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Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2017 / Made available in DSpace on 2017-09-19T04:11:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 347031.pdf: 2342562 bytes, checksum: ef4ef1a2889ba2fc29d03ffea93fcf73 (MD5) Previous issue date: 2017 / Fragaria x ananassa Duch., conhecida como morango-de-jardim, é consumida mundialmente in natura ou na forma de sucos, geleias e iogurtes produzidos pela indústria alimentícia. Diversos estudos têm demonstrado que o morango pode ter importantes atividades biológicas, como antioxidante, anti-hipertensivo e também anti-inflamatório. Neste sentido, avaliamos o efeito anti-inflamatório do extrato dos frutos de Fragaria x ananassa e seu principal composto, a pelargonidina-3-O-glicosídeo (P3G), analisando seus efeitos na migração de leucócitos, níveis de exsudação, atividades da mieloperoxidase (MPO), adenosina desaminase (ADA), concentração dos metabólitos do óxido nítrico (NOx), fator de necrose tumoral-alfa (TNF-a) e de interleucina-6 (IL-6), utilizando o modelo da pleurisia induzida pela carragenina em camundongos. Também foi realizado um estudo in vitro para identificar a ação específica de P3G em proteínas cinases ativados por mitógeno (p38MAPK), cinase c-Jun N-terminal (JNKMAPK), fator de transcrição nuclear kappa B (NF-?B) e proteína ativadora-1 (AP-1). Para realização dos ensaios in vivo, os frutos congelados de morangos foram sonicados com 25 mL de metanol acidificado (HCl 1%) durante 75 minutos. Os extratos foram filtrados, e o solvente evaporado sob pressão reduzida até à secura produzindo o extrato bruto (EB). O composto majoritário presente no EB (P3G) foi utilizado nos experimentos, em forma de padrão obtido a partir de fonte comercial (Sigma-Aldrich, Co.). Em ambos os experimentos a dexametasona (Dex) foi utilizada como medicamento de referência anti-inflamatório. Na análise estatística, utilizou-se a análise de variância (ANOVA) seguida pelo teste post-hoc de Newman-Keuls. Valores de p < 0,05 foram considerados significativos. Os resultados apresentados neste estudo demonstraram que o EB e P3G foram capazes de reduzir todos os parâmetros inflamatórios avaliados no modelo da pleurisia induzida pela carragenina (p < 0,05) e também na cultura celular de macrófagos murinos induzidos por lipopolissacarídeo (LPS) (p < 0,01), com exceção para a P3G, que não causou inibição na fosforilação da p38MAPK. Além disso, foi demonstrado que o mecanismo molecular desse efeito, envolve a inibição da ativação de IkB-a (p < 0,05) e a redução da fosforilação de JNKMAPK (p < 0,01). Esses efeitos levaram a uma redução da ativação do NF-?B (p < 0,05) e do AP-1 (p < 0,001), dois fatores de transcrição de destaque na cascata inflamatória desencadeada pela ativação do receptor de membrana Toll-like tipo 4 (TLR4). Esses resultados sugerem que o composto testado é um potencial candidato para o desenvolvimento de agentes anti-inflamatórios para utilização em patologias nas quais essa via exerce um papel de destaque.<br> / Abstract: Fragaria x ananassa Duch., known as garden strawberry, is worldwide consumed in natura or in the form of juices, jams or yogurts produced by the food industry. Studies have shown that strawberry may have important biological activities, such as antioxidant, anti-inflammatory and antihypertensive. We therefore evaluated the anti-inflammatory effect of Fragaria x anannassa fruit extract and its major compound, pelargonidin-3-O-glucoside (P3G), analyzing its effect on leukocyte migration, exudation levels, myeloperoxidase (MPO), adenosine deaminase (ADA) activities and nitric oxide (NOx), tumoral necrosis factor (TNF-a) and interleukin 6 (IL-6) levels, using an in vivo murine model of pleurisy. We also have carried out an in vitro study to identify the specific action of P3G in p38 mitogen-activated protein kinase (p38MAPK), c-Jun N-terminal kinase (JNKMAPK), nuclear transcript factors ?B (NF- ?B) and activated protein 1 (AP-1). To this end, the plant material was subjected to extraction. Briefly, frozen