s) and smaller power (5 mW) at the energy density of 6.2 J/cm2 changed the COL1 mRNA expression pattern by pulp fibroblasts from 12 h to 6 h. The intergroup comparison of COL1 gene expression revealed no statistically significant differences. In article #2, pulp fibroblasts secreted and produced all the tested proteins before and after PBM, except for PDGF in the lysate. The intragroup comparison, in article #2, showed similar patterns of angiogenic factors synthesis for all groups: the secretion of VEGF-A, VEGF-C, VEGFR1, and BMP-9 increased significantly in the supernatant, while FGF-2 and VEGF-A increased significantly in the lysate. The intergroup comparison of the protein synthesis revealed that the dosimetry of 2.5 J/cm2 exhibited upregulation of VEGF-D (p=0.4779), VEGFR1 (p=0.8570), and BMP-9 (p=0.0042) in supernatant and VEGFR1 (p=0.0128) and VEGF-D (p=0.0036) in lysate; and downregulation of VEGF-A (p=0.0176), VEGF-C (p=0.0328), PDGF (p=0.0077), and PLGF (p=0.0004) in supernatant and PLGF (p=0.0094) and BMP-9 (p= 0.5645) in lysate. The dosimetry of 3.7 J/cm2 upregulated VEGF-A (p=0.8410), FGF-2 (p=0.4778), BMP-9 (p=0.0042), and VEGFR1 (p=0.8570) in supernatant and VEGF-A (p=0.8412), VEGF-C (p=0.5908), and VEGFR1 (p=0.0128) in lysate; and downregulated VEGF-A (p=0.0176), PDGF (p=0.0077), PLGF (p=0.0004) in supernatant and PLGF (p=0.0094) and BMP-9 (p=0.0276) in lysate. We concluded that the energy densities from 2.5 to 6.2 J/cm2 biomodulated the COL1 gene expression, but red laser at 2.5 J/cm2 and 3.7 J/cm2 biomodulated the synthesis of several angiogenic proteins. At the energy density of 6.2 J/cm2, longer application time and smaller power changed the pattern of COL1 gene expression by pulp fibroblasts. However, the dosimetry of 3.7 J/cm2 was the most effective for the production and secretion of angiogenic factors.

Traumatic dental injuries (TDI) often happens in early childhood, the examination method is clinical and radiographic. Another methodology that has been used to aid in TDI diagnosis is molecular biology. A fluid that has been studied in molecular biology is gingival crevicular fluid (GCF), which is an appropriate fluid to evaluate the relation between periodontal tissues and pulp, and its compounds will depend on either the health or inflammation level of tissues. Therefore, this study aimed to characterize the proteins/peptides in GCF of primary tooth with different sequelae of TDI to clarify the proteins/peptides functions in order to contribute in the diagnosis of pulp and periodontal conditions. The sample was composed for 8 children with TDI, ranging 4 to 6 years. GCF samples were collected in 4 points of the gingival sulcus of both the 12 traumatized teeth and the 8 primary first molar, divided into 5 groups: Molar group (deciduous first molar), No alteration, Pulp Canal Obliteration (PCO), Repair-Related Resorption (RRR) and Pulp Necrosis (PN). GCF proteins were subjected to liquid chromatography electrospray ionization mass spectrometry for identification and characterization. 436 single proteins/peptides were found in this study. 43 (9.86%) were in No alteration group, 92 (21.10%) in PCO group, 23 (5.28%) in RRR group, 16 (3.67%) in PN group, and finaly, 114 (26.15%) in molar group. All groups revealed the following peptides/proteins functions: immune response, cell degradation and recycling, repair and maintenance, enzymatic process, cell binding, cell signaling, cell differentiation, cell migration, structural components and antioxidant activity. Proteins functions related to the specific groups: molar group played role in homeostasis process. No alteration group, I6L9F6_HUMAN, NEB2_HUMAN, Q5T0H8_HUMAN, H0YJG4_HUMAN are related to nervous tissue, and, TET1_HUMAN to odontoblast differentiation. RRR group, CALX_HUMAN, B8ZZF0_HUMAN are related to senescence, and KMT2D_HUMAN mutation is associated to skeletal deformation. PCO group, CATA_HUMAN is response to hypoxia, fibroblast transformation, and osteoblast differentiation; MTA70_HUMAN is related to stem cell differentiation; ITPR2_HUMAN