[pt] Métodos analíticos foram desenvolvidos para a determinação seletiva de
alcalóides de interesse farmacológico. Com o objetivo de permitir a determinação
seletiva de camptotecina (CPT) em formulações farmacêuticas de irinotecana
(CPT-11) ou de topotecana (TPT), dois métodos espectrofluorimétricos e um
eletroforético, com detecção por fotometria de absorção, foram propostos. Os
métodos espectrofluorimétricos permitiram a determinação seletiva de CPT
usando um ajuste de alcalinidade do meio associado ao uso de varredura
sincronizada ou de derivada de 2ª ordem. Alternativamente, o procedimento de
derivação fotoquímica (com otimização com planejamento composto central)
eliminou completamente as interferências no sinal do CPT. Nas condições
otimizadas, a espectrofluorimetria permitiu a determinação de CPT em misturas
contendo até 50 vezes mais TPT ou contendo até 10 vezes mais CPT-11. A
resposta analítica indicou faixas lineares de trabalho e homoscedasticidade. O
limite de detecção (LD) foi da ordem de 10(-10) mol L(-1) para o método baseado na
derivação fotoquímica e uma ordem de grandeza a menos para os métodos sem
derivatização fotoquímica. Testes foram feitos em medicamentos a base de TPT
e de CPT-11 e as recuperações ficaram em torno de 100%. Esses resultados
foram comparáveis aos obtidos com método de referência (HPLC). O estudo de
incerteza de medição por fluorimetria indicou que a maior contribuição do
processo era a preparação de solução por avolumação. A contribuição dessa
fonte foi minimizada pela preparação de solução por meio de ajuste de massa,
causando um grande impacto na redução da incerteza expandida. O método
baseado na eletroforese eletrocinética capilar micelar (MEKC) permitiu a
quantificação simultânea de TPT, CPT e CPT-11. Para conseguir o ajuste final
das melhores condições, foi feito um estudo univariado seguido de um
planejamento composto central. Para se melhorar a sensibilidade da detecção
em até 76 vezes, foi utilizado um processo de pré-concentração no capilar por
modo de empilhamento e uma cela de caminho óptico alongado. A escolha do
tampão borato (pH 8,5) contendo SDS e acetonitrila permitiu condições robustas 7
de sinal de tempo de migração. A resposta analítica mostrou faixa linear e
homoscedatidade, além de repetitividade em torno de 3,5%. O LD foi da ordem
de 10(-7) mol L(-1) (TPT) e 10(-8) mol L(-1) (CPT-11 e CPT). Testes de recuperação em
amostras de saliva fortificadas foram feitos e comparados com os obtidos por um
método de referência (HPLC) de forma a mostrar a exatidão adequada para o
método proposto. Para a determinação seletiva de B-carbolinas, a fosforimetria
em substrato sólido (SSRTP) foi utilizada. O ajuste do átomo pesado seletivo e a
aplicação de técnica de varredura sincronizada e de 2ª derivada aumentaram o
grau de seletividade, pois induziu fosforescência dos analitos de interesse na
amostra e melhorou a resolução espectral em relação aos interferentes. O ajuste
da quantidade de HgCl2 (0,81 mg) permitiu a determinação seletiva de harmol na
presença de quantidades até 10 vezes maiores de harmine, harmane,
norharmane e harmaline. O método SSRTP seletivo proposto para determinação
de harmol foi comparado com o resultado obtido por um método de referência
adaptado baseado em MEKC, o qual também mostrou sua capacidade para a
determinação seletiva de harmol na presença dos interferentes. LD absoluto na
ordem de ng e comportamento linear da resposta analítica foram obtidos. No
caso do método analítico desenvolvido para a determinação de harmane na
presença de harmine em chás, estudos de otimização mostraram o AgNO3 como
sal de átomo pesado no substrato, solução de amostra em pH 11 e medições
feitas em 322 nm do espectro de 2ª derivada da varredura sincronizada
((delta)(lambda) = 109 nm). Testes de interferência mostraram que a matriz do chá não tem
influência no sinal do harmane e que nas / [en] Analytical methods were developed for the selective determination of
alkaloids of pharmacological interest. Aiming the selective determination of
camptothecin (CPT) in irinotecan (CPT-11) or topotecan (TPT) based