fruits of strawberry were sonicated with 25 mL of acidified (HCl 1%) methanol for 75 minutes. The extracts were filtered, and the solvent evaporated under reduced pressure to dryness yielding the crude extract (CE). The major compound present in CE (P3G) was used in our experiments as a standard obtained from commercial source (Sigma-Aldrich, Co.). In in vivo experiments, all inflammatory parameters were assessed 4 hours after pleurisy induction. In all of these work procedures, dexamethasone (Dex 0.5 mg / kg, p.o.) was used as anti-inflammatory reference drug. In in vitro experiments, the inflammatory parameters were measured by Western Blot, also using dexamethasone as reference drug (Dex 7 µM). For statistical analysis, we used the analysis of variance (ANOVA) followed by Newman-Keuls post-hoc test. P values < 0.05 were considered significant. The results presented in our study demonstrated that the crude extract (CE), and P3G are able to reduce the inflammatory parameters evaluated in the murine model of pleurisy (p < 0,05), and also in the cell culture of murine macrophages (p < 0,01), except for P3G, that did not cause inhibition in p38MAPK phosphorylation. Moreover, we demonstrated that the molecular mechanism of this effect involves the arrest of IkB-a activation (p < 0,05) and reduction in JNKMAPK phosphorylation (p < 0,01). These effects lead to a reduction in NF-?B (p < 0,05) and AP-1 activation (p < 0,001) of the transcription factors conductors of the inflammatory pathway triggered by the activation of TLR4. These results suggests that the tested compound is a potential candidate for a development of anti-inflammatory agent to treat diseases in which this pathway exerts a pivotal role.

Resumo

Orientadores: Nancy Airoldi Teixeira, Edson Antunes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-27T18:38:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Datti_Marcelo_M.pdf: 11172881 bytes, checksum: c8a385daa5a9896075459e559ee4b05b (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Neste trabalho investigamos o efeito do estresse crônico pré-natal sobre a resposta inflamatória em ratos. Ratas Wistar prenhes foram submetidas ao modelo de estresse proposto por WllLNER et alo(1987), que consistia de alterações variadas e transitórias no ambiente de criação dos animais durante as duas últimas semanas de gravidez, o grupo controle permaneceu sem qualquer manipulação, exceto os cuidados rotineiros. Os descendentes, entre 75 e 90 dias, foram submetidos aos seguintes testes: edema de pele, edema de pata, pleurisia não alérgica e pleurisia alérgica. Para o protocolo de pleurisia alérgica, os animais foram sensibilizados no primeiro dia do protocolo de estresse com uma injeção subcutânea de ovoalbumina (OVA), após o último dia do protocolo de estresse os animais eram desafiados com OVA na cavidade pleural. A pleurisia não alérgica foi induzida com carragenina, o edema de pata foi induzido com carragenina ou C48/80 e o edema de pele foi induzido com PAF, LPS, carragenina e C48/80. Na pleurisia alérgica o lavado pleural foi coletado 24h após o desafio antigênico com OVA, no procedimento de pleurisia não alérgica, o lavado pleural foi coletado 6, 24 e 48h após indução com carragenina. As medidas do volume das patas para o edema foram realizadas 60, 120, 180,240 e 300min após a indução com carragenina e 15, 30, 60, 120 e 180min pam 0.C48/80. Os resultados demonstraram que não houve diferença significativa entre os grupos estressados e não estressados n o teste de edema de pele. No edema de pata induzido por C48/80, a resposta edematogênica foi diminuída, já quando o estímulo foi carragenina a resposta não foi alterada. Na pleurisia não alérgica, os animais prenatalmente estressados apresentaram um significativo aumento no influxo de eosinófilos em comparação aos animais não estressados no tempo de 24h. Na pleurisia alérgica os ratos prenatalmente estressados exibiram uma exacerbação no infiltrado de leucócitos, esta ocorreu em todos os tipos celulares estudados: neutrófilos, eosinófilos e células