Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / A Esporotricose é uma infecção subaguda ou crônica causada pelo fungo Sporothrix
schenckii. A transmissão zoonótica pode ocorrer depois de arranhões ou mordidas de animais,
principalmente gatos, roedores e tatus. Até o momento, nenhuma vacina esta em uso para
esporotricose ou para qualquer infecção fúngica de importância médica, indicando a
necessidade de ampliar a investigação neste campo e explorar novas alternativas. O objetivo
deste estudo foi avaliar os efeitos da radiação gama em leveduras de S. schenckii, visando a
sua atenuação, para aplicação posterior de leveduras radioatenuadas no desenvolvimento de
uma vacina destinada a imunização de gatos e cães. As leveduras S. schenckii foram
cultivadas em meio sólido BHI (Infuso Cérebro e Coração) suplementados com tiamina e na
temperatura de 36oC. As culturas foram irradiadas com doses variando de 1,0 a 9,0 kGy. Após
cada dose foram avaliados a capacidade reprodutiva, a viabilidade, e o metabolismo de síntese
de proteínas. A avaliação da virulência foi realizada pela inoculação das leveduras irradiadas
em camundongos Balb/c imunossuprimidos e posterior recuperação de unidades formadoras
de colônias (UFCs). A integridade do DNA, a ocorrência de apoptose e de alterações ultraestruturais
também foram analisada nas leveduras radioatenuadas. Os resultados mostraram
uma redução de 6 ciclos log10 no número de UFCs recuperadas na dose de 6,0 kGy e a partir
de 8,0 kGy não foram recuperadas UFCs. A análise de viabilidade indicou que as leveduras
permaneceram viáveis até a dose de 9,0 kGy, a maior dose testada. As leveduras irradiadas
mantiveram a capacidade de síntese de proteínas, porém esta foi reduzida significarivamente
na dose de 9,0 kGy, quando avaliada 24 horas após a irradiação. Os ensaios de virulência
utilizando leveduras irradiadas com as doses de 7,0 e 9,0 kGy mostraram que não houve
recuperação de UFCs dos órgãos dos camundongos imunossuprimidos, indicando que as
células estavam atenuadas. O ensaio de integridade do DNA mostrou que com 7,0 kGy o
DNA das leveduras estava fragmentado. Nesta mesma dose foi verificada uma diferença
discreta, mas significativa, na ocorrência de apoptose entre as células irradiadas e controles 24
horas após a irradiação. Através da microscopia eletrônica de transmissão foram verificadas
alterações ultra-estruturais nas leveduras irradiadas com 7,0 kGy. Duas horas após a
irradiação as principais alterações verificadas foram a vacuolização e a perda de
homogeneidade do citoplasma. Após 24 horas, além destas alterações o citoplasma se mostrou
retraído e freqüentemente se descolando da parede celular. Nossos resultados indicaram que para as leveduras do S. schenckii, foi possível encontrar uma dose absorvida em que o agente
tem comprometida sua capacidade reprodutiva e perde a virulência, mantendo a sua
viabilidade, uma condição desejável para o desenvolvimento de uma vacina radioatenuada. / Sporotrichosis is a subacute or chronic infection caused by the fungus Sporothrix
schenckii. Zoonotic transmission can occur after scratches or bites of animals, mainly cats,
rodents, and armadillos. Up to the moment, no approved vaccine was reported for S. schenckii
or to any important pathogenic fungi infection in humans, indicating the need to expand the
research in this field and to explore new alternatives. The aim of this study was to evaluate the
effects of gamma radiation on the viability, metabolic activity and reproductive ability of S.
schenckii yeast cells for further studies on the development of a vaccine for immunization of
cats and dogs. The culture of S. schenckii, in solid medium, was irradiated at doses ranging
from 1.0 to 9.0 kGy. After each dose the reproductive capacity, viability and protein synthesis
were estimated. The results showed that a reduction of 6 log10 cycles in the number of
colonies was achieved at 6.0 kGy and after 8.0 kGy no colonies could be recovered. The
viability analysis indicated that yeast cells remained viable up to 9.0 kGy. The results of
protein synthesis analysis showed that the yeast cells, irradiated up to 9.0 kGy, were able to
synthesize proteins. But this ability was significantly reduced with 9.0 kGy, 24 h after
irradiation. The virulence assays using yeast irradiated with doses of 7.0 and 9.0 kGy showed
no CFUs recovery from tissues of immunosuppressed mice, indicating that the cells were
attenuated. The DNA integrity test showed that the DNA of 7.0 kGy irradiated yeast cells was
fragmented. At the same dose was verified a discrete but significant increase in the apoptose
occurrence in relation to controls 24 hours after the irradiation. By transmission electron
microscopy were observed ultrastructural changes in yeast irradiated with 7.0 kGy. Two hours
after irradiation the major changes were the vacuolization and the loss of homogeneity of the
cytoplasm. After 24 hours, apart from these changes, the cytoplasm was often retracted and
sometimes taking off from the cell wall. Our results indicated that for the yeast cells of S.
schenckii, it was possible to find an absorbed dose in which the fungus loses the virulence,
while maintaining the viability, a desirable condition for the development of a radioattenuated
yeast vaccine.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:bdtd.cdtn.br:90 |
| Date | 22 March 2010 |
| Creators | Camila Maria de Sousa Lacerda |
| Contributors | Antero Silva Ribeiro de Andrade, Suely Epsztein Grynberg, Alfredo Miranda Goes |
| Publisher | CNEN - Centro de Desenvolvimento da Tecnologia Nuclear, Belo Horizonte, CTRA - Programa de Pós-Graduação em Ciência e Tecnologia das Radiações, Minerais e Materiais, CDTN, BR |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações do CDTN, instname:Centro de Desenvolvimento da Tecnologia Nuclear, instacron:CDTN |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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