Submitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2017-01-13T10:53:51Z No. of bitstreams: 2 Tese - Marc Alexandre Duarte Gigonzac - 2016.pdf: 12763622 bytes, checksum: 3479eadda35402525c2387337a3a0d69 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-01-16T10:58:58Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Marc Alexandre Duarte Gigonzac - 2016.pdf: 12763622 bytes, checksum: 3479eadda35402525c2387337a3a0d69 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-16T10:58:58Z (GMT). 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In the present study, a methodological proposal for the molecular diagnosis of X-Fragile Syndrome was developed from the methylation-specific triple amplification of the promoter region of the FMR1 gene combined with capillary electrophoresis. Thirty-four patients with clinical indication of SXF were referred to a laboratory of the public health network. After extraction and quantification of the DNA, the samples were amplified in an optimized protocol and the products submitted to 36cm capillary electrophoresis to verify the amount of CGG repeats and the degree of DNA methylation of each sample. Pre-mutation (3%) and six complete mutations (18%) were detected, all of which revealed a high degree of methylation. Considering the clinical signs commonly presented, the patients were also analyzed for the occurrence of Autism Spectrum Disorder (ASD), which shadowing and overlapping the SXF, verifying that 100% of the individuals with complete mutation presented the phenotype. Thus, it was possible to observe small behavioral differences in the patients analyzed, indicating a lighter clinical picture regarding aspects of social interaction and stereotypies. Thus, the new methodological proposal allows to effectively determine the CGG trinucleotide expansions in FMR1 allowing an assertive diagnosis of SXF for the families of patients attended in the public health network in Goiás. / A Síndrome do X-Frágil (SXF) é a principal causa de deficiência intelectual herdável no mundo e a segunda de etiologia genética, com uma prevalência estimada de 1/4000 homens e 1/8000 mulheres. O mecanismo molecular mais comum na SXF é decorrente de alterações na expressão do gene FMR1, localizado em Xq27.3, devido a expansões trinucleotídicas CGG na região promotora e subsequente metilação do gene. Apesar de apresentar achados clínicos consistentes, os mesmos não são exclusivos, e a existência de portadores de alteração no gene FMR1 sem manifestações clínicas aparentes impossibilitam o diagnóstico da SXF baseado apenas no exame físico. No presente estudo foi desenvolvido uma proposta metodológica para o diagnóstico molecular da Síndrome do X-Frágil a partir da amplificação tripla metilação-específica da região promotora do gene FMR1 combinada a eletroforese em capilar. Foram utilizados 34 pacientes com indicação clínica de SXF encaminhados para um laboratório da rede pública de saúde. Após extração e quantificação do DNA, as amostras foram amplificadas em protocolo otimizado e os produtos submetidos a eletroforese em capilar de 36cm para verificar a quantidade de repetições CGG e o grau de metilação do DNA de cada amostra. Foram detectadas uma pré-mutação (3%) e seis mutações completas (18%), sendo que todas estas últimas revelaram um alto grau de metilação. Considerando os sinais clínicos comumente apresentados, os pacientes foram também analisados para a ocorrência do Transtorno do Espectro do Autismo (TEA), que sombreia e se sobrepõe à SXF, verificando que 100% dos indivíduos com mutação completa apresentaram o fenótipo. Foi possível observar pequenas diferenças comportamentais nos pacientes analisados, indicando um quadro clínico mais leve quanto aos aspectos da interação social e das estereotipias. Sendo assim, a nova proposta metodológica permite determinar de forma eficaz as expansões trinucleotídicas CGG no FMR1 permitindo um diagnóstico assertivo da SXF para as famílias de pacientes atendidos na rede pública de saúde em Goiás.

