Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2016-09-20T04:03:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2016 / Introdução: O atual e crescente número de compostos derivados de plantas nos mais variados estágios de desenvolvimento, principalmente em estudos clínicos, indica que a investigação científica de produtos naturais é uma fonte viável na pesquisa de novos candidatos a fármacos. Neste contexto, a Ilex paraguariensis A. St. Hil. (Aquifoliaceae), conhecida popularmente como erva-mate, é a principal representante do gênero Ilex e uma espécie nativa da América do Sul, distribuída nas regiões subtropicais e temperadas da Argentina, Paraguai, Uruguai e Brasil. É amplamente usada na medicina popular para tratar artrite, obesidade, fadiga e acometimentos hepáticos e intestinais. Por este motivo, acreditamos que o seu estudo farmacológico merece destaque. Objetivos: Avaliar o efeito anti-inflamatório e imunomodulador do extrato bruto padronizado, frações e compostos majoritários da I. paraguariensis, administrados por via oral, no modelo de pleurisia induzida pela carragenina (Cg) em camundongos. Método: Folhas secas e trituradas de I. paraguariensis foram submetidas à turbolização com etanol 20° GL para obtenção do extrato bruto (EB) liofilizado. As frações butanólica (BuOH) e residual aquosa (RAq) foram obtidas por partição com n-butanol. O perfil químico do extrato bruto foi determinado por cromatografia líquida de ultra eficiência (CLUE) e espectrometria de massas (EM). No modelo da pleurisia, foram utilizados camundongos albinos Swiss fêmeas, 1 mês, 18-25g (PP00965/CEUA/2015). A pleurisia foi induzida de acordo com a metodologia descrita por Saleh e colaboradores (1996). Após 4 horas de pleurisia, o lavado pleural obtido dos animais pré-tratados com EB, BuOH, RAq, cafeína (Caf), rutina (Rut) ou ácido clorogênico (AcCl) foi utilizado para avaliar a migração de leucócitos totais, neutrófilos e quantificação da concentração de exsudato. Em seguida, procedeu-se a avaliação das atividades das enzimas mieloperoxidase (MPO), adenosina desaminase (ADA), quantificação da concentração dos metabólitos do óxido nítrico (NOx), concentração de citocinas pró e anti-inflamatórias (IL-6, IL-17A, IFN-?, TNF-a, IL-2, IL-4 e IL-10). O tecido pulmonar também foi coletado e utilizado para avaliação histológica e para avaliar a ação dos compostos majoritários sobre a fosforilação da subunidade p65 do NF-?B (p-p65 NF-?B). Diferenças estatísticas foram determinadas por ANOVA complementada por Newman-Keuls onde P<0,05 foram considerados significativos. Resultados: Nas doses estudadas, EB, BuOH, RAq, Caf, Rut e AcCl inibiram de maneira significativa a migração de leucócitos, às custas de neutrófilos, bem como a exsudação (P<0,05). As doses selecionadas de EB, frações e compostos majoritários apresentaram efeito inibitório significativo sobre MPO, ADA e NOx, além de, inibir as principais citocinas pró inflamatórias relacionadas a polarização do sistema imune para a resposta Th1/Th17 (P<0,05). EB, RAq e AcCl demonstraram causar aumento significativo sobre a concentração de IL-10 (P<0,05). A lesão pulmonar causada pela Cg foi atenuada pelo pré-tratamento dos animais em todos os grupos estudados (P<0,05). Finalmente, os compostos majoritários Caf, Rut e AcCl inibiram significativamente a fosforilação da subunidade p65 do NF-?B quando comparados ao grupo Cg (P<0,01). Conclusão: Os resultados do presente estudo demonstraram que a atividade anti-inflamatória da I. paraguariensis no modelo da pleurisia induzida pela carragenina é decorrente, dentre outros fatores, da sua capacidade imunomoduladora sobre o microambiente inflamatório sendo esse efeito, em parte, consequência da ação de seus compostos majoritários sobre via de sinalização do NF-?B.<br> / Abstract : Introduction: The current and growing number of plant-derived compounds in various stages of development, particularly in clinical trials, indicates that scientific research of natural products is a viable source in the search for new drug candidates. In this context, Ilex paraguariensis A. St. Hil. (Aquifoliaceae), popularly known as yerba mate, is a representative of the Ilex genus and a native species of South America, distributed in subtropical and temperate regions of Argentina, Paraguay, Uruguay and Brazil. It is widely used in folk medicine to treat arthritis, obesity, fatigue and liver and intestinal affections. For this reason, we believe that its pharmacological study must be highlighted.Objectives: Evaluate the anti-inflammatory and immunomodulatory effects of I. paraguariensis standardized crude extract, fractions and major compounds, orally administered, in the carrageenan (Cg)-induced murine model of pleurisy.Methodology: Dried and crushed leaves were subjected to turbolization process with 20° GL ethanol to obtain freeze-dried crude extract (EB). The butanolic fraction (BuOH) and aqueous residual fraction (RAq) were obtained by partitioning with n-butanol. The chemical profile of extract was determined by ultra performance liquid chromatography (UPLC) and mass spectrometry (MS). The pleurisy model employed female Swiss mice with 1 month, weighing 18-21g (this project was approved by the Ethics Committee on Animal Use of UFSC - PP00965 / CEUA / 2015). Pleurisy was induced according to the method described by Saleh and coworkers (1996). Four hours after pleurisy, pleural fluids leakage obtained from pretreated animals with EB, BuOH, RAq, caffeine (Caf), rutin (Rut) or chlorogenic acid (AcCl) were used to evaluate the inflammatory parameters: total leukocytes and neutrophils migration, and quantification of exudate concentration. Then, proceeded to the evaluation of myeloperoxidase (MPO) and adenosine deaminase (ADA) activities, measurement of nitric oxide metabolites (NOx) concentration, quantification of pro-and anti-inflammatorycytokines (IL-6, IL-17A IFN-?, TNF-a, IL-2, IL-4 and IL-10). The lung tissues of all groups were collected and used for histologic evaluation of leukocyte infiltration and edema, and lung tissues obtained from groups treated only with major compounds were used to evaluate the p65 NF-?B phosphorylation (p-p65 NF-kB). Statistical differences were determined by ANOVA followed by Newman-Keuls post-hoc test. P<0.05 values were considered significant.Results: BE, BuOH, RAq, Caf, Rut and AcCl significantly reduced the leukocyte content, due to inhibition of neutrophil migration, as well as exudation (P<0.05). The selected doses of EB fractions and major compounds showed significant effect upon MPO, ADA and NOx, and, in general, inhibited the release of pro-inflammatory cytokines related to Th1/Th17 polarization (P<0.05). EB, RAq and AcCl showed a significant increase of IL-10 concentration (P<0.05). The lung injury caused by Cg was attenuated by animals pretreatment in all groups (P<0.05). Finally, the major compounds Caf, Rut and AcCl significantly inhibited p65 NF-?B phosphorylation when compared to the Cg group (P<0.01).Conclusion: The results of this study showed that anti-inflammatory activity of I. paraguariensis in the carrageenan-induced pleurisy model is due, among other factors, to its immunomodulatory capacity at inflammatory microenvironment and this effect is partly result of the action of its major compounds on signaling pathway of NF-?B.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufsc.br:123456789/167617 |
| Date | January 2016 |
| Creators | Luz, Ana Beatriz Gobbo |
| Contributors | Universidade Federal de Santa Catarina, Dalmarco, Eduardo Monguilhott |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | 112 p.| il., grafs., tabs. |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFSC, instname:Universidade Federal de Santa Catarina, instacron:UFSC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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