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Previous issue date: 2010-07-05 / Introduction: Lung cancer is the most common malignancy in human. The average
5 years survival rate is one of the lowest among aggressive cancers, showing no
significant improvement in recent years. When detected early, lung cancer has a
good prognosis, but most patients present metastatic disease at the time of
diagnostic, which significantly reduces survival rates. Despite all the recent
advances in cancer treatment, prognostic of these patients have improved
minimally. Objectives: The present study aimed to investigate the molecular profile
of non-small cell lung cancer as well as new tumor makers relevant to diagnosis and
prognosis of this disease. Methods: Total RNA from frozen surgical tissues was
extracted using TRIZOL reagent and RNeasy FFPE kit was used for RNA extraction
from formalin fixed, paraffin embedded tissue. Aiming to identify differentially
expressed genes involved in lung cancer, we analyzed combined data from normal
and tumor SAGE (Serial Analysis of Gene Expression) libraries available in the
public domain. Proteome profiling was also analyzed in adenocarcinoma, squamous
cell carcinoma and normal surgical margin samples using two-dimensional
electrophoresis and mass spectrometry. Results: The statistical analysis of SAGE
data indentified a subset of differentially expressed tags between normal surgical
margins and adenocarcinoma libraries. Three genes displaying differential regulation
in SAGE or proteomic analysis, two up- (COL3A1, CTSB) and one down-regulated
(ITGB1) in neoplastic cells, were selected for real-time polymerase chain reaction
(PCR) experiments using the same set of samples. Similar to the statistical results,
quantitative PCR confirmed the upregulation of COL3A1 and CTSB in carcinomas
when compared to tumor free tissues. Conclusion: RNA from frozen and arquived
samples is appropriate for amplification experiments by real time PCR, although with
lower efficiency among the last ones. Therefore, improved methods of RNA
extraction in arquived tissues are suitable for Real Time quantitative RT-PCR, and
may be used for gene expression profiling of paraffin embedded tissues from cancer
patients. To the best of our knowledge, this is the first study reporting SAGE data
analysis in lung cancer. The statistical approach as well as the proteomic evaluation
were effective in identifying differentially expressed genes and proteins reportedly
involved in cancer development and may be useful to disclose new tumor makers
relevant to lung tumorigenesis. / Introdução: O câncer de pulmão é a neoplasia humana mais comum. As taxas de
sobrevida em 5 anos estão entre as mais baixas para tumores agressivos e seus
valores não têm mostrado diferenças importantes nos últimos anos. Quando
detectado nos estágios precoces, o câncer de pulmão mostra bom prognóstico, mas
a maioria dos pacientes apresenta doença metastática no momento do diagnóstico,
o que reduz a sobrevida significativamente. Apesar de todo o progresso obtido nos
últimos anos em tratamento do câncer, o prognóstico desses pacientes permanece
desfavorável. Objetivos: O presente estudo teve como objetivo investigar o perfil
molecular de câncer de pulmão de células não pequenas, bem como de novos
marcadores tumorais relevantes para diagnóstico e prognóstico dessa doença.
Métodos: O RNA total de espécimes cirúrgicos congelados foi extraído pelo
método do trizol e o kit RNeasy FFPE foi utilizado para extração de RNA de tecidos
fixados em formalina e emblocados em parafina. Com o objetivo de identificar
genes diferencialmente expressos envolvidos em câncer de pulmão, dados
combinados de bibliotecas SAGE (Serial Analysis of Gene Expression) públicas
foram analisados. O perfil protéico foi também avaliado em amostras de
adenocarcinoma, carcinoma epidermóide e de margens cirúrgicas normais,
utilizando eletroforese bidimensional e espectrometria de massas. Resultados: A
análise estatística dos dados de SAGE identificou um conjunto de tags
diferencialmente expressas entre as bibliotecas de adenocarcinoma e de margens
cirúrgicas. Três genes com expressão alterada na análise de SAGE e de
proteômica, dois com níveis elevados (COL3A1, CTSB) e um com nível reduzido
(ITGB1) em células neoplásicas, foram selecionados para experimentos de PCR
(reação em cadeia da polimerase) em tempo real no mesmo conjunto de amostras.
Consistente com os resultados estatísticos, a PCR quantitativa confirmou a
expressão elevada de COL3A1 e CTSB em carcinomas quando comparados com o
tecido livre de tumor. Conclusão: O RNA de amostras congeladas e arquivadas é
adequado para amplificação por PCR em tempo real, embora exiba qualidade mais
baixa nessas últimas. Portanto, métodos otimizados para tecidos arquivados
permitem análises por PCR quantitativa e podem ser utilizados para avaliação do
perfil transcricional de espécimes embebidos em parafina procedentes de pacientes
com câncer. Este é aparentemente o primeiro estudo descrevendo a análise de
dados de SAGE em câncer de pulmão. As abordagens estatística e proteômica
foram efetivas em identificar genes e proteínas diferencialmente expressas
envolvidas no desenvolvimento do câncer e podem revelar novos marcadores
relevantes para a tumorigênese de pulmão.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:localhost:tede/278 |
| Date | 05 July 2010 |
| Creators | Henrique, Tiago |
| Contributors | Silva, Eloiza Helena Tajara da, Silveira, Nelson José Freitas da, Lisoni, Flávia Cristina Rodrigues |
| Publisher | Faculdade de Medicina de São José do Rio Preto, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, FAMERP, Brasil, Faculdade 1::Departamento 1 |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da FAMERP, instname:Faculdade de Medicina de São José do Rio Preto, instacron:FAMERP |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 1102159680310750095, 500, 500, 600, 306626487509624506, 8765449414823306929 |
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