Orientador: Kleber Gomes Franchini / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T04:18:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Torsoni_AdrianaSouza_D.pdf: 11780689 bytes, checksum: df0db8e2a1746ca552768be3fb477c68 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: Uma variedade de estímulos, como a sobrecarga hemodinâmica, pode levar a um aumento de tensão mecânica em cardiomiócitos, que normalmente é compensado pelo desenvolvimento de um fenótipo hipertrófico. A resposta inicial à sobrecarga é caracterizada por uma rápida e coordenada ativação de vias de sinalização intracelulares que regulam a expressão gênica e culminam com o crescimento hipertrófico de cada cardiomiócito. A importância relativa de cada elemento que participa das vias de sinalização e sua contribuição para as alterações adaptativas observadas nos miócitos cardíacos em resposta à sobrecarga pressora têm sido o foco de diversas pesquisas. No presente estudo, investigamos a ativação e localização subcelular da FAK em miócitos ventriculares de ratos neonatos (MVRN) submetidos a ciclos de estiramento, além da sua participação na ativação do gene do fator natriurético atrial (ANF). O estiramento pulsátil dos cardiomiócitos, de 5 a 20%, por períodos de 10 a 120 minutos, levou a um aumento da fosforilação da FAK no seu resíduo de tirosina 397, conforme detectado pelo anticorpo fosfoespecífico. Tal ativação foi paralela com uma alteração na localização da Fak em MVRN que, da região perinuclear em miócitos não estirados, passou a distribuir-se ao longo dos miofilamentos, como agregados protéicos, em células estiradas. Além disso, 4 horas de estiramento pulsátil aumentou a atividade do gene repórter da luciferase contendo o promotor do ANF. A interrupção da sinalização pelo complexo endógeno Fak/Src, seja pela expressão de um mutante negativo de Fak, onde a tirosina foi substituída por fenilalanina no resíduo 397, ou pelo tratamento com um inibidor farmacológico da c-Src, diminuiu severamente a ativação da Fak e sua redistribuição ao longo dos miofilamentos, mediados pelo estiramento, além de inibir a ativação do gene do ANF. No entanto, a expressão de um mutante selvagem de Fak potencializou a fosforilação dessa quinase, induzida por estiramento, sem alterar a expressão gênica do ANF, em comparação aos MVRN não transfectados...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: A variety of stimuli, such as hemodynamic overload, can lead to an increase in mechanical stress on cardiomyocytes that can be compensed by the development of a hypertrophyc phenotype. The hypertrophyc response is characterized by a rapid and coordinate activation of intracellular signaling pathways that regulate gene expression and results in a hypertrophyc growth of cardiac myocyte. The relative importance of each element that participate of signaling pathway and its contribution for the adaptative changes observed in cardiac myocyte in response to pressure overload, has been the focus of diverse researches. In the present study we investigated the Fak activation and subcellular localization in neonatal rat ventricular myocytes (NRVMs) submitted to pulsatile stretch, instead its participation in the atrial natriuretic factor (ANF) gene activation 5% to 20% (10-120 minute) pulsatile stretch of NRVMs lead to an increase of Fak phosphorylation at Tyr-397, as detected by phosphospecific antibody. This activation was accompanied by a change in Fak localization in NRVMs that, of the perinuclear regions in nonstretched cells change to aggregates regularly distributed along the myofilaments in stretched cells. Furthermore, a 4-hour cyclic stretch enhanced the activity of the ANF promoter-luciferase reporter gene. Disrupting endogenous FaklSrc signaling either by expression of a dominant-negative Fak mutant with phenylalanine substituted for Tyr-397 or by treatment with a c-Src pharmacological inhibitor markedly attenuated stretchinduced Fak activation and its redistribution at myofilaments and inhibited stretch-induced ANF gene activation...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Doutorado / Ciencias Basicas / Doutor em Clínica Médica