mononucleares / Abstract: In this work we investigated the chronic mild prenatal stress effect on the vascular and cellular inflammatory response in rats. Pregnant female Wistar rats were submitted to the stress model proposed by WILLNER et al., 1987, that consisted of varied and transitory alterations of the environment of creation of the animals in the last 2 weeks of gestation, the control group stayed without any manipulation, except routine cares. The adults offspring were submitted to the following tests: skin oedema, paw oedema, non allergic pleurisy, allergic pleurisy. To the allergic pleurisy protocol, the animals were sensitized in the first day of stress protocol with a subcutaneous injection of ovalbumin (OVA), after the last day of the stress protocol the animals were challenged with OVA in the pleural cavity. The non-allergic pleurisy was induced by carrageenan, the oedema was induced by carrageenan or C48/80 and the skin oedema with PAF, LPS, carrageenan and C48/80. In the allergic pleurisy de pleural lavage was collected 24h after the antigenic challenge with OVA, in the non-allergic pleurisy procedure the pleural lavage was collected 6, 24 and 48h after induction by carrageenan. The volume of paws measure to non-allergic paw oedema was performed 60, 120, 180, 240 and 300min after induction by carrageenan and 15,30,60, 120 and 180min for C48/80. The results showed not significant difference between the stressed and non-stressed groups in the skin oedema to all stimulus. Already, the edematogenic response was diminished to the prenatally stressed rats in comparison to the non-stressed in the paw oedema induced C48/80, but not in the rats were stimulated with carrageenan. The non-alIergic pleurisy showed a significant enhancement in the eosinophils infiltration 24h challenge with carrageenan in prenatally stressed rats. In the allergic pleurisy the prenatally stressed rats exhibited a significant exacerbation in the leukocytes influx, differentially this exacerbation occurred to all cellular types studied: neutrophils, eosinophils and mononuclear cells / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientadores : Nancy Airoldi Teixeira, Edson Antunes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-27T21:24:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Datti_FernandaBeatrizBordonideGodoy_M.pdf: 10237090 bytes, checksum: 9365e4ee4dca347c2b5b33b760dad23c (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Neste trabalho investigamos o efeito estresse crônico sobre a resposta inflamatória vascular e celular induzida por estímulo alérgico ou não alérgico em ratos. Os ratos foram submetidos ao modelo de estresse proposto por WlLLNER et al.1987, que consistia de alterações variadas e transitórias no ambiente de criação dos animais durante 2 semanas, o grupo controle permaneceu sem qualquer manipulação, exceto os cuidados rotineiros. Após o último dia do protocolo de estresse os animais foram submetidos aos seguintes testes: lavado broncoalveolar (LBA), pleurisia, edema de pata induzido por estímulo alérgico e não alérgico. Para os protocolos de LBA e edema de pata alérgico os animais foram sensibilizados no primeiro dia do protocolo de estresse com um injeção subcutânea de ovoalbumina (OVA), após o último dia do protocolo de estresse os animais eram desafiados com OVA na região subplantar ou intratraquealmente. A pleurisia foi induzida com carragenina e o edema de pata não alérgico foi induzido com carragenina ou C48/80. O LBA foi coletado 48h após o desafio antigênico com OVA, no procedimento de pleurisia o lavado pleural foi coletado 6 e 24h após indução com carragenina. A medida do volume das patas para o edema de pata alérgico foi realizado nos tempos 15, 30, 60, 120, 180, 240 e 300min após desafio antigênico com OVA. No procedimento de edema de pata não alérgico os tempos avaliados foram 60, 120, 180? 