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Previous issue date: 2017-02-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Nowadays, cancer is one of the most feared diseases, affecting each day more and more people
worldwide. The importance of new cancer treatment researches is very clear since the ones that
has been used are not very effective and may lead to drug resistance, implying in a constant
dose increasing which can lead to toxicity issues. Collateral effects and the instability generated
in the patient’s organism are also reasons why the necessity of discovering new cancer
treatments is imminent. A treatment alternative that has aroused interest is the use of
monoclonal antibodies as immunotherapics, since they act by stimulating the patient’s immune
system neutralizing the tumor cells in a very efficient and specific way. This kind of antibody
can be produced by culturing hybrid animal cells, better known as hybridoma, under strictly
controlled conditions so they can be studied and used in human beings. For this reason, the
major goal of this project was the production of murine monoclonal antibodies using hybridoma
cell culture in order to stablish an efficient culture methodology for hybridomas PC-61 or DTA1
producers of monoclonal antibodies anti-CD25 and anti-GITR, respectively, with high quality
and enough amounts using Fetal Bovine Serum (FBS) free medium to, in the future, carry out
animal model studies of their potential as therapeutic agents for cancer treatment. Both
hybridomas were cultivated on a small scale with RPMI medium and addition of SFB, for
comparative purposes and only one was selcted for the second step. The sequential adaptation
methodology test, consisted in a gradual percent’s reduction of medium with serum at the same
time that increase the percentage of commercial medium without serum, and was selected the
medium without SFB in which the hybridoma was better adapted. After was carried out on a
laboratory scale in a system type spinner flask (500 ml) with the commercial medium selected
in the previous step, in controlled conditions of temperature (37 ° C) and pH (7.2). Based on
analyzes of cell culture results, amino acid consumption and monoclonal antibodies
quantification , SFM commercial medium SFB-free provided better results for culturing the
PC-61 hybridoma, allowing the pilot scale culture reached even higher cell densities than in the
standard medium with addition of FBS. / O câncer é uma das doenças mais temidas da atualidade, e atinge cada vez mais pessoas em
todo o mundo. A importância de pesquisas sobre novos tratamentos na luta contra o câncer é
clara e consensual, uma vez que os que vem sendo utilizados, não são muito eficientes, causam
resistência à medicação utilizada o que implica na utilização de doses crescentes que por sua
vez podem gerar problemas de toxicidade. Os efeitos colaterais e a instabilidade gerada no
organismo do paciente, também são fatores da necessidade de pesquisar novos caminhos para
o tratamento do câncer. Uma das alternativas de tratamento que tem despertado interesse é a
utilização de anticorpos monoclonais (mAbs) como imunoterápicos, os quais agem estimulando
o próprio sistema imune do paciente neutralizando a ação das células tumorais de forma
eficiente e específica. A produção de tais anticorpos pode ser feita mediante o cultivo de células
animais híbridas, mais conhecidas como hibridomas, sobre condições estritamente controladas
para que possam ser estudados e utilizados em humanos. Por essa razão definiu-se como
objetivo desse trabalho a produção anticorpos monoclonais murinos por meio de cultivo de
hibridomas com a finalidade de estabelecer uma metodologia eficiente de cultivo dos
hibridomas PC-61 ou DTA1 secretores dos mAbs anti-CD25 e antiGITR respectivamente, com
qualidade e em quantidades suficientes utilizando meios livres de soro fetal bovino (SFB), para
a seguir efetuar estudos em modelo animal de seu potencial como agentes terapêuticos no
tratamento de câncer. Os dois hibridomas foram cultivados em pequena escala utilizando meio
RPMI-1640 e adição de SFB, para fins comparativos e somente um foi selecionado para a
próxima etapa. O teste da metodologia de adaptação sequencial, onde houve a redução gradativa
da porcentagem de meio RPMI-1640 com 10% de SFB e o aumento da porcentagem de meio
comercial sem SFB, e foi selecionado o meio livre de SFB em que o hibridoma melhor se
adaptou. Posteriormente foi realizado o cultivo do hibridoma em escala laboratorial em sistema
de frasco agitado biorreator do tipo Spinner (500 mL) com o meio livre de SFB selecionado na
etapa anterior, sob condições bem controladas de temperatura (37ºC), pH (7,2). Com base nas
análises dos resultados dos cultivos celulares, metabolismo de aminoácidos e quantificação de
mAbs, o meio comercial SFM livre de SFB proporcionou melhor resultados para o cultivo do
hibridoma PC-61, permitindo que o cultivo em escala laboratorial atingisse densidades
celulares ainda maiores que no meio padrão com adição de SFB. Como consequência desse
vasto crescimento celular em quantidades abundantes de mAbs foram conseguidas para iniciar
num futuro próximo ensaios em modelos animais.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufscar.br:ufscar/9210 |
| Date | 24 February 2017 |
| Creators | Prampero, Anna Carolina |
| Contributors | Anibal, Fernanda de Freitas, Suazo, Cláudio Alberto Torres |
| Publisher | Universidade Federal de São Carlos, Câmpus São Carlos, Programa de Pós-graduação em Genética Evolutiva e Biologia Molecular, UFSCar |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFSCAR, instname:Universidade Federal de São Carlos, instacron:UFSCAR |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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