Os tripanosomatídeos utilizam aminoácidos, particularmente a prolina, como fontes de carbono e energia. Essas moléculas estão também envolvidas em outros processos fisiológicos como a metaciclogênesis, osmorregulação, ou resistência a diferentes condições de estresse. Duas enzimas, prolina desidrogenase e <font face=\"Symbol\">D1-pirrolina-5-carboxilato desidrogenase catalisam a oxidação de prolina a glutamato. Embora a presença dessa via em algumas espécies do gênero Leishmania seja amparada por dados do projeto genoma, ainda não ha evidências bioquímicas de sua atividade. Nesse trabalho focamos alguns aspectos dessa via em L. (L.) amazonensis. Demonstramos a presença das ORFs de ambos os genes dessa via (que denominamos LaPRODH e LaP5CDH) e dos seus produtos. Constatamos que ambas enzimas são mitocondriais. Também demonstramos que esses genes complementam cepas de Saccharomyces cerevisiae mutantes para <font face=\"Symbol\">Dput1 ou <font face=\"Symbol\">Dput2, ortólogos de LaPRODH e LaP5CDH respectivamente. Em conjunto, os dados obtidos sugerem a presença e funcionalidade da via prolina-glutamato em L. (L.) amazonensis. / Trypanosomatids use amino acids, particularly proline, as a carbon and energy sources. In addition, they are involved in other physiological processes such as metacyclogenesis, osmorregulation or resistance to different stress conditions. Two enzymes, proline dehydrogenase and <font face=\"Symbol\">D1-pyrroline-5-carboxylate dehydrogenase catalyze the oxidation from proline to glutamate. Although, the presence of this pathway in some species of the Leishmania is supported by the genome project, no biochemical data on their activities were shown up to now. In this work we focus on some aspects of the proline-glutamate pathway in L. (L.) amazonensis. We demonstrate the presence of ORFs for both genes (which we called LaPRODH and LaP5CDH) and their products. We also showed that both enzymes are mitochondrial. We could also demonstrate that both genes complement Saccharomyces cerevisiae strains mutant for <font face=\"Symbol\">Dput1 or <font face=\"Symbol\">Dput2, orthologs of LaPRODH and LaP5CDH respectively. Taken together, these data show the presence and functionality of the proline-glutamate pathway in L. (L.) amazonensis.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:usp.br/oai:teses.usp.br:tde-13022012-095914 |
| Date | 28 September 2011 |
| Creators | Cordeiro, Jean Douglas Ferraz |
| Contributors | Silber, Ariel Mariano |
| Publisher | Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP |
| Source Sets | Universidade de São Paulo |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | Dissertação de Mestrado |
| Format | application/pdf |
| Rights | Liberar o conteúdo para acesso público. |
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