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Thesis (PhD)--Montana State University--Bozeman, 2008. / Typescript. Chairperson, Graduate Committee: Michael W. White. Includes bibliographical references (leaves 133-147).

Tübingen, Univ., Diss., 2006.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-03-01Bitstream added on 2014-06-13T19:55:39Z : No. of bitstreams: 1 barros_ld_me_jabo.pdf: 316486 bytes, checksum: 47f0ed48430e97c60257700b27571deb (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O presente trabalho teve como objetivos determinar a soro-ocorrência de anticorpos, isolar e caracterizar geneticamente T. gondii de pombos Zenaida auriculata de vida livre do município de Londrina, Paraná. Foram capturados 206 pombos da espécie Z. auriculata utilizando armadilhas tipo arapuca, em três regiões do município de Londrina, dentre elas o campus universitário, zona urbana e rural. Após a eutanásia em câmara de CO2, realizou-se a punção cardíaca de cada animal para a colheita de sangue e obtenção de soro para a pesquisa de IgG anti-T. gondii pelo Teste de Aglutinação Modificado (MAT). Em seguida foi realizada a necropsia para a colheita de tecidos (pulmão, coração, fígado, cérebro e músculo peitoral) para o isolamento do agente por meio do bioensaio em camundongos. Os isolados obtidos foram caracterizados por meio da PCR-RFLP utilizando 12 marcadores genéticos. Os resultados foram comparados e classificados de acordo com os genótipos presentes no ToxoDB (http://toxodb.org/toxo/). No MAT, 22,3% (46/206) das amostras foram consideradas soropositivas, com títulos variando de 16 até 4096. A soro-ocorrência de acordo com a região de captura foi de 56%, 12,1% e 6,2% para campus universitário, zona urbana e zona rural respectivamente (p<0,05). Doze (5,8%) animais foram positivos no bioensaio, obtendo-se os isolados Pb01, Pb06, Pb12, Pb13, Pb14, Pb36, Pb150, Pb153, Pb155, Pb164, Pb185 e Pb200. A análise genotípica revelou a presença de sete genótipos, quatro dos quais se classificam como genótipos #1, #6, #17 e #65 do ToxoDB e três não descritos anteriormente. O trabalho é o primeiro relato na literatura de isolamento do parasita em pombos Z. auriculata, além disso, foi observado o tipo clonal II, genótipo raro no Brasil, confirmando a diversidade genética dos isolados de T. gondii no Brasil / This study aimed to evaluate the serum occurrence of anti-Toxoplasma gondii antibodies, isolate and genetically characterize this parasite from 206 wildlife pigeons (Zenaida auriculata) trap captured in Londrina city, Paraná. The birds were captured in three regions of Londrina, among them college campus, the urban and rural area. After euthanasia by CO2 chamber, the animals were bleeding by cardiac puncture, after what the serum was obtained. Lung, heart, liver, brain and pectoral muscle were collected from pigeons to performer mouse bioassay. Detection of IgG anti-T. gondii was performed by modified agglutination test (MAT). The isolates were molecularly characterized by PCR-RFLP using 12 genetic markers and the results were compared and ranked according the genotypes present in ToxoDB (http://toxodb.org/toxo/). Through MAT, 22,3% (26/206) of samples were considered positive, with titers ranging from 16 to 4096. The infection rate according to the capture region was 56%, 12,1% and 6,2% for university campus, urban and rural areas respectively. Twelve (5,8%) animals were positive in the bioassay, obtaining the isolates Pb01, Pb06, Pb12, Pb13, Pb14, Pb36, Pb150, Pb153, Pb155, Pb164, Pb185 and Pb200. Genotypic analysis revealed the presence of seven different ones, genotypes #1, #6, #17 and #65, and three not previously described. This study is the first report of isolation of the parasite in pigeons Z. auriculata. Furthermore, was observed the clonal type II, genotype rare in Brazil, confirming the genetic diversity of isolates of T. gondii in Brazil

