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Previous issue date: 2015-08-28 / Fungi of the genus Trichoderma have emerged as biological control agents,
especially those belonging to the species Trichoderma harzianum with various
mechanisms involved include production of antibiotics, mycoparasitism, competition
for nutrients and host plant resistance induction. Mycoparasitism is a sequential
process that involves recognition of the host contact, adhesion, expression of specific
genes and secretion of secondary metabolites. Several hydrolytic enzymes are
involved in this process among them chitinases, beta-glucanases and proteases.
Recent studies of T. harzianum interaction with some pathogens have shown that
other enzymes may also be involved in this mechanism, among which alphamannosidase.
Alpha-mannosidase has an essential role in the recycling of
glycoproteins in filamentous fungi, but little is known about the role of these enzymes
in mycoparasitism. This study aims to characterize the expression of T. alphamannosidase
gene harzianum after growth in cell wall of Sclerotinia sclerotiorum
(SS), Fusarium solani (FS) and Fusarium oxysporum (FO) as well as during the
interaction in vivo . It was used as a control cell wall T. harzianum (TH). Also, jobs
obtaining mutants of this gene in T. harzianum were performed. Our data show that
alpha-mannosidase gene was highly expressed as T. harzianum grown in the
presence of cell wall SS (4.5X), FS (18X) and FO (75X) compared to the control TH
(1X). In comparison situation it was noticed a 75X greater expression in TH x FO
state during contact as compared with the control (TH x TH). In other situations of
confrontation did not observe a significant increase in expression. The promoter
region, the selection mark and the terminator region of the alpha-mannosidase of T.
harzianum gene was cloned into the pRS426 vector, and the deletion cassette was
assembled by the recombination technique in Saccharomyces cerevisiae. Then,
these vectors were used for transformation of T. harzianum and transformants were
obtained by selection on plates containing hygromycin b. Approximately 50
transformants were obtained, but none of the alpha-mannosidase gene was
successfully deleted. Obtaining more transformants is necessary for us to have a
mutant alpha-mannosidase gene deleted. / Fungos do gênero Trichoderma têm se destacado como agentes de controle
biológico, principalmente aqueles pertencentes à espécie Trichoderma
harzianumcom vários mecanismos envolvidos incluem produção de antibióticos,
micoparasitismo, competição por nutrientes e indução de resistência da planta
hospedeira. Micoparasitismo é um processo sequencial que envolve reconhecimento
do hospedeiro, contato, adesão, expressão de genes específicos e secreção de
metabólitos secundários. Várias enzimas hidrolíticas estão envolvidas neste
processo dentre elas quitinases, beta-glucanases e proteases. Estudos recentes de
interação de T. harzianum com alguns fitopatógenos tem demonstrado que outras
enzimas podem também estar envolvidas neste mecanismo, dentre elas as alfamanosidases.
As alfa-manosidases tem um papel fundamental na reciclagem de
glicoproteínas em fungos filamentosos, mas pouco se sabe sobre o papel destas
enzimas no micoparasitismo. Este trabalho tem como objetivo a caracterização da
expressão do gene de alfa-manosidase de T. harzianumapós crescimento em
parede celular de Sclerotinia sclerotiorum (SS), Fusarium solani (FS) e Fusarium
oxysporum (FO), bem como durante a interação in vivo. Como controle foi utilizado
parede celular de T. harzianum (TH). Além disto, trabalhos de obtenção de mutantes
deste gene em T. harzianum foram realizados. Nossos dados mostraram que o gene
de alfa-manosidase foi altamente expresso quando T. harzianum cresceu na
presença de parede celular de SS (4.5X), FS (18X) e FO (75X) quando comparado
com o controle TH (1X). Em situação de confronto foi observado uma expressão de
75X maior na situação TH x FO durante o contato, quando comparado com o
controle (TH x TH). Na outras situações de confronto não observamos um aumento
significativo de expressão. A região promotora, a marca de seleção e a região
terminadora do gene da alfa-manosidase de T. harzianumfoi clonado no vetor
pRS426 e o cassete de deleção foi montado através da técnica de recombinação em
Saccharomyces cerevisiae . Em seguida, estes vetores foram utilizados para a
transformação de T. harzianume os transformantes foram obtidos por seleção em
placas contendo higromicina b. Aproximadamente 50 transformantes foram obtidos,
mas em nenhum deles o gene da alfa-manosidase foi deletado com sucesso. A
obtenção de mais transformantes se faz necessário para que possamos ter um
mutante com o gene da alfa-manosidase deletado.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.bc.ufg.br:tede/5000 |
| Date | 28 August 2015 |
| Creators | Mota, Paulo Roberto da |
| Contributors | Ulhoa, Cirano José, Silva, Roberto do Nascimento, Ulhoa, Cirano José, Vieira, Pabline Marinho, Georg, Raphaela de Castro |
| Publisher | Universidade Federal de Goiás, Programa de Pós-graduação em Biologia (ICB), UFG, Brasil, Instituto de Ciências Biológicas - ICB (RG) |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFG, instname:Universidade Federal de Goiás, instacron:UFG |
| Rights | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 6883982777473437920, 600, 600, 600, -3872772117827373404, -1634559385931244697 |
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