O gene DMPK (Dystrophia Myotonica-Protein Kinase) humano está localizado no locus 19q13.3, sendo dividido em 15 éxons, com uma região polimórfica de repetições CTG em sua região 3’ não traduzida. Indivíduos normais apresentam de 5 a 34 repetições CTG. Indivíduos com alelos com mais de 50 repetições CTG apresentam distrofia miotônica tipo 1 (DM1), uma doença multissistêmica de herança autossômica dominante. Os sintomas incluem miotonia, fraqueza muscular progressiva, hipogonadismo, entre outros. Neste trabalho, a distribuição dos alelos do gene DMPK em indivíduos controles foi estabelecida em duas populações (brasileira e peruana), por meio de PCR convencional utilizando iniciadores fluorescentes e repeat-primed PCR. O protocolo confirmou 93 casos não relacionados de DM1 (76 brasileiros e 17 peruanos) após a análise de 224 amostras com suspeita clínica. A distribuição e as frequências dos alelos normais foram estabelecidas em ambas as populações e os alelos mais frequentes foram 5 (frequência = 0,326) e 13 (frequência = 0,545) repetições de CTG em brasileiros e peruanos, respectivamente. A frequência de alelos normais grandes (aqueles com mais de 45 repetições CTGs) foi de 9% e 4% em brasileiros e peruanos, respectivamente. Neste trabalho é descrita a análise molecular de DM1 na maior coorte brasileira até o momento e é o primeiro trabalho em que foi analisada a população peruana. A distribuição e a frequência de alelos normais também foram estabelecidas e alelos mutáveis foram detectados entre os indivíduos controles. / The human DMPK (Dystrophia Myotonica-Protein Kinase) gene is located at 19q13.3 locus, being organized into 15 exons, with a polymorphic tract of CTG repeats in its 3' untranslated region. Normal individuals have 5-34 CTG repeats. Individuals carrying alleles with more than 50 CTG repeats have myotonic dystrophy type 1 (DM1), a multisystemic disease of autosomal dominant inheritance. Symptoms include myotonia, progressive muscle weakness, hypogonadism, among others. Disease prevalence is variable among populations and may be related to the frequency of large normal alleles (those with more than 18 CTG repeats). Here we determined here the distribution of alleles of DMPK gene in healthy and DM1 patients in Brazilian and Peruvian populations, through conventional PCR using fluorescent primers and repeat-primed PCR. This protocol confirmed 93 unrelated cases of DM1 (76 Brazilians and 17 Peruvians) following the analysis of 224 samples with clinical suspicion. Distribution and frequencies of normal alleles were also established in both populations and the most frequent alleles were 5 (frequency of 0.326) and 13 (frequency of 0.545) CTG repeats in Brazilians and Peruvians, respectively. Frequency of large normal alleles (those with more than 45 CTG repeats) was established to be 9% and 4% in Brazilians and Peruvians, respectively. This report describes molecular analysis of DM1 in the largest Brazilian cohort so far, and is the first to report any data in the Peruvian population. Distribution and frequency of normal alleles were also established and mutable alleles were detected among controls.

O gene DMPK (Dystrophia Myotonica-Protein Kinase) humano está localizado no locus 19q13.3, sendo dividido em 15 éxons, com uma região polimórfica de repetições CTG em sua região 3’ não traduzida. Indivíduos normais apresentam de 5 a 34 repetições CTG. Indivíduos com alelos com mais de 50 repetições CTG apresentam distrofia miotônica tipo 1 (DM1), uma doença multissistêmica de herança autossômica dominante. Os sintomas incluem miotonia, fraqueza muscular progressiva, hipogonadismo, entre outros. Neste trabalho, a distribuição dos alelos do gene DMPK em indivíduos controles foi estabelecida em duas populações (brasileira e peruana), por meio de PCR convencional utilizando iniciadores fluorescentes e repeat-primed PCR. O protocolo confirmou 93 casos não relacionados de DM1 (76 brasileiros e 17 peruanos) após a análise de 224 amostras com suspeita clínica. A distribuição e as frequências dos alelos normais foram estabelecidas em ambas as populações e os alelos mais frequentes foram 5 (frequência = 0,326) e 13 (frequência = 0,545) repetições de CTG em brasileiros e peruanos, respectivamente. A frequência de alelos normais grandes (aqueles com mais de 45 repetições CTGs) foi de 9% e 4% em brasileiros e peruanos, respectivamente. Neste trabalho é descrita a análise molecular de DM1 na maior coorte brasileira até o momento e é o primeiro trabalho em que foi analisada a população peruana. A distribuição e a frequência de alelos normais também foram estabelecidas e alelos mutáveis foram detectados entre os indivíduos controles. / The human DMPK (Dystrophia Myotonica-Protein Kinase) gene is located at 19q13.3 locus, being organized into 15 exons, with a polymorphic tract of CTG repeats in its 3' untranslated region. Normal individuals have 5-34 CTG repeats. Individuals carrying alleles with more than 50 CTG repeats have myotonic dystrophy type 1 (DM1), a multisystemic disease of autosomal dominant inheritance. Symptoms include myotonia, progressive muscle weakness, hypogonadism, among others. Disease prevalence is variable among populations and may be related to the frequency of large normal alleles (those with more than 18 CTG repeats). Here we determined here the distribution of alleles of DMPK gene in healthy and DM1 patients in Brazilian and Peruvian populations, through conventional PCR using fluorescent primers and repeat-primed PCR. This protocol confirmed 93 unrelated cases of DM1 (76 Brazilians and 17 Peruvians) following the analysis of 224 samples with clinical suspicion. Distribution and frequencies of normal alleles were also established in both populations and the most frequent alleles were 5 (frequency of 0.326) and 13 (frequency of 0.545) CTG repeats in Brazilians and Peruvians, respectively. Frequency of large normal alleles (those with more than 45 CTG repeats) was established to be 9% and 4% in Brazilians and Peruvians, respectively. This report describes molecular analysis of DM1 in the largest Brazilian cohort so far, and is the first to report any data in the Peruvian population. Distribution and frequency of normal alleles were also established and mutable alleles were detected among controls.