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-06-29 / O Papilomavírus Bovino infecta epitélios, ocasionando tanto lesões cutâneas, geralmente benignas, como também cânceres no trato digestivo e urinário. Objetivos: Neste trabalho, foram estabelecidas culturas primárias obtidas de lesões de animais infectados por BPV com diferentes características clínicas e avaliadas as diferenças morfológicas, citogenéticas e moleculares dessas células primárias em relação às células de cultivo de animais sadios e alguns parâmetros comparado com células de cultivos temporários de linfócitos de sangue periférico. Métodos: Foram coletadas amostras de sangue e biópsias de 9 animais avaliados clinicamente como sadios, com papilomatose cutânea, papilomatose esofágica e hematúria enzoótica. Tais amostras foram analisadas histopatologicamente, citogeneticamente e submetidas à investigação de presença de sequências de DNA viral. Foram estabelecidos cultivos primários de cada grupo de amostras e realizada a caracterização morfológica, curva de crescimento e senescência, marcação de proteínas de citoesqueleto (vimentinas, citoqueratinas e actinas), adesão focal (paxilina e vinculina) e proteína do capsídeo viral L1. Resultados: Detectou-se a presença do DNA viral nas primeiras passagens dos cultivos estabelecidos assim como se observou maior número de células com alterações cromossômicas nos três grupos de animais clinicamente afetados em relação aos sadios, tanto nos cultivos primários quanto nos cultivos temporários de linfócitos de sangue periférico, destacando-se rearranjos com adições e deleções, seguidos das quebras cromatídicas e fragmentos acêntricos. As células dos grupos clinicamente afetados por BPV apresentaram marcação dupla de vimentina e citoqueratina, sugerindo um fenômeno chamado transição epitelial-mesenquimal já visto em alguns casos de cânceres. Nesses cultivos, as marcações das fibras de actina e das proteínas de adesão focal mostraram desarranjo, retração das fibras e formação de lamelipodia, provavelmente fruto da ação das proteínas virais. Também foi detectada por imunofluorescência a presença de proteína do capsídeo viral na região nuclear e perinuclear. Conclusões: A presença do DNA do vírus através das passagens, as alterações cromossômicas e a expressão da proteína viral são evidências pela primeira vez apresentadas de que os vírus mantém alguma atividade in vitro. Alterações tanto das proteínas do citoesqueleto como de adesão focal apontam para que essas mesmas células já estejam sofrendo as primeiras mudanças para um processo neoplásico. / The bovine papillomavirus is responsible for infecting epithelia causing skin lesions, usually benign, but also cancers of the digestive and urinary tract. Objectives: In this study, we evaluated the morphological, cytogenetic and molecular aspects of primary cells cultures presenting BPV DNA sequences, collected from animals with diffe rent clinical features and compared to cells from healthy animals. Methods: We collected blood samples and biopsies from healthy animals, bovines with cutaneous papillomatosis, esophageal papillomatosis, and enzootic hematuria, which were analyzed by histopathology, cytogenetics and viral DNA sequence detectio n. We established primary cultures of samples collected from each group and made the cell characterization by morphology, growth and senescence patterns, protein cytoskelet on (vimentin, cytokeratin and actin), focal adhesion (paxillin and vinculin) and vir al capsid L1 protein detection. Results: We detected the presence of viral DNA sequences in the early passages of primary cell cultures and observed a greater number o f cells with chromosomal alterations in the three groups presenting BPV DNA sequences, when compared to healthy animals, both in primary cells and blood lymphocyte cultures, being the most evident alterations the rearrangements with additions or deletions of segments, followed by the chromatid breaks and Acentric Fragments. Th e cells of the groups obtained from BPV infected lesions had showed a concomitant vimentin and cytokeratin labeling, suggesting a phenomenon identified as epithelial-m esenchymal transition often described in cancers. In these cell lines infected, the actin fibers and focal adhesion proteins showed disarray, retraction of actin fibers and a lamella r formation, probably resulting from the viral proteins action. It was also detected by immunofluorescence the presence of viral capsid L1 protein in the nuclear a nd perinuclear region. Conclusions: The presence of the virus DNA sequences through the passages, chromosomal alterations and expression of viral protein indicate, for the first time, that the virus maintains some activity in vitro . Alterations in cytoskeleton and focal adhesion proteins pointed out that these cells cultures are already suffe ring the early changes to a malign process. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações