Bovine herpesvirus type 1 (BoHV-1) is an important pathogen of cattle and causes significant economic losses to livestock industry. Monoclonal antibodies (mAbs) represent useful tools for diagnostic and research purposes. Most mAbs produced against BoHV-1 are directed to glycoprotein gC (gC), an abundant and immunodominant envelope antigen. In the present study, antigens of a BoHV-1 strain defective in the gene coding for glycoprotein C was used to immunize BALB/c mice to produce mAbs with other protein specificities. After fusion and selection of 54 hybridomas resistant to the selective medium HAT, three hybridomas secreting mAbs directed to BoHV-1 antigens were obtained (1F1, 2H4, 4D7). The mAbs belong to the IgG2a isotype and reacted in an indirect fluorescent antibody assay (IFA) and indirect immunoperoxidase staining (IPX) of BoHV-1-infected cells at dilutions up to 1:640 (culture supernatant) and 1:20,000 (ascitic fluid). The three mAbs tested reacted with 14 isolates of respiratory and/or genital disease and with 17 isolates of neurological disease and showed variable level of neutralizing activity against the most of these isolates. The protein specificity of the mAbs could not be determined, because none of them reacted with viral proteins in western immunoblot. On the other hand, the three mAbs reacted in IFA with viral antigens of BoHV-1 and BoHV-5 mutant strains defective on gC, gE, gI and US9 genes, demonstrating that they are directed against other viral antigens. Because the high reaction titer and the wide range of reactivity, these mAbs have potential use in diagnostics techniques. Also, these mAbs may be useful to map conserved neutralizing epitopes in the envelope glycoproteins / O herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) é um dos principais patógenos de bovinos e causa perdas significativas para a bovinocultura. Anticorpos monoclonais (AcMs) se constituem em importantes ferramentas para o diagnóstico e pesquisa em diversos aspectos da biologia desse agente. A maioria dos AcMs produzidos contra o BoHV-1 são direcionados contra a glicoproteína C (gC), um antígeno abundante e imunodominante do envelope viral. No presente trabalho, antígenos de uma cepa do BoHV-1 defectiva no gene da gC foram utilizados para a imunização de camundongos visando a produção de AcMs com outras especificidades protéicas. Após fusão e seleção de 54 clones resistentes ao meio seletivo HAT, foram obtidos três hibridomas secretores de AcMs contra antígenos do BoHV-1 (1F1, 2H4, 4D7). Os AcMs pertenceram ao isotipo IgG2a e reagiram em diluições de até 1:640 (sobrenadante de cultivo) e 1:20.000 (fluído ascítico) em testes de imunofluorescência indireta (IFA) e imunoperoxidase indireta (IPX). Os três AcMs reagiram na IFA com 14 isolados de doença respiratória e/ou genital e com 17 isolados de doença neurológica, e apresentaram atividade neutralizante em níveis variáveis contra a grande maioria desses isolados. A especificidade protéica dos AcMs não foi determinada, pois nenhum deles reagiu com proteínas virais na técnica de Western blot. Por outro lado, os três AcMs reagiram na IFA contra antígenos virais de cepas do BoHV-1 e BoHV-5 com deleção dos genes que codificam as proteínas gC, gE, gI e US9, demonstrando que são direcionados contra outros antígenos virais. Pelo seu alto título de reação e pelo amplo espectro de reatividade, esses AcMs possuem aplicação potencial em técnicas diagnósticas. Esses AcMs também podem ser úteis para o mapeamento de epitopos neutralizantes conservados nas glicoproteínas do envelope
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufsm.br:1/10025 |
| Date | 29 August 2006 |
| Creators | Winkelmann, Evandro Reinoldo |
| Contributors | Weiblen, Rudi, Leite, Fabio Pereira Leivas, Carregaro, Valéria Maria Lara |
| Publisher | Universidade Federal de Santa Maria, Programa de Pós-Graduação em Medicina Veterinária, UFSM, BR, Medicina Veterinária |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFSM, instname:Universidade Federal de Santa Maria, instacron:UFSM |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 500500000007, 400, 500, 300, 500, 500, 02776f4b-7154-4d1a-9f55-d68a031b94bc, 36b50888-f88b-4270-83ac-b86245331107, 49e14411-1450-4d38-86c0-1708f93548e5, a938c7bd-6934-434e-90c8-e4c18b4628f9 |
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