Made available in DSpace on 2015-04-11T13:38:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Final Alcineide Magalhaes 2010.pdf: 1214565 bytes, checksum: c15b666de091c06216476d80e7f8573f (MD5) Previous issue date: 2010-11-05 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / This study investigated the efficacy of Marsypianthes chamaedrys Vahl inflorescence and leaf extracts in inhibiting the inflammatory and coagulant actions of Bothrops atrox venom. M. chamaedrys, which is used in Brazil as a folk medicine to treat snakebites and local inflammatory reactions, was tested in vitro to determine its ability to block indirect phospholipase A2 and direct coagulant activities and in vivo to determine its ability to inhibit leukocyte migration, cytokine release and an increase in vascular permeability. In vitro, M. chamaedrys showed antiphospholipase A2 and anticoagulant activities; the latter activity was also confirmed by prothrombin time (PT) and activated partial thromboplastin time (aPTT) in the absence of venom. Of the extracts used, those obtained from the crushed plant had the greater inhibitory activity in in vitro tests, showing that biological activity is affected by the way extracts are obtained. In vivo, M. chamaedrys inhibited leukocyte migration and the release of the proinflammatory cytokines IL-6 and TNF- without altering the concentration of the anti-inflammatory cytokine IL-10; however, it did not inhibit an increase in vascular permeability. In preliminary tests, M. chamaedrys showed no acute toxicological or cytotoxic effects. As specific antivenoms are not effective in neutralizing the local action of Bothrops venoms, characterization of the anti-inflammatory mechanisms induced by M. chamaedrys is of vital importance if the extracts of this plant species are to be used in future as adjuvants in the treatment of snakebites. / Marsypianthes chamaedrys, espécie vegetal amplamente distribuída no Brasil, é utilizada popularmente em acidentes ofídicos e reações inflamatórias locais. No presente trabalho M.. chamaedrys foi testada frente às seguintes atividades do veneno de Bothrops atrox: inflamatória (fosfolipásica A2, migração de leucócitos, liberação de citocinas e aumento da permeabilidade vascular) e coagulante. In vitro, Marsypianthes chamaedrys foi eficaz em bloquear as atividades fosfolipásica A2 e coagulante, apresentando também atividade anticoagulante frente aos testes TAP e TTPA. Dos extratos obtidos, a forma de contuso apresentou melhor atividade inibitória nos ensaios in vitro, demonstrando que a atividade biológica é afetada pelo modo de obtenção dos extratos. In vivo, os extratos inibiram a migração de leucócitos e a liberação de citocinas pró-inflamatórias IL-6 e TNF-α, sem alterar significamente, a concentração da citocina anti-inflamatória IL-10; porém, não inibiram o aumento da permeabilidade vascular. Em ensaios preliminares, M. chamaedrys não demonstrou efeitos toxicológicos agudos ou efeitos citotóxicos. A caracterização dos mecanismos anti-inflamatórios induzidos por Marsypianthes chamaedrys é de extrema importância para que extratos obtidos dessa espécie vegetal possam, futuramente, ser utilizados como coadjuvante no tratamento, visto que os antivenenos específicos não são eficazes na neutralização das atividades locais, nos acidentes botrópicos.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-03-07T14:51:50Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese - Valéria M. Moura.pdf: 5547073 bytes, checksum: 6401a44660de65ea0a0bf12e74b2b049 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-03-07T14:59:53Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese - Valéria M. Moura.pdf: 5547073 bytes, checksum: 6401a44660de65ea0a0bf12e74b2b049 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-03-07T15:00:15Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese - Valéria M. Moura.pdf: 5547073 bytes, checksum: 6401a44660de65ea0a0bf12e74b2b049 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-07T15:00:15Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese - Valéria M. Moura.pdf: 5547073 bytes, checksum: 6401a44660de65ea0a0bf12e74b2b049 (MD5) Previous issue date: 2016-08-25 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Bothrops atrox is responsible for the