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Previous issue date: 2009 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / O interferon beta (IFN-β) é uma proteína globular consistindo de cinco cadeias α-helicais e como biofármaco é principalmente utilizado para o tratamento da esclerose múltipla (EM). A EM é uma doença até o momento sem cura e das terapias imunomodulatórias disponíveis para melhoria do quadro da EM, o IFN-βé o biofármaco disponível mais bem caracterizado. Duas formas do IFN-βhumano recombinante são clinicamente utilizadas: IFN-β-1a, produzida em células de ovários de hamster chinês (CHO), similar ao IFN-βnativo; e a
forma IFN-β-1b, produzida em sistema de Escherichia coli, não possuindo moléculas de
açúcar na cadeia polipeptídica expressa.
Testes para detecção e quantificação dos IFNs são principalmente do tipo ELISA
sendo cruciais nos processos de desenvolvimento, monitoramento e no controle de qualidade,
devido principalmente a relação sensibilidade/especificidade necessária. Os anticorpos
monoclonais (Mabs) de alta afinidade, produzidos para estes testes são extremamente
sensíveis e específicos e representam uma forma adequada de padronização de um ELISA
para detecção e quantificação do IFN-β.
Neste estudo, quatorze MAbs anti-IFN-βforam obtidos através da imunização
genética e parcialmente caracterizados. Todos reconheceram no ELISA o IFN-βhumano
recombinante. Os MAbs anti-IFN-βidentificados como AE9, AG8, AE6, AH7, AA11, AB1 e
AA4 foram os mais reativos. Todos os quatorze MAbs foram isotipados e apresentaram um
perfil com simultânea expressão tanto de IgM quantode IgG2a. Este perfil não-usual foi
confirmado pela reação em cadeia da polimerase precedida da transcrição reversa específica
para IgG e IgM. Somente um MAb denominado AG8 reagiu em Western-blotcom a isoforma
monomérica de 18 KDa do IFN-β. Este estudo representou o primeiro passo em direção ao
propósito de obtenção do ELISA descrito acima. / Beta interferon (IFN-β) is a globular protein consisting of five α-helical chains. As biopharmaceutical product it is mainly used for treatment of multiple sclerosis (MS). MS is a health disorder with no cure available so far. Its symptoms can be alleviated with immunomodulatory drugs. IFN-βis the most well characterized biopharmaceutical product in terms of structure and side affects. Two forms of human recombinant IFN-βare used in the
treatment of MS: IFN-β-1a, expressed in Chinese hamster ovary cells, is similar to native IFN-β; and IFN-β-1b expressed in the Escherichia coli expression system. IFN-β-1b does not present glycosilation and therefore differs from native IFN-β. Tests to detect and to quantify IFNs are mainly enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA). These tests are reliable and can be used in biopharmaceutical product development
processes. Monitoring and quality control of IFN-βare quite important, mainly because of the physical and chemical nature of IFN-βas well the necessary sensitivity and specificity that allow for a precise characterization of the final product. Monoclonal antibodies (MAbs) used
in ELISA to detect and quantify IFN-βusually present high affinity and specificity.
In this study, fourteen MAbs against human recombinant IFN-βwere obtained by
genetic immunization and partially characterized. All antibodies recognized human IFN-β. The anti-IFN-βMAbs AE9, AG8, AE6, AH7, AA11, AB1 and AA4 were the most reactives. All fourteen MAbs were subjected to antibody isotype characterization and presented a simultaneous expression of both IgM and IgG2a. Thisunusual profile was confirmed by specific reverse transcription polymerase chain reaction for IgG and IgM messenger RNA. Only MAb AG8 recognized the 18 KDa isoform of IFN-β. This study represents the first step towards the development of the ELISA described above.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.arca.fiocruz.br:icict/5842 |
| Date | January 2009 |
| Creators | Oliveira, Carina Cantelli Pacheco de |
| Contributors | Senna, José Procópio Moreno, Peralta, José Mauro, Oelemann, Walter Martin Roland, Moraes e Souza, Márcia Terezinha Baroni de, Teixeira, Maria da Glória Martins |
| Publisher | Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos. |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, instname:Fundação Oswaldo Cruz, instacron:FIOCRUZ |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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