Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The objective of this study was to evaluate the effect of cryoprotectant solutions, immersion times and regeneration means of zygotic embryos cryopreserved coconut and evaluate the effect of different procedures for packaging and storage time on contamination and germination of zygotic embryos. For cryopreservation were used zygotic embryos obtained
from mature fruits of Brazil Green Dwarf (BGD) and Brazilian Tall (BRA) accessions of Active Bank Coconut Germplasm Embrapa Coastal Tablelands. BGD coconut seeds were placed in two cryoprotectant solutions: C1 - medium Y3 + 1.75 M sucrose + 15% glycerol, C2 - medium Y3 + 3.33 M glucose + 15% glycerol and BRA coconut embryos in solutions: C1 - medium Y3 + 3.33 M glucose and C2 - medium Y3 + 3.33 M glucose + glycerol 15%,
both accesses remained immersed for 24, 48 and 72 hours. Thereafter explants were dehydrated on silica gel 34 (BGD) and 30 hours (BRA) and immersed in liquid nitrogen at -
196 ° C for 24 hours, after this period were thawed at 38 ± 2 ° C. It was determined the humidity of the embryos at the end of step of cryoprotectants and dehydration treatments. The
percentage of survival and regeneration was assessed after the embryo transfer into the culture medium Y3 supplemented or not with mol 0.5 gibberellic acid. The pre-cultivation in
cryoprotectant solutions and different immersion times did not affect embryo viability. The cryoprotective solution composed of 1.75 M sucrose and 15% glycerol showed lower
moisture content (12.3%) and improved survival (63.3%) to the coconut BGD zygotic embryos cryopreserved. The BRA access the embryos reached 77.8% survival when immersed in cryoprotectant formed medium Y3 + 3.33 M glucose, however, both cryoprotectant solutions when combined with the shortest time of immersion (24 hours) may be recommended. For studies of transport and storage procedures were used Cameroon red
dwarf (CRD), Malayan yellow dwarf (MYD) and Malayan red dwarf (MRD) acessions. We evaluated five cases; T1 endosperm disk storage at 10 ± 2 ° C for 5 days; T2 endosperm disk
storage at 10 ± 2 ° C for 8 days; T3 endosperm disk storage at 10 ± 2 ° C for 12 days (before excision and embryo inoculation in culture medium Y3); T4 excised zygotic embryo and
inoculated into culture medium Y3 in individual storage and 5 ml microtube 2 days and then transferred to culture medium Y3; T5- five zygotic embryos inoculated in culture medium Y3
in a Petri dish after 2 days and transferred to culture medium Y3. The transport zygotic embryos in Petri plate with Y3 culture medium without sucrose for two days promotes low
percentage of bacterial contamination. All procedures studied promote low fungal contamination. The transport endosperm discs in plastic bags and stored for five, eight, and
twelve days promotes higher germination of zygotic embryos uncontaminated MRD and MYD access. The transport of isolated zygotic embryos in microtube with Y3 culture medium
without sucrose for two days and endosperm discs in plastic bags and stored for five and eight days promote increased germination of zygotic embryos uncontaminated CRD access. / O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito de soluções crioprotetoras, tempos de imersão e meios de regeneração de embriões zigóticos criopreservados de coco e avaliar o efeito de
diferentes procedimentos para a embalagem e tempo de armazenamento sobre a contaminação e germinação de embriões zigóticos. Para a criopreservação foram utilizados embriões zigóticos obtidos de frutos maduros provenientes de plantas matrizes de coqueiro gigante do Brasil da Praia do Forte (GBrPF) e anão verde do Brasil de Jiqui (AVeBrJ) do Banco Ativo
de Germoplasma de Coco da Embrapa Tabuleiros Costeiros. Embriões de coqueiro AveBrJ foram imersos em duas soluções crioprotetoras: C1 meio Y3 +1,75 M sacarose + 15%
glicerol, C2 meio Y3 + 3,33 M glicose + 15% glicerol e, embriões de coqueiro GBrPF nas soluções: C1 - meio Y3 + 3,33 M glicose e C2 meio Y3 + 3,33 M glicose + 15% glicerol,
ambos os acessos permaneceram imersos por 24, 48 e 72 horas. Posteriormente os explantes foram desidratados em sílica gel por 34 (AVeBrJ) e 30 horas (GBrPF), e imersos em nitrogênio líquido a -196º C por 24 horas, após esse período foram descongelados a 38 ± 2ºC. Foi determinada a umidade dos embriões ao final da etapa de tratamentos crioprotetores e desidratação. Foi avaliada a porcentagem de sobrevivência e regeneração, após a transferência dos embriões para o meio de cultura Y3 suplementado ou não com 0,5 mol de ácido
giberélico. O pré-cultivo nas soluções crioprotetoras e os diferentes tempos de imersão não alteraram a viabilidade dos embriões. A solução crioprotetora composta por 1,75 M de
sacarose e 15% de glicerol proporcionou menor umidade (12,3%) e maior sobrevivência (63,3%) aos embriões zigóticos de coco AVeBrJ criopreservados. Os embriões do acesso
GBrPF alcançaram 77,8% de sobrevivência quando imersos no crioprotetor formado pelo meio Y3 + 3,33 M glicose, porém, ambas as soluções crioprotetoras quando combinadas com
o menor tempo de imersão (24 horas) podem ser recomendadas. Para os estudos de procedimentos de transporte e armazenamento foram utilizados embriões de coqueiro anão
vermelho dos Camarões (AVC), anão amarelo da Malásia (AAM)e anão vermelho da Malásia (AVM). Foram avaliados cinco procedimentos; T1- Armazenamento do disco de endosperma
a 10 ± 2°C durante 5 dias; T2- Armazenamento do disco de endosperma a 10 ± 2°C durante 8 dias; T3- Armazenamento do disco de endosperma a 10 ± 2°C durante 12 dias (antes da
excisão de embrião e a inoculação no meio de cultura Y3); T4- embrião zigótico excisado e inoculado em microtubo de 5 mL com 3 mL de meio de cultura Y3 sem sacarose e depois de
2 dias transferidos para meio de cultura Y3; T5- cinco embriões zigóticos inoculados em placa de Petri com meio de cultura Y3 sem sacarose e depois de 2 dias transferidos para meio
de cultura Y3. O transporte de embriões zigóticos em placa de Petri com meio de cultura Y3 sem sacarose durante dois dias promove menor porcentagem de contaminação bacteriana.
Todos os procedimentos estudados promovem baixa contaminação fúngica. O transporte de discos de endosperma em sacos plásticos e armazenados por cinco, oito e doze dias promove maior germinação de embriões zigóticos não contaminados dos acessos AVM e AAM. O
transporte de embriões zigóticos isolados em microtubo com meio de cultura Y3 sem sacarose por dois dias e de discos de endosperma em sacos plásticos e armazenados por cinco e oito
dias promovem maior germinação de embriões zigóticos não contaminados do acesso AVC.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:ri.ufs.br:riufs/3002 |
| Date | 03 February 2015 |
| Creators | Oliveira, Leila Albuquerque Resende de |
| Contributors | Lédo, Ana da Silva |
| Publisher | Universidade Federal de Sergipe, Pós-Graduação em Agricultura e Biodiversidade, UFS, BR |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFS, instname:Universidade Federal de Sergipe, instacron:UFS |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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