majority of snakebites in northern Brazil and its poisoning is characterized by intense local and hemostatic disorders injuries. In some regions of the country where the care of accident victims by snakes is precarious, medicinal plants have been presented as an alternative treatment or as a complement in the absence of resources soroterápicos. The main goal of this study was to evaluate the anti-snakebite potential of aqueous extract of the bark of Bellucia dichotoma Cogn. (Melastomataceae) prepared in accordance with the traditional method. Initially, we investigated the potential of the extract (AEBd) to inhibit the major local (hemorrhagic, phospholipase A2 and edemainducing) activities of Bothrops atrox venom (BaV) and compared the pre-incubation method with the traditional method used in folk medicine. The concentrations of the phenolic components (tannins and flavonoids) in the extract were determined by colorimetric assays. To assess the action of AEBd on BaV, SDS-PAGE electrophoresis, zymography and Western-blot were carried out. As geographic distribution, soil type and climate can directly influence the biological potential of a species, we compared the potential of B. dichotoma collected in two different locations (Manaus, AM, and Santarém, PA) to inhibit the edemainducing, phospholipase A2, defibrinating and coagulant activities of BaV. We also investigated the antioxidant potential and cytotoxicity of the extracts using human fibroblasts (MRC-5 cell line). In an attempt to correlate the anti-snakebite potential of B. dichotoma with its chemical components, a preliminary HPLC-DAD method was developed to isolate the major components of the extract. The efficacy of the isolated components in inhibiting the hemorrhagic and phospholipase A2 activities of the venom was evaluated initially using a preincubation protocol and a venom:component ratio of 1:1 (w/w). Our results show that AEBd has a higher concentration of (condensed and hydrolysable) tannins than of flavonoids. The complete inhibition observed in this study when pre-incubation was used may be due to the presence of tannins in the extract. However, when AEBd was administered orally according to the traditional method, it was effective in inhibiting edema induced by BaV and enhanced the ability of the antivenom to inhibit edema formation. While the content of total phenolics, total tannins and hydrolysable tannins was greater in B. dichotoma extract collected in Manaus, this difference was not reflected in the anti-snakebite potential of the extracts collected in the two locations. Our results indicate that the two extracts have a high antioxidant potential and are not toxic in MRC-5 cells. It is noteworthy that a component in the FBd1 fraction of the aqueous extract blocked 100% of the hemorrhagic activity of BaV when pre-incubated with the venom. Studies to elucidate the chemical structure of this component are currently being carried out by our group. / Bothrops atrox é responsável pela maioria dos acidentes ofídicos na região Norte do Brasil e seu envenenamento se caracteriza por lesões locais intensas e distúrbios hemostáticos. Em algumas regiões do país onde o atendimento dos acidentados por serpentes é precário, as plantas medicinais têm se apresentado como alternativa de tratamento ou como um complemento na falta de recursos soroterápicos. Este trabalho teve por objetivo principal avaliar o potencial antiofídico dos extratos aquosos das cascas de Bellucia dichotoma Cogn. (Melastomataceae) elaborados de acordo com uso tradicional. Inicialmente, foi investigada a ação bloqueadora do extrato aquoso das cascas de B. dichotoma (EABd) frente às principais atividades locais (Hemorrágica, fosfolipásica, edematogênica) induzidas pelo veneno de Bothrops atrox (VBa), comparando os métodos de pré-incubação e de uso tradicional. As concentrações dos compostos fenólicos (taninos e flavonoides), no extrato, foram determinadas por ensaios colorimétricos. Para verificar a ação de EABd sobre o VBa foram realizadas eletroforese em SDS-PAGE, Zimografia e Western-blot. Como a distribuição geográfica, tipo de solo e condições climáticas, podem influenciar diretamente no potencial biológico de uma espécie, avaliamos a eficácia do bloqueio de B. dichotoma coletada em dois locais