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Previous issue date: 2015-07-03 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The species Cochliomyia hominivorax, popularly known as screwworm fly, is a Diptera belonging to the family Calliphoridae. Its larvae are obligated parasites of warm-blooded animals and its geographic range extends throughout Latin America. Some studies accomplished with flies that produce myiasis concluded that the production of digestive enzymes secreted and / or excreted by the larvae has crucial contribution to the establishment and survival of these parasites in the host. Due to the lack of information approaching this subject on C. hominivorax, this project aimed to characterize and classify the enzymes in the secretion and excretion (S/E) of the larva of this fly, analyzing its biochemical profile.A colony of this species was established in laboratory conditions in order to accomplish this study. The colony was established by obtaining third instar larvae (L3)on naturally infested animals, and from the cultivation of these was obtained first (L1), second (L2) and third (L3) larvae instars,. The profile of proteins of S/E was obtained by polyacrylamide gel electrophoresis and proteolytic activity was analyzed using gelatin, azocasein and Na-benzoyl-arginine-nitroanilide as substrate. In S/E of the three instars proteins were detected with an apparent molecular weight ranging between 116 and 20 kDa. In the azocasein assay, at different pH ranges, it was observed that the major proteolytic activity occurs at pH 7.5 for all larvaeinstars. For characterization of the enzyme, assays were performed using these same substrates in which the samples were treated with inhibitors Benzamidine, Pepstatin A, AEBSF, TLCK, TPCK, EDTA, leupeptin and E-64. Proteinases present in the E/S of L1 are mostly serine proteases trypsin and chymotrypsin, whereas for L2 and L3 the presence of serine proteases and aspartyl proteases were observed. / Cochliomyia hominivorax (COQUEREL, 1858), conhecida popularmente como mosca da bicheira, é um díptero pertencente à família Calliphoridae. Suas larvas são parasitos obrigatórios de animais de sangue quente e sua área de distribuição estende-se por toda a América Latina. Alguns estudos realizados com dípteros que produzem miíases chegaram à conclusão que a produção de enzimas digestivas excretadas e secretadas pelas larvas tem participação crucial para o estabelecimento e a sobrevivência desses parasitos nos hospedeiros. Devido à falta de estudos com esta abordagem em C. hominivorax, este trabalho teve como objetivo caracterizar e classificar as enzimas presentes na excreção e secreção das larvas desta mosca, analisando seu perfil bioquímico. Para a execução do mesmo, foi estabelecida uma colônia dessa espécie em condições de laboratório, para colheita do material necessário para a análise. Essa colônia foi estabelecida por meio da obtenção de larvas de terceiro estádio presentes em animais naturalmente infestados, e a partir do cultivo dessas, foram obtidas as larvas de primeiro, segundo e terceiro estádios. A análise do perfil proteico dos produtos de excreção e secreção (PE/S) foi realizada por eletroforese em gel de poliacrilamida e a atividade proteolítica foi analisada utilizando gelatina, azocaseína e N-a-benzoil-arginina-nitroanilida como substratos. Nos PE/S dos três estádios foram detectadas proteínas com peso molecular aparente que variou entre 116 e 20 kDa. No ensaio com azocaseína em diferentes faixas de pH observou-se que a maior atividade proteolítica ocorre em pH 7,5 para todos os estádios larvais. Para caracterização das enzimas foram realizados ensaios utilizando estes mesmos substratos, nos quais as amostras foram tratadas com os inibidores Benzamidina, Pepstatin A, AEBSF, TLCK, TPCK, EDTA, Leupeptina e E-64. As proteinases presentes no PE/S de L1 são em sua maioria serina proteases do tipo tripsina e quimotripsina, enquanto que para os PE/S de L2 e L3 foi evidenciada a presença de serina proteases e aspartil proteases.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.bc.ufg.br:tede/5037 |
| Date | 03 July 2015 |
| Creators | Teixeira, Denise Gonçalves |
| Contributors | Borges, Lígia Miranda Ferreira, Mastrangelo, Thiago de Araújo, Monteiro, Valdirene Neves, Borges, Lígia Miranda Ferreira, Aguiar, Valéria Magalhães, Ulhoa, Cirano José |
| Publisher | Universidade Federal de Goiás, Programa de Pós-graduação em Ciência Animal (EVZ), UFG, Brasil, Escola de Veterinária e Zootecnia - EVZ (RG) |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFG, instname:Universidade Federal de Goiás, instacron:UFG |
| Rights | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 4581960685150189167, 600, 600, 600, 600, -6217552114249094582, 6702961356132007056, 2075167498588264571 |
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