O gene DMPK (Dystrophia Myotonica-Protein Kinase) humano está localizado no locus 19q13.3, sendo dividido em 15 éxons, com uma região polimórfica de repetições CTG em sua região 3’ não traduzida. Indivíduos normais apresentam de 5 a 34 repetições CTG. Indivíduos com alelos com mais de 50 repetições CTG apresentam distrofia miotônica tipo 1 (DM1), uma doença multissistêmica de herança autossômica dominante. Os sintomas incluem miotonia, fraqueza muscular progressiva, hipogonadismo, entre outros. Neste trabalho, a distribuição dos alelos do gene DMPK em indivíduos controles foi estabelecida em duas populações (brasileira e peruana), por meio de PCR convencional utilizando iniciadores fluorescentes e repeat-primed PCR. O protocolo confirmou 93 casos não relacionados de DM1 (76 brasileiros e 17 peruanos) após a análise de 224 amostras com suspeita clínica. A distribuição e as frequências dos alelos normais foram estabelecidas em ambas as populações e os alelos mais frequentes foram 5 (frequência = 0,326) e 13 (frequência = 0,545) repetições de CTG em brasileiros e peruanos, respectivamente. A frequência de alelos normais grandes (aqueles com mais de 45 repetições CTGs) foi de 9% e 4% em brasileiros e peruanos, respectivamente. Neste trabalho é descrita a análise molecular de DM1 na maior coorte brasileira até o momento e é o primeiro trabalho em que foi analisada a população peruana. A distribuição e a frequência de alelos normais também foram estabelecidas e alelos mutáveis foram detectados entre os indivíduos controles. / The human DMPK (Dystrophia Myotonica-Protein Kinase) gene is located at 19q13.3 locus, being organized into 15 exons, with a polymorphic tract of CTG repeats in its 3' untranslated region. Normal individuals have 5-34 CTG repeats. Individuals carrying alleles with more than 50 CTG repeats have myotonic dystrophy type 1 (DM1), a multisystemic disease of autosomal dominant inheritance. Symptoms include myotonia, progressive muscle weakness, hypogonadism, among others. Disease prevalence is variable among populations and may be related to the frequency of large normal alleles (those with more than 18 CTG repeats). Here we determined here the distribution of alleles of DMPK gene in healthy and DM1 patients in Brazilian and Peruvian populations, through conventional PCR using fluorescent primers and repeat-primed PCR. This protocol confirmed 93 unrelated cases of DM1 (76 Brazilians and 17 Peruvians) following the analysis of 224 samples with clinical suspicion. Distribution and frequencies of normal alleles were also established in both populations and the most frequent alleles were 5 (frequency of 0.326) and 13 (frequency of 0.545) CTG repeats in Brazilians and Peruvians, respectively. Frequency of large normal alleles (those with more than 45 CTG repeats) was established to be 9% and 4% in Brazilians and Peruvians, respectively. This report describes molecular analysis of DM1 in the largest Brazilian cohort so far, and is the first to report any data in the Peruvian population. Distribution and frequency of normal alleles were also established and mutable alleles were detected among controls.