distintos (Manaus-AM e Santarém- PA), frente as atividades edematogênica, fosfolipásica, desfibrinante e coagulante do veneno de B. atrox. Além de verificar o potencial antioxidante e a citotoxicidade dos extratos frente a fibroblastos humanos da linhagem MRC- 5. Na tentativa de correlacionar o potencial antiofídico de B. dichotoma com seus constituintes químicos, foi realizado um desenvolvimento preliminar de um método por HPLC-DAD para isolamento dos constituintes majoritários do extrato aquoso das cascas de B. dichotoma. A eficácia dos compostos isolados no bloqueio da atividade hemorrágica e fosfolipásica A2 foi avaliada, inicialmente pelo protocolo de pré-incubação na proporção de 1:1 (veneno: compostos, m:m). Apartir dos resultados obtidos, foi possível concluir que o conteúdo fenólico de EABd apresentou maiores concentrações de taninos (condensados e hidrolisáveis) em relação aos flavonoides. Os bloqueios totais observados neste trabalho, após a pré-incubação, podem ser devido à presença desses taninos no extrato. No entanto, o EABd, quando administrado tradicionalmente (via oral), foi eficaz em bloquear a atividade edematogênica induzida pelo VBa e teve um efeito adicional a ação do Soro antibotrópico na inibição dessa atividade. Os contéudos de compostos fenólicos (fenóis totais, taninos totais e taninos hidrolisáveis), foram superiores no extrato de B. dichotoma coletado em Manaus, porém, essa diferença não influenciou o potencial antiofídico apresentado pelos extratos aquosos coletados em Manaus-AM e Santarém-PA. Os extratos apresentaram um alto potencial antioxidante e não foram considerados tóxicos frente às células MRC-5. Um composto da fração FBd1 oriunda do extrato aquoso de B. dichotoma bloqueou 100% a atividade hemorrágica do veneno de B. atrox (pré-incubação), no entanto, o composto isolado encontra-se em fase de elucidação estrutural.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-12-20T14:07:03Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Thaís Silva.pdf: 4741939 bytes, checksum: 340cbefd953468799b561dcd14beba48 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-12-20T14:07:18Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Thaís Silva.pdf: 4741939 bytes, checksum: 340cbefd953468799b561dcd14beba48 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-20T14:07:18Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Thaís Silva.pdf: 4741939 bytes, checksum: 340cbefd953468799b561dcd14beba48 (MD5) Previous issue date: 2015-11-19 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Envenomings resulting from snakebites were classified, in 2009, by the World Health Organization as a neglected tropical disease. In Brazil, the genus Bothrops sp. is responsible for most of these accidents and, in the Amazon region, the majority of snakebite reports is attributed to the species Bothrops atrox. The venom from snakes of the genus Bothrops sp. is composed by proteins such as phospholipase A2, metalloproteinases, among others. The hemorrhagic activity is caused by metalloproteinase which induce vascular damage and ischemic zones which contribute to the appearance of necrosis in the local tissue. The treatment recommended by the Ministry of Health of Brazil against snakebites is the antivenom administration, however, this treatment does not neutralize the local effects satisfactorily. The coastal communities of Northern Brazil, due to long distances from health centers, have limited access to serumtherapy treatment and use plants of folk medicine to block the actions induced by snake venoms. This study investigated the potential of the aqueous extract of Connarus favosus (AECf) to inhibit hemorrhagic and phospholipase A2 activities induced by Bothrops atrox venom (BaV) and to determine the antioxidant and antimicrobial potentials of the extract. AECf was analyzed phytochemically for secondary metabolites and phenolics (condensed tannins and hydrolyzable tannins) by colorimetry. Antioxidant activity was evaluated by quantitative assays using 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) and Fe3+/phenanthroline. Antimicrobial activity was evaluated by the disk diffusion and minimal inhibitory concentration test, and cytotoxicity was evaluated using human fibroblast cells (MRC-5). Inhibition of