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Previous issue date: 2011-06-29 / O Papilomavírus Bovino infecta epitélios, ocasionando tanto lesões cutâneas, geralmente benignas, como também cânceres no trato digestivo e urinário. Objetivos: Neste trabalho, foram estabelecidas culturas primárias obtidas de lesões de animais infectados por BPV com diferentes características clínicas e avaliadas as diferenças morfológicas, citogenéticas e moleculares dessas células primárias em relação às células de cultivo de animais sadios e alguns parâmetros comparado com células de cultivos temporários de linfócitos de sangue periférico. Métodos: Foram coletadas amostras de sangue e biópsias de 9 animais avaliados clinicamente como sadios, com papilomatose cutânea, papilomatose esofágica e hematúria enzoótica. Tais amostras foram analisadas histopatologicamente, citogeneticamente e submetidas à investigação de presença de sequências de DNA viral. Foram estabelecidos cultivos primários de cada grupo de amostras e realizada a caracterização morfológica, curva de crescimento e senescência, marcação de proteínas de citoesqueleto (vimentinas, citoqueratinas e actinas), adesão focal (paxilina e vinculina) e proteína do capsídeo viral L1. Resultados: Detectou-se a presença do DNA viral nas primeiras passagens dos cultivos estabelecidos assim como se observou maior número de células com alterações cromossômicas nos três grupos de animais clinicamente afetados em relação aos sadios, tanto nos cultivos primários quanto nos cultivos temporários de linfócitos de sangue periférico, destacando-se rearranjos com adições e deleções, seguidos das quebras cromatídicas e fragmentos acêntricos. As células dos grupos clinicamente afetados por BPV apresentaram marcação dupla de vimentina e citoqueratina, sugerindo um fenômeno chamado transição epitelial-mesenquimal já visto em alguns casos de cânceres. Nesses cultivos, as marcações das fibras de actina e das proteínas de adesão focal mostraram desarranjo, retração das fibras e formação de lamelipodia, provavelmente fruto da ação das proteínas virais. Também foi detectada por imunofluorescência a presença de proteína do capsídeo viral na região nuclear e perinuclear. Conclusões: A presença do DNA do vírus através das passagens, as alterações cromossômicas e a expressão da proteína viral são evidências pela primeira vez apresentadas de que os vírus mantém alguma atividade in vitro. Alterações tanto das proteínas do citoesqueleto como de adesão focal apontam para que essas mesmas células já estejam sofrendo as primeiras mudanças para um processo neoplásico. / The bovine papillomavirus is responsible for infecting epithelia causing skin lesions,
usually benign, but also cancers of the digestive and urinary tract.
Objectives:
In this
study, we evaluated the morphological, cytogenetic and molecular aspects of
primary
cells cultures presenting BPV DNA sequences, collected from animals with diffe
rent
clinical features and compared to cells from healthy animals.
Methods:
We collected
blood samples and biopsies from healthy animals, bovines with cutaneous
papillomatosis, esophageal papillomatosis, and enzootic hematuria, which
were
analyzed by histopathology, cytogenetics and viral DNA sequence detectio
n. We
established primary cultures of samples collected from each group and made
the cell
characterization by morphology, growth and senescence patterns, protein cytoskelet
on
(vimentin, cytokeratin and actin), focal adhesion (paxillin and vinculin) and vir
al capsid
L1 protein detection.
Results:
We detected the presence of viral DNA sequences in the
early passages of primary cell cultures and observed a greater number o
f cells with
chromosomal alterations in the three groups presenting BPV DNA sequences, when
compared to healthy animals, both in primary cells and blood lymphocyte
cultures,
being the most evident alterations the rearrangements with additions or deletions
of
segments, followed by the chromatid breaks and Acentric Fragments. Th
e cells of the
groups obtained from BPV infected lesions had showed a concomitant
vimentin and
cytokeratin labeling, suggesting a phenomenon identified as epithelial-m
esenchymal
transition often described in cancers. In these cell lines infected, the actin fibers
and
focal adhesion proteins showed disarray, retraction of actin fibers and a lamella
r
formation, probably resulting from the viral proteins action. It was also detected by
immunofluorescence the presence of viral capsid L1 protein in the nuclear a
nd
perinuclear region.
Conclusions:
The presence of the virus DNA sequences through
the passages, chromosomal alterations and expression of viral protein indicate, for the
first time, that the virus maintains some activity
in vitro
. Alterations in cytoskeleton and
focal adhesion proteins pointed out that these cells cultures are already suffe
ring the
early changes to a malign process. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.unifesp.br:11600/9599 |
| Date | 29 June 2011 |
| Creators | Campos, Sérgio Roberto de Souza Leão da Costa [UNIFESP] |
| Contributors | Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), Stocco, Rita de Cassia [UNIFESP] |
| Publisher | Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP) |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | 126 p. |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UNIFESP, instname:Universidade Federal de São Paulo, instacron:UNIFESP |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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