240 e 300min após indução com carragenina e 15,30,60, 120 e 180min para C48/80. Os resultados demonstraram que não houve diferença significativa entre os grupos estressados e não estressados nos experimentos que avaliavam o perfil da migração celular (LBA e pleurisia). Já nos experimentos que avaliavam a resposta edematogênica houve um significativo aumento no edema dos ratos estressados em comparação aos não estressados nos edemas de pata induzidos por OVA e carragenina, mas não nos ratos que receberam C48/80, sugerindo que esta mudança no perfil edematogênico não é mediada pela histamina desgranulada de mastócitos / Abstract: In this work we investigated the chronic stress effect on the vascular and cellular inflammatory response induced by allergic or non allergic stimulus in rats. The animaIs were submitted to the stress model proposed by WILLNER et al., 1987, that consisted of varied and transitory alterations of the environment of creation of the animaIs for 2 weeks, the control group stayed without any manipulation, except routine cares. Afier the last day of stress protocol the animaIs were submitted to the following tests: bronchoalveolar lavage (BAL), pleurisy, paw oedema induced by allergic and non aIlergic stimulus. To the BAL and allergic paw oedema protocols the animais were sensitized in the first day of stress protocol with a subcutaneous injection of ovalbumin I (OVA), afier the Iast day of the stress protocol the animais were challenged with OVA in the subplantar area or in to the airways. The pleurisy was induced by carrageenan and the non aIlergic paw oedema was induced by carrageenan or C48/80. BAL was collected 48h afier the antigenic challenge with OVA., in the pleurisy procedure the pleural lavage was collected 6 and 24h afier induction by carrageenan. The volume ofpaws measure to the allergic paw oedema was performed 15, 30, 60, 120, 180, 240 and 300min afier antigenic chaIlenge with OVA. In the non allergic paw oedema procedure the measure was performed 60, 120, 180, 240 and 300min afier induction by carrageenan and 15,30,60, 120 and 180minfor C48/80. The results showed not significant difference between the stressed and non stressed groups in the experiments that evaluated the profile of the cellular migration (BAL and pleurisy). Already, the edematogenic response was exacerbated to the stressed rats in comparison to the non stressed in the paw oedema induced by OVA and carrageenan, but not in the rats that received C48/80, suggesting that this phenomenon is not mediated by the histamine released by mast cells / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Gilberto de Nucci / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-13T21:44:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Caticha_AuroraSantanade_M.pdf: 1769826 bytes, checksum: 9bfe9aff6d03543520100a61ca89f27d (MD5) Previous issue date: 1990 / Resumo: A superfície das células endoteliais é recoberta por microdomínios constituídos de carga negativa. A presença de substâncias catiônicas, por exemplo policátions, em contato com a derme, peritôneo e pata de rato desencadeiam um processo inflamatório caracterizado pela infiltração de leucócitos e aumento da permeabilidade local. Neste trabalho avaliou-se o efeito de policátions (poli-L-arginina e poli-L-lisina) em duas superfícies de caracteristicas fisiológica e morfológica distintas: a pleura e o alvéolo. Para tal, empregou-se o modelo da pleurisia (pleura) e o modelo da instilação intratraqueal de policátions (alvéolo) em animais. Policátions foram agentes capazes de induzir pleurisia e edema de pulmão. A introdução intratraqueal desse agente, na mesma dose utilizada por via pleural apresentou alta mortalidade. A resposta inflamatória a esse composto depende do local de sua aplicação. A depleção de histamina e 5-HT nos animais reduziu e o volume de exsudato produzido nos animais submetidos à pleurisia, porém não reduziu a mortalidade nos animais que receberam policátions pela via intratraqueal. O antagonismo da carga dos policátions, através da utilização de agentes aniônicos (sulfato de heparina e de dermatam) reduziu drasticamente o volume de exsudato pleural e aboliu completamente o efeito letal desse agente quando realizada a instilação