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Previous issue date: 2006 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A Leishmania (Viannia) braziliensis é o agente etiológico de mais de 90% dos
casos de leishmanioses cutânea e mucocutânea no Brasil. Apesar da alta freqüência no
Brasil, poucos estudos de vacinação estão descritos utilizando esta espécie de
Leishmania. Com intuito de iniciar os estudos de vacinação experimental contra as
leishmanioses cutânea e mucocutânea causada por L. (V.) braziliensis, isolamos os
genes que codificam os antígenos LACK, TSA, LeIF e LbSTI1 desta espécie. Os
genes foram caracterizados segundo sua seqüência de DNA e transcrição de mRNA
nas diferentes formas do parasita. Observamos alta conservação na seqüência predita
de aminoácidos quando comparamos as espécies L. (V.) braziliensis e L. (L.) major
com identidades de 83% a 96%. Observamos também a presença de mRNA tanto nas
formas promastigotas como amastigotas de L. (V.) braziliensis. Em seguida, inserimos
estes genes em vetores para expressão em células eucarióticas e procarióticas. As
proteínas recombinantes bacterianas foram inicialmente utilizadas para imunização de
camundongos. Os anticorpos específicos foram utilizados para confirmar a expressão
destes antígenos nas formas promastigotas e amastigotas de L. (V.) braziliensis.
Posteriormente, observamos que a imunização de camundongos com plasmídios e
proteínas recombinantes dos respectivos antígenos, induziu a produção de anticorpos
específicos, com diferenças na magnitude e tipos de subclasse de anticorpo, assim
como linfócitos produtores de IFN-γ. Por fim, analisamos a imunidade protetora após
o desafio com formas promastigotas de L. (V.) braziliensis. Observamos que a resposta
imune desencadeada pela imunização não foi suficiente para reduzir a lesão primária
da infecção experimental.
Desta parte de nossos estudos concluímos que: i) os quatro antígenos por nós
clonados de L. (V.) braziliensis possuem potencial para utilização em estratégias de
imunização contra infecção experimental por parasitas do gênero Leishmania; ii) as
diferentes estratégias de imunização utilizadas não foram capazes de induzir
significativa imunidade contra a infecção experimental com L. (V.) braziliensis.
Em paralelo, estudamos o papel da molécula “glucocorticoid-induced tumor
necrosis factor family-related receptor” (GITR) durante a infecção experimental com
L. (L.) major. Inicialmente, observamos que camundongos geneticamente deficientes
que não expressam a molécula GITR foram mais resistentes à infecção, quando
comparados ao grupo de animais selvagens. Este aumento na resistência correlacionou
com o aumento no número de células T CD4+
produtoras de IFN-γ presente no sítio de
infecção. Complementamos estes experimentos, estudando o efeito do tratamento com
anticorpos anti-GITR nesta infecção. Observamos que o tratamento com este anticorpo
levou a diminuição do número de parasitas no sítio da lesão quando comparado ao
grupo controle de animais. Este fenômeno foi correlacionado com a quantidade de
IFN-γ produzida por células do linfonodo de drenagem. Destes experimentos pudemos
concluir que a molécula GITR tem um papel crítico durante a leishmaniose cutânea
causada por L. (L.) major, e que anticorpos anti-GITR tem um potencial para serem
utilizados em estratégias de vacinação contra a leishmaniose cutânea potencializando a
resposta imune específica. / Leishmania (Viannia) braziliensis is responsible for more than 90% of the cases
of cutaneous and mucocutaneous leishmaniasis in Brazil. In spite of the high
frequency of this parasite in Brazil, few studies of vaccination using this species of
Leishmania are described. Aiming at initiating these studies of experimental
vaccination against cutaneous and mucocutaneous leishmaniasis caused by L. (V.)
braziliensis, we isolated the genes encoding the antigens LACK, TSA, LeIF e LbSTI1.
The genes were characterized according to their DNA sequence and mRNA
transcription in the different forms of the parasite. We observed a high conservation in
the predicted amino acid sequences when we compared the species L. (V.) braziliensis
and L. (L.) major. The identities varied from 83% to 96%. We also observed the
presence of mRNA in both forms of L. (V.) braziliensis (promastigotes and
amastigotes). Subsequently, we cloned these genes into vectors which allowed their
expression into eukaryotic or prokaryotic cells. The bacterial recombinant proteins
were initially used to immunize mice. Specific antibodies were used to confirm the
expression of these antigens in promastigotes and amastigotes of L. (V.) braziliensis.
Subsequently, we observed that the immunization of mice with recombinant plasmids
and recombinant proteins representing the distinct antigens induced specific antibodies
and IFN-γ producing T cells. Finally, we evaluated the degree of protective immunity
after a challenge with promastigotes forms of L. (V.) braziliensis. We observed that the
immune response induced by immunization was not sufficient to reduce the primary
lesion caused by infection.
From these results we concluded that: i) all four antigens isolated from L. (V.)
braziliensis have the potential to be used for immunization against experimental
infection by different species of Leishmania; ii) the different strategies of
immunization used were not capable of inducing significant immunity to experimental
infection with L. (V.) braziliensis.
In parallel, we studied the role of the glucocorticoid-induced tumor necrosis
factor receptor family-related protein (GITR) during infection with L. (L.) major.
Initially, we observed that genetically deficient mice which do not express GITR were
more resistant to infection when compared to wild type animals. The resistance
correlated with the increased number of IFN-γ producing CD4+
T cells in the infection
site. We complemented these experiments, studying the effect of the treatment with
antibodies to GITR during infection. We observed that treatment with these antibodies
led to reduction in the number of parasites in the lesion site when compared to control
animals. The reduction was correlated with the amount of IFN-γ produced by lymph
node cells. From these experiments we concluded that GITR has a critical role during
cutaneous leishmaniasis caused by L. (L.) major and that antibodies to GITR may have
a potential to be used for vaccination against cutaneous leishmaniasis improving the
specific immune response. / BV UNIFESP: Teses e dissertações
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.unifesp.br:11600/23464 |
| Date | January 2006 |
| Creators | Salay, Gerson [UNIFESP] |
| Contributors | Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), Rodrigues, Mauricio Martins [UNIFESP] |
| Publisher | Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP) |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | 237 f. |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UNIFESP, instname:Universidade Federal de São Paulo, instacron:UNIFESP |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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