Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A fatty high diet causes inflammation in the hypothalamus, mainly in the neurons that control
satiety and thermogenesis. Moreover, activation of apoptosis via TLR4 (toll like receptor 4) is
observed in conjunction with inflammatory condition. The neuronal death is a process that
involves the release of cytokines and glial activation. The microglia have immune function in
nervous tissue, but the astrocytes, the main component of glia, is more involved in synaptic
plasticity and chronic responses of the Central Nervous System. Moreover, these cells in the
hypothalamus, which is the center of energy metabolism control, have specific characteristics,
with receptors for fatty acids, glucose and leptin. In this context, we investigated the response
of astrocytes after in vitro treatment with fatty acids on cortical and hypothalamic astrocytes.
To that end, we made the dissociation of the cortex and hypothalamus of Swiss mice (1-2
days) and the cells were plated for procedures. Treatments were performed with different
doses of stearate (100μM, 200μM and 2mM) and palmitate (200μM, 500μM and 5mM) for
one week. Immunocytochemistry was performed with anti-GFAP (evaluates the astroglial
reactivity) and anti-NFB (transcription factor that participates in the TLR-4 pathway) and
TNF- dosage by ELISA. Dosage of 200μM medium were reserved after 3 days of contact
with astrocytes that were treated with palmitate or stearate, for obtaining conditioned
medium that were stocked for neurons culture treatment. Cultures of hypothalamic neurons
(lineage CLU189) were treated for 3 or 6 days with conditioned medium, in sequence, in this
cultures, were performed immunocytochemistry with caspase3 (apoptosis marker) and anti-
Ki-67 (cell proliferation marker). The immunostaining was quantified and statistically treated
for comparison of experimental and control groups. The results showed that treatment with
stearate enhances the expression of GFAP and NFB only in astrocytes from the
hypothalamus. The TNF- was upregulated in conditionated medium used for treatment of
hypothalamic cells, however this augment did not interfere with apoptosis rate in CLU 189
cultures in first three days of contact with conditionated medium and, in the sixth day, in
comparison to conditioned control medium only in astrocytes. Such results showed the
protection provided for substances had released by reactived astrocytes from hypothalamus.
Also, our results showed that neurons could respond to fatty acid without other cell
intervention. / Uma dieta rica em gorduras provoca inflamação no hipotálamo, principalmente nos neurônios
que controlam a saciedade e termogênese. Além disso, a ativação de apoptose via TLR4 (toll
like receptor 4) também foi observada. A morte neuronal é um processo que envolve a
ativação da glia e liberação de citocinas. A microglia tem a função imune no tecido nervoso,
mas os astrócitos, o componente mais abundante das células gliais, está mais envolvido com a
plasticidade sináptica e respostas crônicas do Sistema Nervoso Central. Além disso, essas
células, no hipotálamo, que é o centro controlador do metabolismo energético, têm
características específicas, apresentando receptores para ácidos graxos, glicose e leptina.
Neste contexto, investigamos a reação dos astrócitos após o tratamento com ácidos graxos em
culturas de astrócitos hipotalâmicos e corticais. Para tanto, foi feita a dissociação do córtex e
hipotálamo de camundongos Swiss (1-2 dias) e os astrócitos foram plaqueados para os
experimentos. Essas culturas foram tratadas com doses diferentes de estereato (100μM,
200μM e 2mM) e palmitato (200μM, 500μM e 5mM) durante uma semana. Foi realizada a
imunocitoquímica com o anticorpo anti-GFAP (avalia a reatividade dos astrócitos) e anti-
NFB (fator de transcrição que participa da via de ativação TLR-4) e a dosagem de TNF-
por ELISA. O meio na dose de 200μM foi recolhido após 3 dias de contato com astrócitos
tratados com estereato ou palmitato, para a obtenção de meio condicionado, o qual foi
estocado para tratamento de culturas de neurônios. Foram utilizadas culturas de neurônios
hipotalâmicos (linhagem CLU189) para o tratamento, por 3 ou 6 dias, com o meio
condicionado, e posteriormente, nessas culturas, foi realizada a imunocitoquímica com os
anticorpos anti-caspase3 (avalia morte celular por apoptose) e anti-ki-67 (marcador de célula
em proliferação). As imunomarcações foram quantificadas e tratadas estatisticamente para
comparação dos grupos experimentais e controles. Os resultados mostraram que o tratamento
com estereato intensifica a expressão de GFAP e NFB somente em astrócitos do hipotálamo.
O TNF- estava aumentado no meio condicionado usado no tratamento de células do
hipotálamo, mas esse aumento não interferiu na apoptose nas culturas de CLU189 nos 3
primeiros dias para os meios condicionados, e no 6º dia, em relação ao meio condicionado
somente em astrócitos. Mostrando certa proteção fornecida por substâncias produzidas pelos
astrócitos hipotalâmicos. Ainda, nossos dados também mostraram que os neurônios
respondem, sem mediação de outro tipo de célula, ao tratamento com ácido graxo. / Mestre em Biologia Celular e Estrutural Aplicadas
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/urn:repox.ist.utl.pt:RI_UFU:oai:repositorio.ufu.br:123456789/12399 |
| Date | 28 April 2014 |
| Creators | Melo, Nayara de Freitas Martins |
| Contributors | Zanon, Renata Graciele, Oliveira, Patrícia Fidelis de, Simões, Gustavo Ferreira |
| Publisher | Universidade Federal de Uberlândia, Programa de Pós-graduação em Biologia Celular e Estrutural Aplicadas, UFU, BR, Ciências Biomédicas |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFU, instname:Universidade Federal de Uberlândia, instacron:UFU |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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