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Previous issue date: 2017-08-08 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O advento sistema CRISPR/Cas9 tornou o processo de edição gênica
consideravelmente mais fácil e direto, uma vez que retirou empecilhos técnicos
relacionados aos sistemas já disponíveis. Desta forma, foram permitidos diversos
avanços no entendimento da função de elementos genômicos, assim como a
produção de embriões geneticamente modificados com diversas finalidades. O atual
trabalho objetivou a edição gênica no gene da beta-lactoglobulina em células
somáticas bovinas objetivando a produção futura de embriões da espécie
geneticamente modificados. Considerando-se que a hipersensibilidade a essa
proteína responde pela maior parte das alergias ao leite bovino, a produção de
animais cujo leite não contenha essa molécula é de grande interesse para a indústria
de laticínios. Durante os experimentos, foi possível obter uma linhagem de células
bovinas MDBK expressando a enzima Cas9 (MDBK-Cas). Usando células MDBK e
as células MBDK-Cas foi possível se obter com sucesso edições gênicas no locus
beta-lactoglobulina utilizando-se os componentes do sistema CRISPR/Cas9 na forma
de mRNA da proteína Cas9 e sgRNAs. Conclui-se que o sistema CRISPR/Cas9 pode
ser usado com os sgRNA desenhados neste estudo para editar o gene da betalactoglobulina
em células MDBK. Assim, células MDBK podem ser utilizadas como
alvo o locus em estudo. Modelos de estudos para edição do genoma bovino. Em vista
da escassa literatura constando de trabalhos em que tenha sido feita a edição gênica
em embriões bovinos, os dados gerados por esse trabalho colaborarão para o avanço
do estado da arte no que diz respeito a engenharia gênica de bovinos e no
conhecimento do funcionamento do sistema CRISPR/Cas9. / The advent of the CRISPR / Cas9 system made the process of gene editing
considerably easier and more straightforward, since it removed technical impediments
related to the systems already available. In this way, several advances were made in
the understanding of the function of genomic elements, as well as the production of
genetically modified embryos for various purposes. The present work aimed at the
genetic editing of the beta-lactoglobulin gene in bovine somatic cells aiming at the
future production of genetically modified embryos of the species. Considering that
hypersensitivity to this protein accounts for most of the allergies to bovine milk, the
production of animals whose milk does not contain this molecule is of great interest to
the dairy industry. During the experiments, it was possible to obtain a lineage of bovine
MDBK cells expressing the Cas9 enzyme (MDBK-Cas). Using MDBK cells and MBDKCas
cells it was possible to successfully obtain gene editions at the beta-lactoglobulin
locus using the components of the CRISPR / Cas9 system as mRNA of the Cas9
protein and sgRNAs. It is concluded that the CRISPR / Cas9 system can be used with
the sgRNAs designed in this study to edit the beta-lactoglobulin gene in MDBK cells.
Thus, MDBK cells can be targeted as the locus under study. Models of studies for
editing the bovine genome. In view of the scarce literature consisting of studies in
which bovine embryos have been genetically engineered, the data generated by this
work will contribute to the advancement of the state of the art regarding the genetic
engineering of cattle and the knowledge of the functioning of the system CRISPR /
Cas9.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:hermes.cpd.ufjf.br:ufjf/6049 |
| Date | 08 August 2017 |
| Creators | Souza, Gustavo Torres de |
| Contributors | Camargo, Luiz Sérgio de Oliveira, Batista, Ribrio Ivan Tavares Pereira, Santos, Marcelo de Oliveira, Hell, Rafaela Chitarra Rodrigues |
| Publisher | Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF), Programa de Pós-graduação em Ciências Biológicas: Imunologia e Doenças Infecto-Parasitárias/Genética e Biotecnologia, UFJF, Brasil, ICB – Instituto de Ciências Biológicas |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFJF, instname:Universidade Federal de Juiz de Fora, instacron:UFJF |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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