intratraqueal. Esses resultados sugerem que a superfície pleural e alveolar são dotadas de microdominios negativos, que podem ser neutralizados durante o processo inflamatório de acordo com essa teoria agentes aniônicos aferecem uma nova abordagem terapêutica no tratamento da inflamação / Abstract: The surface of endothelial cells is covered by negatively charged microdomains. The presence of cationic substances, for example polycations, in contact with rat skin, peritoneum and paw initiates an inflammatory process characterized by the infiltration of leukocytes and an increase in local permeability. In this work, the effect ofpolycations (poly-L-arginine and poly-L-lysine) was studied in two surfaces with distinct physiological and morphological characteristics: the pleura and the alveolus. For this purpose, a model of pleurisy and a model utilizing the intratracheal administration of polycations were used. Polycations were capable of inducing pleurisy and pulmonary edema. The intratracheal administration of these compounds, in the same dose used via the pleural route, resulted in a high mortality: The inflammatory response to these compounds depends on the site of application. Histamine and 5-HT depletion reduced the volume of exudate produced in animals subjected to pleurisy, but did not reduce the mortality in animals which received polycations intratracheally. Neutralization of the polycation charge, through the use of anionic compounds (heparin and dermatan sulfate) markedly reduced the volume of pleural exudate and completely abolished the lethal effect of polycations administered intratracheally. These results suggest that the pleural and alveolar surfaces possess negatively charged microdomains which may be neutralized during the inflammatory process. This hypothesis suggests that anionic compounds may offer a new therapeutic approach to the treatment of inflammation / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia. / Made available in DSpace on 2012-10-21T13:02:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2013-07-16T19:38:18Z : No. of bitstreams: 1 205880.pdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Introdução: O modelo da pleurisia induzido pela carragenina é caracterizado por um aumento significante da exudação e da migração celular, às custas de neutrófilos 4 h depois de indução de pleurisia. Esta fase é nomeada de fase recente. A fase tardia ocorre 48 h depois da indução da pleurisia e é caracterizada por um aumento significante da exsudação e migração celular às custas de mononucleares. O SSR180575 é um ligante do receptor benzodiazepínico periférico e sugere-se que

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-graduação em Farmácia. / Made available in DSpace on 2013-07-16T01:56:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 211918.pdf: 1400953 bytes, checksum: e87383c83168bc8eaaa839bf04cbff5e (MD5) / Introdução: Espécies de Passiflora (Passifloraceae) são plantas nativas de áreas tropical e subtropical das Américas (PIO CÔRREA, 1978). Apresentam como compostos majoritários, os flavonóides (PETRY et al., 2001, DE-PARIS et al., 2002). Na medicina popular além de serem usadas por suas propriedades psicotrópicas, são usadas para o tratamento de inflamações, como a da pele e bronquites (GUPTA, 1995, MORS; RIZZINI; PEREIRA, 2000). Estudos demonstraram seus efeitos no Sistema Nervoso Central (SPERONI; MINGHETTI, 1988; DE-PARIS et al., 2002; OGA et al., 1984). Por outro lado, são poucas as investigações farmacológicas sobre suas propriedades antiinflamatórias.