Orientador: Rosangela Zacarias Machado / Coorientador: João Luis Garcia / Banca: Aramis Augusto Pinto / Banca: Odilon Vidotto / Resumo: O presente trabalho teve como objetivos determinar a soro-ocorrência de anticorpos, isolar e caracterizar geneticamente T. gondii de pombos Zenaida auriculata de vida livre do município de Londrina, Paraná. Foram capturados 206 pombos da espécie Z. auriculata utilizando armadilhas tipo arapuca, em três regiões do município de Londrina, dentre elas o campus universitário, zona urbana e rural. Após a eutanásia em câmara de CO2, realizou-se a punção cardíaca de cada animal para a colheita de sangue e obtenção de soro para a pesquisa de IgG anti-T. gondii pelo Teste de Aglutinação Modificado (MAT). Em seguida foi realizada a necropsia para a colheita de tecidos (pulmão, coração, fígado, cérebro e músculo peitoral) para o isolamento do agente por meio do bioensaio em camundongos. Os isolados obtidos foram caracterizados por meio da PCR-RFLP utilizando 12 marcadores genéticos. Os resultados foram comparados e classificados de acordo com os genótipos presentes no ToxoDB (http://toxodb.org/toxo/). No MAT, 22,3% (46/206) das amostras foram consideradas soropositivas, com títulos variando de 16 até 4096. A soro-ocorrência de acordo com a região de captura foi de 56%, 12,1% e 6,2% para campus universitário, zona urbana e zona rural respectivamente (p<0,05). Doze (5,8%) animais foram positivos no bioensaio, obtendo-se os isolados Pb01, Pb06, Pb12, Pb13, Pb14, Pb36, Pb150, Pb153, Pb155, Pb164, Pb185 e Pb200. A análise genotípica revelou a presença de sete genótipos, quatro dos quais se classificam como genótipos #1, #6, #17 e #65 do ToxoDB e três não descritos anteriormente. O trabalho é o primeiro relato na literatura de isolamento do parasita em pombos Z. auriculata, além disso, foi observado o tipo clonal II, genótipo raro no Brasil, confirmando a diversidade genética dos isolados de T. gondii no Brasil / Abstract: This study aimed to evaluate the serum occurrence of anti-Toxoplasma gondii antibodies, isolate and genetically characterize this parasite from 206 wildlife pigeons (Zenaida auriculata) trap captured in Londrina city, Paraná. The birds were captured in three regions of Londrina, among them college campus, the urban and rural area. After euthanasia by CO2 chamber, the animals were bleeding by cardiac puncture, after what the serum was obtained. Lung, heart, liver, brain and pectoral muscle were collected from pigeons to performer mouse bioassay. Detection of IgG anti-T. gondii was performed by modified agglutination test (MAT). The isolates were molecularly characterized by PCR-RFLP using 12 genetic markers and the results were compared and ranked according the genotypes present in ToxoDB (http://toxodb.org/toxo/). Through MAT, 22,3% (26/206) of samples were considered positive, with titers ranging from 16 to 4096. The infection rate according to the capture region was 56%, 12,1% and 6,2% for university campus, urban and rural areas respectively. Twelve (5,8%) animals were positive in the bioassay, obtaining the isolates Pb01, Pb06, Pb12, Pb13, Pb14, Pb36, Pb150, Pb153, Pb155, Pb164, Pb185 and Pb200. Genotypic analysis revealed the presence of seven different ones, genotypes #1, #6, #17 and #65, and three not previously described. This study is the first report of isolation of the parasite in pigeons Z. auriculata. Furthermore, was observed the clonal type II, genotype rare in Brazil, confirming the genetic diversity of isolates of T. gondii in Brazil / Mestre

Resumo: Estudou-se a ocorrência do protozoário Toxoplasma gondii em 70 amostras de linguiças suínas tipo frescal, comercializadas no município de Botucatu-SP, a fim de avaliar a participação deste alimento na cadeia epidemiológica da toxoplasmose. Para tanto, utilizou-se a técnica de isolamento do agente em camundongos e a amplificação do material genético pela reação em cadeia pela polimerase (PCR). Esta última foi realizada com amostras digeridas e não digeridas pela pepsina. Não se isolou o parasita de nenhuma amostra estudada, entretanto, 33 amostras (47,14%) apresentaram resultado positivo à PCR. Para as amostras submetidas à digestão péptica, 21 (30,0%) mostraram-se positivas e para aquelas que não sofreram este tratamento, 25 (35,71%) reagiram positivamente. Não houve diferença significativa entre os dois tratamentos. Os resultados obtidos indicam que a linguiça suína frescal provavelmente tem pouca importância como fonte de infecção para a toxoplasmose humana, na região estudada. No entanto, o elevado índice de amostras positivas na reação de PCR demonstra que o parasita pode estar presente, porém é inviabilizado pela ação do sal adicionado ao tempero das linguiças. Palavras-chave: Toxoplasma, linguiça, PCR, isolamento. / Abstract: Occurrence of the protozoan Toxoplasma gondii was studied in 70 samples of fresh swine sausages commercialized in the city of Botucatu-SP, to evaluate the importance of this kind of food in toxoplasmosis epidemiology. For that, it was proceeded the agent isolation in mice and the polymerase chain reaction (PCR) to amplify the genetic material. The PCR was made with digested samples and no digested by pepsin. The parasite wasn't isolated from any sample, however, 33 (47.14%) samples were positive to the PCR. From digested samples, 21 (30.00%) were positives and from no digested samples 25 (35.71%) showed positives. There wasn't significant difference between the two treatments. Results indicate that swine sausages probably have a little importance as infection source of human toxoplasmosis in the studied region. Nevertheless, the high amount of PCR positives samples show that the parasite may be present, but it is inactivated by the salt added to sausages seasoning. Key words: Toxoplasma, sausage, PCR, isolation. / Orientador: Paulo Francisco Domingues / Coorientador: Helio Langoni / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2003Bitstream added on 2014-06-13T18:59:54Z : No. of bitstreams: 1 mendonca_ao_me_botfmvz.pdf: 849559 bytes, checksum: 50a02f9581b73c1f11c3ddadb582e075 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Estudou-se a ocorrência do protozoário Toxoplasma gondii em 70 amostras de linguiças suínas tipo frescal, comercializadas no município de Botucatu-SP, a fim de avaliar a participação deste alimento na cadeia epidemiológica da toxoplasmose. Para tanto, utilizou-se a técnica de isolamento do agente em camundongos e a amplificação do material genético pela reação em cadeia pela polimerase (PCR). Esta última foi realizada com amostras digeridas e não digeridas pela pepsina. Não se isolou o parasita de nenhuma amostra estudada, entretanto, 33 amostras (47,14%) apresentaram resultado positivo à PCR. Para as amostras submetidas à digestão péptica, 21 (30,0%) mostraram-se positivas e para aquelas que não sofreram este tratamento, 25 (35,71%) reagiram positivamente. Não houve diferença significativa entre os dois tratamentos. Os resultados obtidos indicam que a linguiça suína frescal provavelmente tem pouca importância como fonte de infecção para a toxoplasmose humana, na região estudada. No entanto, o elevado índice de amostras positivas na reação de PCR demonstra que o parasita pode estar presente, porém é inviabilizado pela ação do sal adicionado ao tempero das linguiças. Palavras-chave: Toxoplasma, linguiça, PCR, isolamento. / Occurrence of the protozoan Toxoplasma gondii was studied in 70 samples of fresh swine sausages commercialized in the city of Botucatu-SP, to evaluate the importance of this kind of food in toxoplasmosis epidemiology. For that, it was proceeded the agent isolation in mice and the polymerase chain reaction (PCR) to amplify the genetic material. The PCR was made with digested samples and no digested by pepsin. The parasite wasn't isolated from any sample, however, 33 (47.14%) samples were positive to the PCR. From digested samples, 21 (30.00%) were positives and from no digested samples 25 (35.71%) showed positives. There wasn't significant difference between the two treatments. Results indicate that swine sausages probably have a little importance as infection source of human toxoplasmosis in the studied region. Nevertheless, the high amount of PCR positives samples show that the parasite may be present, but it is inactivated by the salt added to sausages seasoning. Key words: Toxoplasma, sausage, PCR, isolation.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:51:38Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4502_1.pdf: 2446634 bytes, checksum: dcb2ca8b11d13cdeb70f90c25cafa768 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2005 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Toxoplasma gondii é um parasita unicelular responsável pela toxoplasmose, doença de alta gravidade em pacientes imunodeprimidos devido ao seu caráter oportunista. Os fármacos empregados no tratamento levam a severos efeitos adversos. Neste cenário, faz-se urgente à descoberta de novas substâncias com potencial atividade anti-T. gondii. A enzima ribonucleotídeo redutase, vem sendo relacionada como possível alvo quimioterapêutico. As tiossemicarbazonas, por sua vez, apresentam comprovada eficácia na inibição desta enzima. Neste sentido, sintetizamos uma série de tiossemicarbazonas e derivados de 4-tiazolidinonas e avaliamos seu potencial contra T. gondii. As tiossemicarbazonas (3a 3j) foram preparadas a partir de nitro-benzaldeídos e tiossemicarbazidas substituídas, em etanol sob refluxo e purificadas por lavagem com solvente apropriado. Na segunda etapa, as tiossemicarbazonas foram ciclizadas