pharmaceutical formulations, two spectrofluorimetric methods and one
electrophoretic method with absorciometic detection were proposed. The
spectrofluorimetric method allowed the determination of CPT using the
adjustment of the alkalinity of the sample solution associated with the use of
synchronous scanning or 2nd order spectral derivation. Alternativelly, the
photochemical derivatization (optimized by central composite design) completely
eliminated interferences on the CPT signal. The optimized conditions allowed the
spectrofluorimetric determination of CPT in mixtures containing up to 50 times
more TPT or up to 10 times more CPT-11. The analytical response presented
linear working ranges and homocedasticity. The limit of detection (LD) was in the
order of 10(-10) mol L(-1) for the method based on photochemical derivatization and
one order of magnitude higher for the methods without photochemical
derivatization. Tests were made using TPT and CPT-11 based comercial drugs
and recoveries were around 100%. Such results were comparable to those
obtained with the reference method (HPLC). A study of fluorimetric measurement
uncertainty indicated that the greatest contribution in the process was the
preparation of solution by volume. The contribution from this source was
minimized by the preparation of solutions by weight measurement which caused
a major impact in reducing the expanded uncertainty. The method based on
micellar electrokinetic capillary electrophoresis (MEKC) allowed the simultaneous
quantification of TPT, CPT and CPT-11. To achieve final adjustment of
conditions, an univariated study was made followed by a central composite
design. To improve the sensitivity of detection up to 76 times, a pre-concentration
in the capillary by the normal stacking mode was used along with an extended
optical path cell. The choice of borate buffer (pH 8.5) containing SDS and
acetonitrile implicated in robust conditions of signal and migration times. The
response showed analytical linear working range and homocedasticity, and
9 repeatability of around 3.5%. The LD was in the order of 10(-7) mol L(-1) (TPT) and
10(-8) mol L(-1) (CPT-11 and CPT). Recovery tests using spiked saliva samples were
made and compared with those obtained by a reference method (HPLC) to show
the appropriated accuracy for the proposed method. For the selective
determination of B-carbolines, solid surface room temperature phosphorimetry
(SSRTP) was used. The adjustment of the selective heavy atom and the
application of synchronized scanning technique and 2nd order spectral derivation,
increased the degree of selectivity, because induced phosphorescence of the
analytes of interest in the sample and improved spectral resolution. The
adjustment of the amount of HgCl2 (0.81 mg) allowed the selective determination
of harmol in the presence of up to 10 times higher amounts of harmine, harman,
harmaline and norharman. The method proposed for selective SSRTP
determination of harmol was compared with the results obtained by an adapted
method based on MEKC, which also showed its ability to determine harmol in the
presence of interferences. The absolute limit of detection in the ng order and
linear behavior of the analytical response was obtained. For the analytical
method developed for the determination of harman in the presence of harmine in
teas, optimization studies indicated the following conditions: AgNO3 as the heavy
atom salt deposited on the substrate, sample solution at pH 11 and
measurements made at 322 nm of the 2nd order derivated synchronous scanning
spectrum ((delta)(lambda) = 109 nm). Tests showed that, in optimized conditions, the tea
matrix had no influence on the harman signal and and that harman could be
determined in samples containing harmine in concentrations up to two times
higher. The
| Identifer | oai:union.ndltd.org:puc-rio.br/oai:MAXWELL.puc-rio.br:14378 |
| Date | 14 October 2009 |
| Creators | FLAVIA FERREIRA DE CARVALHO MARQUES |
| Contributors | RICARDO QUEIROZ AUCELIO |
| Publisher | MAXWELL |
| Source Sets | PUC Rio |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | TEXTO |
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