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2015-11-03T03:08:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 334653.pdf: 1672072 bytes, checksum: ad5be743e15ff7c4b40c8eeae113ea23 (MD5) Previous issue date: 2015 / Senecio Brasiliensis Less (S. brasiliensis) popularmente conhecida como "Flor-das-almas", "Margaridinha" ou "Maria mole" é utilizada na medicina popular como um anti-inflamatório, no tratamento de úlcera gástrica e dor de estômago. Embora o gênero Senecio já tenha sido amplamente estudado para avaliar as atividades farmacológicas que suportam seu uso na medicina tradicional, poucos estudos têm avaliado a atividade anti-inflamatória desta espécie. Portanto, objetivo deste estudo foi investigar a atividade anti-inflamatória da S. brasiliensis, uma espécie nativa no Brasil, usando um modelo murino de pleurisia induzida pela carragenina. As flores secas de S. brasiliensis foram maceradas e extraídas com etanol obtendo-se o extrato bruto (CE). As frações acetato de etila (AcOEt), fração rica em alcalóides (AF), hexano (HEX) e diclorometano (DCM) foram obtidas a partir do CE. Senecionina (Sen), integerrimina (Int) e N-óxido senecionina foram obtidas da fração FA, e uma mistura de ácidos x,y-dicafeiolquínicos (1,4-, 3,4-, 3,5- e 4,5-: DCQs) foi obtida da fração AcOEt. No protocolo para identificar e elucidar a estrutura dos compostos foram utilizadas técnicas de eletroforese capilar, infravermelho, ressonância magnética nuclear (RMN) e cromatografia líquida de alta eficiência acoplada a espectrometria de massa (HPLC/MS). Neste protocolo experimental utilizou-se o modelo da pleurisia induzida pela carragenina, em camundongos. Neste modelo foram estudados os efeitos da S. brasiliensis sobre: migração de leucócitos, atividades da mieloperoxidase (MPO) e adenosina desaminase (ADA) assim como as concentrações do fator de necrose tumoral alfa (TNF-a), interleucina 1-beta (IL-1ß) e interleucina 17A (IL-17A) . Todos estes parâmetros foram analisados no líquido da cavidade pleural, Além disso, foram analisados no tecido pulmonar, os efeitos dos compostos Sen, Int e DCQs, sobre a fosforilação da proteína p65 (p-p65) da via do fator de trancrição nuclear kappa B (NF-?B). Ensaios colorimétricos foram utilizados para analisar MPO e ADA e testes imunoenzimáticos (ELISA) para TNF-a, IL-1ß, IL-17A e a fosforilação da p65. O CE, as frações AcOEt e AF, e/ou os compostos Sen, Int e DCQs inibiram os leucócitos (p < 0.05), a atividade de MPO e ADA (p < 0.01), as concentrações de TNF-a(p < 0.05) e IL-17A (p < 0.01), O CE, as frações AcOEt e AF, e DCQs, também diminuíram as concentrações de IL-1ß (p < 0.01). Os compostos isolados Sen, Int e DCQs inibiram fosforilação da p-65 (NF-?B) (p < 0.05). Este estudo demonstrou que a S. brasiliensis tem uma importante atividade anti-inflamatória pela inibição da migração de leucócitos ativados devido a diminuição de neutrófilos no sítio da inflamação. Este efeito pode ser atribuído a inibição de citocinas pró-inflamatórias e também da ativação da via do NF-?B. Os compostos Sen, Int, e DCQs pode ser, pelo menos em parte, responsáveis pela ação anti-inflamatória da S. brasiliensis.<br> / Abstract : Senecio Brasiliensis (Spreng) Less (S. brasiliensis), known as "Flor-das-almas", "Margaridinha" or "Maria mole", is used in folk medicine as an anti-inflammatory and to treat gastric ulcers and stomach pain. While the Senecio genus has been widely studied for its pharmacological activities to support its use in traditional medicine, few studies focus on the anti-inflammatory activities of the species. To investigate the anti-inflammatory activities of S. brasiliensis, a specie native to Brazil, using a murine model of pleurisy induced by carrageenan. The dried flowers of S. brasiliensis were macerated and subjected to ethanol (96%) extration to obtain the crude extract (CE). The ethyl acetate (AcOEt), alkaloid (AF), hexane (HEX) and dichloromethane (DCM) fractions were obtained by extracting the CE with different solvents. Senecionine (Sen), integerrimine (Int) and senecionine N-oxide` and a mixture of dicaffeyoilquinic acids (1,4-, 3,4-, 3,5- and 4,5- dicaffeoylquinic acids, DCQs) were obtained from the AF and AcOEt fractions, respectively. The physical characteristics and column chromatography were used to extract and identify the compounds. Nuclear magnetic resonance (NMR), and gas chromatography?mass spectrometry (GC-MS), and high-performance liquid chromatography-diode array detector (HPLC-DAD) coupled with electrospray mass spectrometry (ESI-MS) (HPLC-DAD-MS/MS) and infrared (IR) spectroscopy were