BaV-induced hemorrhagic activity was assessed after oral administration of the extract using pre-treatment, post-treatment and combined (BA plus AECf) treatment protocols. Inhibition of indirect hemolysis caused by phospholipase A2 (PLA2) was investigated in vitro. Interaction between AECf and BaV was investigated by SDS-PAGE electrophoresis, Western blot (Wb) and zymography. The phytochemical profile of AECf revealed ten secondary metabolite classes, and colorimetry showed high total phenolic and total (condensed and hydrolyzable) tannin content. AECf exhibited high antioxidant and antimicrobial potentials. The IC50 for the cytotoxic effect was 51.91 (46.86 - 57.50) μg/mL. Inhibition of BaV-induced hemorrhagic activity was significant in all the protocols, and inhibition of PLA2 activity was significant with the two highest concentrations. The BaV/AECf mixture produced the same bands as BaV by itself in SDS-PAGE and Wb although the bands were much fainter. Zymography confirmed the proteolytic activity of BaV, but when the venom was pre-incubated with AECf this activity was blocked. AECf was effective in reducing BaV-induced hemorrhagic activity when administered by the same route as that used in folk medicine. / Os envenenamentos decorrentes de picadas de serpentes foram classificados, em 2009, pela Organização Mundial da Saúde, como doença tropical negligenciada. No Brasil, o gênero Bothrops sp. é responsável pela maioria destes acidentes e, na região Amazônica, grande parte dos relatos de ofidismo é atribuída à espécie Bothrops atrox. Os venenos das espécies do gênero Bothrops sp. são compostos predominantemente por proteínas como fosfolipases A2, metaloproteinases, serinaproteases, entre outros. A atividade hemorrágica é causada pela ação de metaloproteinases que induzem dano vascular e zonas isquêmicas que contribuem para o surgimento de necrose do tecido local. O tratamento preconizado pelo Ministério da Saúde do Brasil para esses acidentes é a administração de antiveneno, entretanto, este imunobiológico não neutraliza os efeitos locais de forma eficaz. As comunidades ribeirinhas, da região Norte do Brasil, tem dificuldade de acesso ao tratamento soroterápico e utilizam plantas da medicina popular para bloquear as ações induzidas pelos venenos de serpentes. O presente estudo investigou o potencial do extrato aquoso de Connarus favosus (EACf) em inibir as atividades hemorrágica e fosfolipásica A2 induzida pela peçonha da serpente Bothrops atrox (PBa) determinar os potencias antioxidantes e antimicrobianos do extrato. EACf foi analisado fitoquimicamente para metabólitos secundários e os compostos fenólicos (taninos condensados e taninos hidrolisáveis) foram determinadas por ensaios colorimétricos. A ação antioxidante foi avaliada por ensaios quantitativos de 2,2- difenil-1-picril- hidrazila (DPPH) e Fe3+/Fenantrolina. A ação antimicrobiana foi avaliada por difusão em disco e concentração mínima inibitória, e a citotoxicidade foi avaliada utilizando linhagem de fibroblasto humano (MRC-5). A inibição da atividade hemorrágica induzida pelo PBa foi avaliada por administração via oral do EACf, seguindo protocolos de pré-tratamento, pós-tratamento e ação coadjuvante (EACf + soro antibotrópico SAB). A inibição da hemólise indireta causada pela fosfolipase A2 (PLA2) foi testada in vitro. A interação entre EACf e PBa foram avaliadas por eletroforese SDS-PAGE, Western Blot (Wb) e Zimografia. No perfil fitoquímico foram identificadas dez classes de metabólitos secundários, e os ensaios colorimétricos mostraram altas quantidades de fenóis totais e taninos (condensados e hidrolisáveis). O EACf exibiu alto potencial antioxidante e antimicrobiano. O IC50 do efeito citotóxico foi 51,91 (46,86 - 57,50) μg/mL. A inibição da atividade hemorrágica do PBa foi significativa em todos os protocolos testados, e a inibição da PLA2 foi significativa para as duas concentrações mais altas. A mistura PBa/EACf produziu as mesmas bandas do veneno isolado no SDS-PAGE e Wb, porém de forma mais branda. A zimografia confirmou a atividade proteolítica do PBa, mas quando o veneno foi pré-incubado com o EACf houve bloqueio dessa atividade. O EACf foi eficaz no bloqueio da atividade hemorrágica da PBa quando administrado nas doses e via tradicionalmente utilizadas.