utilizando o anidrido maléico para formar as 4-tiazolidinonas (4a 4j). Todas as estruturas foram confirmadas por RMN 1H, 13C e IV. Quanto à atividade biológica, células Vero foram infectadas com taquizoítas de T. gondii por 24 h, e após esse período, incubadas com as substâncias sintetizadas por mais 24 horas. Todas as substâncias reduziram drasticamente a percentagem de células Vero infectadas após o tempo de incubação, bem como o número de parasitas intracelulares, causando graves alterações morfológicas no parasita intracelular sem afetar a célula hospedeira, conforme observado por microscopia ótica e eletrônica. Dentre estas, as substâncias 3a, 3b, 4h e 4i mostraram os melhores resultados

Thesis advisor: Marc-Jan Gubbels / Toxoplasma gondii is an obligate intracellular protozoan parasite capable of invading virtually any nucleated host cell. It is known clinically as the causative agent of toxoplasmosis, a disease that can have disastrous consequences for patients with an impaired immune system or for vertically infected fetuses. Currently available treatments for toxoplasmosis are lacking in long-term efficacy while none target the dormant stage formed by the parasite during infection. Toxoplasmosis results from unchecked completion of the lytic cycle. This cycle is driven by the calcium-dependent processes of host cell invasion and egress. Following a spike in cytoplasmic calcium, apically localized organelles, the micronemes and rhoptries, will secrete their contents and thereby facilitate these events. While much of the signaling pathway leading to microneme secretion is known, there are question marks surrounding microneme trafficking and membrane fusion. Mammalian Ferlins, C2-domain containing proteins, are well-known for facilitating trafficking and membrane fusion events in a calcium-dependent manner. Of the three Ferlin family proteins encoded by T. gondii, FER1 is studied in this thesis. Conditional FER1 overexpression induced premature egress due to an untriggered burst of microneme secretion. Additionally, live imaging micronemes in FER1 overexpressing parasites suggested an additional role for FER1 in trafficking of microneme organelles. Taken together, these data support a role for FER1 in microneme trafficking and the membrane fusion event driving their exocytosis, which are essential for egress, invasion and the successful completion of the lytic cycle. / Thesis (MS) — Boston College, 2021. / Submitted to: Boston College. Graduate School of Arts and Sciences. / Discipline: Biology.

Indiana University-Purdue University Indianapolis (IUPUI) / Toxoplasma gondii is an intracellular parasite that causes persistent, lifelong infection in one-third of humans worldwide. The parasite converts from a lytic, actively replicating form (tachyzoite) into a latent tissue cyst form (bradyzoite) that evades host immunity and is impervious to current drugs. While acute infection can be life threatening to immunosuppressed individuals, chronic infection has been linked to behavioral changes in rodents and neurological disease in humans. Notably, chronic infection in mice leads to hyperactivity in an open field. Whether these behavioral changes are due to parasite manipulation of the host or the host response to infection remains an outstanding question. We have previously shown that the anti-hypertensive drug guanabenz reduces Toxoplasma cyst burden in the brains of BALB/c mice, providing a means to examine whether brain cyst depletion reverses behavioral changes. We used two mouse strains (BALB/c and C57BL/6) differing in their susceptibility to infection. Following drug treatment of chronically infected mice, locomotor activity in an open field was assessed. In both mouse strains, the increased hyperactivity seen during chronic infection returned to normal levels following guanabenz treatment. Guanabenz reduced brain cyst burden ~70% in BALB/c mice as expected, but it increased cyst burden 49% in C57BL/6 mice. Examination of the brains showed that guanabenz decreased inflammation and perivascular cuffing in both infected mouse strains. Our study shows for the first time that it is possible to reverse a key behavioral change associated with chronic Toxoplasma infection. Surprisingly, the rescue from parasite-induced hyperactivity correlates with a decrease in neuroinflammation instead of cyst counts, suggesting that some behavioral changes arise from host responses to infection rather than a parasite-driven process. / 2022-03-10