used to identify, elucidate and confirm the structures of the compounds. Swiss mice were used in the in vivo experiments. We evaluated the effect of the CE, its derived fractions (AcOEt, AF, HEX and DCM), and the isolated compounds (Sen, Int, N-oxide senecionine) and DCQs on: leukocyte migration, exudate concentrations, myeloperoxidase (MPO) and adenosine-deaminase (ADA) activities, and tumour necrosis factor-a (TNF-a), interleukin 1ß (IL-1ß) and interleukin 17A levels in the fluid leakage from the pleural cavity using a mouse model of pleurisy induced by carrageenan. The effects of the isolated compounds, Sen, Int, N-oxide senecionine and DCQs, were also analysed for their ability to inhibit p65 phosphorylation (p-p65) in the nuclear factor-kappa B (NF-?B) pathway in the lung tissue. MPO and ADA were analysed by colorimetric assays, and the cytokines and protein p65 levels were determined using an enzyme immunoassay (EIA). The CE, its AcOEt and AF fractions, and its compounds (Sen, Int and DCQs), significantly reduced leukocyte migration (P < 0.05), MPO and ADA activities (P < 0.01), and TNF-a (P < 0.05), and IL-17A levels (P < 0.01). The CE, the AcOEt and AF fractions, and the DCQs also decreased IL-1ß levels (P < 0.01). The isolated compounds, Sen, Int and the DCQs, inhibited p65 phosphorylation (NF-?B) (P < 0.05). This study demonstrated that S. brasiliensis has important anti-inflammatory properties that are capable of inhibiting activated leukocyte migration by decreasing neutrophil migration. This effect may be attributed to the inhibition of pro-inflammatory cytokines and the reduction of the NF-?B pathway. The compounds Sen Int, and DCQs may be responsible for the anti-inflammatory actions of S. brasiliensis.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2014. / Made available in DSpace on 2014-08-06T17:59:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 326946.pdf: 2794275 bytes, checksum: d917eb608c08841e41db6fd6634a4bab (MD5) Previous issue date: 2014 / A Polygala molluginifolia é uma planta nativa do sul do Brasil popularmente chamada de cânfora. Plantas do gênero Polygala têm sido usadas na medicina tradicional para o tratamento de diferentes patologias, inclusive doenças inflamatórias. O objetivo deste trabalho foi investigar o efeito anti-inflamatório do extrato bruto, frações e compostos obtidos da espécie Polygala molluginifolia (Polygalaceae) no modelo da pleurisia induzida pela carragenina em camundongos. O material vegetal da Polygala molluginifolia foi submetido a extração por maceração com etanol 96% para a obtenção do extrato bruto (EB). O EB foi submetido a procedimentos cromatográficos em silica gel para a obtenção de diferentes frações, dentre elas as frações aquosa (Aq), acetato de etila (AcOEt) e hexano (Hex). O composto 1 (5,3',4'-trihidroxi-6",6"-dimetilpirano [2",3":7,6] isoflavona) (Iso), foi isolado da fração AcOEt e o composto 2 (Rutina) (Rut), foi isolado da fração Aq e foram identificados por meio de espectroscopia de 1H e 13C NMR e quantificados por meio de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE-UV). A avaliação do efeito anti-inflamatório foi realizada por meio da contagem de leucócitos, neutrófilos e concentrações de exsudato. Foram utilizadas técnicas padronizadas descritas na literatura para verificar a atividade das enzimas mieloperoxidase (MPO) e adenosina-desaminase (ADA) e concentrações de nitrito/nitrato (NOx). Neste estudo também foi investigado o efeito da Polygala molluginifolia sobre a concentração e expressão do RNA mensageiro das citocinas fator de necrose tumoral alfa (TNF-?) e interleucina-1 beta (IL-1?), utilizando as metodologias de enzima imunoensaio (ELISA) e a reação em cadeia da polimerase em tempo real (RT-qPCR) e sobre a via de sinalização do fator nuclear kappa B (NF-kB), mais especificamente sobre a fosforilação da subunidade p65. Os parâmetros inflamatórios foram avaliados 4 horas após a indução da pleurisia. Para todos os experimentos, a dexametasona (Dex, 0,5 mg/kg, i.p.) foi utilizada como fármaco de referência