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Previous issue date: 2016-08-25 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Bothrops atrox is responsible for the majority of snakebites in northern Brazil and its
poisoning is characterized by intense local and hemostatic disorders injuries. In some regions
of the country where the care of accident victims by snakes is precarious, medicinal plants
have been presented as an alternative treatment or as a complement in the absence of
resources soroterápicos. The main goal of this study was to evaluate the anti-snakebite
potential of aqueous extract of the bark of Bellucia dichotoma Cogn. (Melastomataceae)
prepared in accordance with the traditional method. Initially, we investigated the potential of
the extract (AEBd) to inhibit the major local (hemorrhagic, phospholipase A2 and edemainducing)
activities of Bothrops atrox venom (BaV) and compared the pre-incubation method
with the traditional method used in folk medicine. The concentrations of the phenolic
components (tannins and flavonoids) in the extract were determined by colorimetric assays.
To assess the action of AEBd on BaV, SDS-PAGE electrophoresis, zymography and
Western-blot were carried out. As geographic distribution, soil type and climate can directly
influence the biological potential of a species, we compared the potential of B. dichotoma
collected in two different locations (Manaus, AM, and Santarém, PA) to inhibit the edemainducing,
phospholipase A2, defibrinating and coagulant activities of BaV. We also
investigated the antioxidant potential and cytotoxicity of the extracts using human fibroblasts
(MRC-5 cell line). In an attempt to correlate the anti-snakebite potential of B. dichotoma with
its chemical components, a preliminary HPLC-DAD method was developed to isolate the
major components of the extract. The efficacy of the isolated components in inhibiting the
hemorrhagic and phospholipase A2 activities of the venom was evaluated initially using a preincubation
protocol and a venom:component ratio of 1:1 (w/w). Our results show that AEBd
has a higher concentration of (condensed and hydrolysable) tannins than of flavonoids. The
complete inhibition observed in this study when pre-incubation was used may be due to the
presence of tannins in the extract. However, when AEBd was administered orally according to
the traditional method, it was effective in inhibiting edema induced by BaV and enhanced the
ability of the antivenom to inhibit edema formation. While the content of total phenolics, total
tannins and hydrolysable tannins was greater in B. dichotoma extract collected in Manaus, this
difference was not reflected in the anti-snakebite potential of the extracts collected in the two
locations. Our results indicate that the two extracts have a high antioxidant potential and are
not toxic in MRC-5 cells. It is noteworthy that a component in the FBd1 fraction of the
aqueous extract blocked 100% of the hemorrhagic activity of BaV when pre-incubated with
the venom. Studies to elucidate the chemical structure of this component are currently being
carried out by our group. / Bothrops atrox é responsável pela maioria dos acidentes ofídicos na região Norte do Brasil e
seu envenenamento se caracteriza por lesões locais intensas e distúrbios hemostáticos. Em
algumas regiões do país onde o atendimento dos acidentados por serpentes é precário, as
plantas medicinais têm se apresentado como alternativa de tratamento ou como um
complemento na falta de recursos soroterápicos. Este trabalho teve por objetivo principal
avaliar o potencial antiofídico dos extratos aquosos das cascas de Bellucia dichotoma Cogn.
(Melastomataceae) elaborados de acordo com uso tradicional. Inicialmente, foi investigada a
ação bloqueadora do extrato aquoso das cascas de B. dichotoma (EABd) frente às principais
atividades locais (Hemorrágica, fosfolipásica, edematogênica) induzidas pelo veneno de
Bothrops atrox (VBa), comparando os métodos de pré-incubação e de uso tradicional. As
concentrações dos compostos fenólicos (taninos e flavonoides), no extrato, foram
determinadas por ensaios colorimétricos. Para verificar a ação de EABd sobre o VBa foram
realizadas eletroforese em SDS-PAGE, Zimografia e Western-blot. Como a distribuição
geográfica, tipo de solo e condições climáticas, podem influenciar diretamente no potencial
biológico de uma espécie, avaliamos a eficácia do bloqueio de B. dichotoma coletada em dois
locais distintos (Manaus-AM e Santarém- PA), frente as atividades edematogênica,
fosfolipásica, desfibrinante e coagulante do veneno de B. atrox. Além de verificar o potencial
antioxidante e a citotoxicidade dos extratos frente a fibroblastos humanos da linhagem MRC-
5. Na tentativa de correlacionar o potencial antiofídico de B. dichotoma com seus
constituintes químicos, foi realizado um desenvolvimento preliminar de um método por
HPLC-DAD para isolamento dos constituintes majoritários do extrato aquoso das cascas de B.
dichotoma. A eficácia dos compostos isolados no bloqueio da atividade hemorrágica e
fosfolipásica A2 foi avaliada, inicialmente pelo protocolo de pré-incubação na proporção de
1:1 (veneno: compostos, m:m). Apartir dos resultados obtidos, foi possível concluir que o
conteúdo fenólico de EABd apresentou maiores concentrações de taninos (condensados e
hidrolisáveis) em relação aos flavonoides. Os bloqueios totais observados neste trabalho, após
a pré-incubação, podem ser devido à presença desses taninos no extrato. No entanto, o EABd,
quando administrado tradicionalmente (via oral), foi eficaz em bloquear a atividade
edematogênica induzida pelo VBa e teve um efeito adicional a ação do Soro antibotrópico na
inibição dessa atividade. Os contéudos de compostos fenólicos (fenóis totais, taninos totais e
taninos hidrolisáveis), foram superiores no extrato de B. dichotoma coletado em Manaus,
porém, essa diferença não influenciou o potencial antiofídico apresentado pelos extratos
aquosos coletados em Manaus-AM e Santarém-PA. Os extratos apresentaram um alto
potencial antioxidante e não foram considerados tóxicos frente às células MRC-5. Um
composto da fração FBd1 oriunda do extrato aquoso de B. dichotoma bloqueou 100% a
atividade hemorrágica do veneno de B. atrox (pré-incubação), no entanto, o composto isolado
encontra-se em fase de elucidação estrutural.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:http://localhost:tede/5562 |
| Date | 25 August 2016 |
| Creators | Moura, Valéria Mourão da |
| Contributors | Santos, Maria Cristina dos, Mourão, Rosa Helena Veras, Santos, Maria Cristina dos, Soares, Andreimar Martins, Corrêa, José Wilson do Nascimento, Oliveira, Cinthya Iamille Frithz Brandão de, Lima, Michella Bezerra |
| Publisher | Universidade Federal do Amazonas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, UFAM, Brasil, Instituto de Ciências Biológicas |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFAM, instname:Universidade Federal do Amazonas, instacron:UFAM |
| Rights | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 32215883775770440, 600, 500, 1984485651082134923 |
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