releases calcium ion into cytosol. Fistula group: Q8TAS6_HUMAN development of neuronal tissue; E9PDR3_HUMAN neurotransmitter release, cell division and death; B4DT36_HUMAN play a role in conducting axon; C9JN07_HUMAN mitotic process; RSF1_HUMAN DNA repair; Q19KS2_HUMAN immune defense. Concluding, TDI of primary tooth profile undergoing different sequelae type was characterized. The proteins of molar group exhibited complete homeostasis. In no alteration group, the proteins play a role in maintaining the nervous tissue. The proteins of PCO group were involved in cell transformation and differentiation to reach canal root obliteration. The proteins of RRR group revealed a senescence process. In fistula group the proteins play a role to surround the inflammation site. / O trauma dentário (TD) geralmente ocorre na primeira infância, e os exames para tratamento e acompanhamento são majoritariamente clínico e radiográfico. Outro método auxiliar que tem sido usado para diagnóstico é a biologia molecular. Sendo, o fluido gengival crevicular (FGC) um fluido apropriado para avaliar a relação entre os tecidos periodontais e a polpa, e seus compostos dependerão do nível de saúde ou inflamação dos tecidos. Desta forma, este estudo teve como objetivo caracterizar as proteínas e peptídeos do FGC de dentes decíduos com diferentes sequelas relacionadas ao TD, a fim de auxiliar no diagnóstico da polpa e condição da periodontal. A amostra foi composta por crianças com TD, com a faixa etária entre 4 a 6 anos. As amostras de FGC foram coletadas em 4 pontos do sulco gengival dos 12 dentes traumatizados e de 8 primeiros molares decíduos, os quais foram divididos em 5 grupos: molar (primeiro molar decíduo), sem alteração, obliteração do canal pulpar (OCP), reparo relacionado à reabsorção (RRR) e necrose pulpar (NP). As proteínas do FCG foram submetidas espectrometria de massa em tandem de ionização por eletrovaporização, para identificação e caracterização. Oito crianças com 5 anos de idade, em média. 436 proteínas/peptídeos únicos foram encontrados neste estudo. 43 (9,86%) estavam no grupo Sem alteração, 92 (21,10%) no grupo OCP, 23 (5,28%) no grupo RRR, 16 (3,67%) no grupo NP, 114 (26,15%) no grupo molar. Todos os grupos revelaram as seguintes funções peptídeos / proteínas: resposta imune / degradação celular e reciclagem / reparo e manutenção / processo enzimático / ligação celular / sinalização celular / diferenciação celular / migração celular / componentes estruturais / atividade antioxidante. Funções proteicas relacionadas aos grupos: grupo molar desempenhou papel no processo de homeostase. As proteínas do grupo sem alteração: I6L9F6_HUMAN, NEB2_HUMAN, Q5T0H8_HUMAN, H0YJG4_HUMAN estão relacionadas ao tecido nervoso; e, TET1_HUMAN à diferenciação odontoblástica. As proteínas do grupo RRR: CALX_HUMAN, B8ZZF0_HUMAN estão relacionadas à senescência; e a mutação de KMT2D_HUMAN está associada à deformação esquelética. As proteínas do grupo PCO: CATA_HUMAN está associada à resposta de hipóxia, transformação de fibroblastos e diferenciação de osteoblastos; MTA70_HUMAN diferenciação de célulastronco; ITPR2_HUMAN libera íon de cálcio no citosol. As proteínas do grupo da fístula: Q8TAS6_HUMAN está relacionada ao desenvolvimento do tecido neuronal; E9PDR3_HUMAN à liberação de neurotransmissores, divisão e morte celular; B4DT36_HUMAN desempenha um papel na condução do axônio; C9JN07_HUMAN relaciona-se ao processo mitótico; RSF1_HUMAN ao reparo de DNA; Q19KS2_HUMAN à defesa imunológica. Concluindo, o perfil dos dentes decíduos que sofreram trauma e tiveram diferentes tipos de sequelas foi caracterizado por diferentes proteínas. O grupo molar exibiu homeostase. Grupo sem alteração, as proteínas desempenharam um papel na manutenção do tecido nervoso. As proteínas do grupo PCO estavam envolvidas na transformação e diferenciação celular para atingir a obliteração do canal radicular. As proteínas do grupo RRR revelaram um processo de senescência. No grupo de fístula, as proteínas parecem desempenhar um papel para cercar o local da inflamação.