anti-inflamatória. A análise estatística utilizada foi o teste de variância ANOVA, complementado pelo teste de Neuman-Keuls, e quando necessário, foram realizados teste t de Student e correlação de Pearson. Valores de p < 0,05 foram considerados significativos. O EB, as as frações Aq, AcOEt e Hex, além dos compostos Iso e Rutina, foram capazes de reduzir a migração de leucócitos, as custas de neutrófilos e a exsudação formada na cavidade pleural (p < 0,05), além das atividades de: MPO (p < 0,01), ADA (p < 0,001). As concentrações de NOx também foram inibidas (p < 0,001), exceto quando os animais foram tratados com a rutina. Além disso, houve redução na concentração da TNF-? (p < 0,01) e IL-1? (p < 0,001). Os compostos isolados (Iso e Rutina) foram capazes de inibir a transcrição do RNAm do TNF-? (p < 0,01) e IL-1? (p < 0,001) além de reduzir significamente a fosforilação da subunidade p65 do NF-kB (p < 0,001). Finalmente, foi verificada uma correlação positiva entre a inibição na migração celular e exsudação com a capacidade de ambos compostos em reduzir a fosforilação da p65. Os resultados demonstraram que a P. molluginifolia tem importante ação anti-inflamatória e este efeito é devido, pelo menos em parte, a presença de Iso e Rutina. Além disso, esse efeito parece estar relacionado a capacidade dos compostos isolados interferirem na via de sinalização do NF-kB.<br> / Abstract : The Polygala molluginifolia is a plant native to southern Brazil that is popularly called "canfora". This study was conducted to investigate the anti-inflammatory activity of Polygala molluginifolia (Polygalaceae) on the mouse pleurisy model induced by carrageenan. The whole Polygala molluginifolia plant material was extracted by maceration with 96% ethanol. The crude hydroalcoholic extract (CE) was subjected to chromatographic procedures to produce derivate fractions, including aqueous (Aq), ethyl acetate (AcOEt), and hexane (Hex) fractions. Compound 1 (5,3',4'-trihydroxy-6?,6?-dimethylpyrano [2?,3?:7,6] isoflavone) (Iso), which was isolated from the AcOEt fraction, and Compound 2 (Rutin) (Rut), which was isolated from the Aq fraction, were identified using 1H and 13C NMR spectroscopy and quantified using an HPLC apparatus. In this experimental protocol, swiss mice were used in the murine carrageenan-induced pleurisy model previously described by Saleh et al. (1996). The anti-inflammatory effect was evaluated by total leukocyte and neutrophil count, exsudate concentration, myeloperoxidase (MPO) and adenosine-deaminase (ADA) activities, nitrite/nitrate concentrations (NOx), concentrations and mRNA expression of tumor necrosis factor alpha (TNF-?? and interleukin 1-beta (IL-1). In addition, we studied the effect of Polygala molluginifolia isolated compounds on the nuclear factor kappa B (NF-?B). The inflammatory parameters were evaluated 4 hours after pleurisy induction. Dexamethasone (Dex, 0,5 mg/kg, i.p.) was used as reference anti-inflammatory drug. For statistical analysis were used the variance test (ANOVA), complemented by Newman-Keuls and when required, Student's t test and Pearson's coeficient. p < 0.05 was considered significant. The CE, Aq, AcOEt, and Hex fractions, and the isolated compounds Iso and Rut were able to reduce cell migration and exudation (p < 0.05). Furthermore, the plant material also decreased the MPO (p < 0.01) and ADA (p < 0.001) activities and the nitric oxide (NOx) (p < 0.001), TNF-a (p < 0.001), and IL-1ß (p < 0.001) levels. In addition, Iso and Rut reduced the TNF-a (p < 0.01) and IL-1ß (p < 0.001) mRNA expression levels and significantly decreased NF-?B p65 phosphorylation (p < 0.001). Finally, was observed a positive correlation on leukocyte migration and exudate levels with inhibition upon p65 phosphorilation. The results show that P. molluginifolia has a significant anti-inflammatory action and that this effect is due, at least in part, to the presence of Iso and Rut in large amounts. Moreover, this effect was found to be closely related to the inhibitory effects of the isolated compounds on the NF-kB pathway.