Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The production of common quail is on increasing development and needs further
genetics studies for productive direction. As the PCR technique in real time the most
important in the analysis of animal gene expression, studies and experiments related
components are needed. Among these components is the reference gene, normalizer
data that has great impact on the results and has direct influence on the success of the
analysis, which must have significant expression in tissue and invariably in all the
experimental conditions. Among the experimental conditions, sex (male and female)
can be considered, since there are research about responses in the animal gene
expression in both sexes. Thus it is necessary to use a single set of reference genes for
normalizing expression data from both samples (male and female), by eliminating the
effect of sex. So, We aim with this study was to evaluate the stability and recommend
reference genes for quantitative real-time PCR in different quails tissues of both sexes.
The stability of 10 housekeeping genes (GAPDH, RPL5, MRPS27, MRPS30, TFRC,
HMBS, EEF1, LDHA, B2M and UBC) was analyzed in four tissues (heart, thigh, brain
and spleen) of males and females quails, from online available RefFinder tool. The
RefFinder is based on the results of programs and methods commonly used for this
purpose (Bestkeeper, NormFinder, GeNorm and ΔCq method) and the analysis was
done separately for each tissue. The results confirm prior knowledge that different
tissues express different genes, that it was noted from the different recommendations for
each tissue. However, it is important to note that although the sex be able to influence
the expression of genes, we observed stable constitutive genes for both sexes. The most
stable housekeeping genes were: MRPS30, EEF1 and HMBS in thigh muscle; B2M,
GAPDH and UBC in brain; MRPS30, TFRC and HMBS in heart; and EEF1, LDHA
and HMBS in spleen, It is therefore recommended to be used as reference genes for
gene expression studies of male and female quails. The recommendation of stable genes
that can be used in both sexes quail facilitates the execution of subsequent genetic
studies needed to assess the animals eliminating the effect of sex, influencing,
consequently, in the development on the entire production. / A coturnicultura de corte está em crescente desenvolvimento e necessita de maiores
estudos no campo genético para o direcionamento produtivo. Sendo a técnica da PCR
em tempo real uma das mais importantes na análise da expressão gênica animal, estudos
e experimentações relacionadas a seus componentes se fazem necessários. Dentre esses
componentes encontra-se o gene de referência, normalizador de dados que possui
grande impacto nos resultados e tem influência direta no sucesso da análise, devendo
este possuir expressão significativa no tecido de forma invariável em todas as condições
experimentais. Dentre as condições experimentais, o sexo (macho e fêmea) pode ser
considerado, uma vez que existem pesquisas voltadas à busca de respostas do
comportamento gênico animal de ambos os sexos. Dessa forma se faz necessária a
utilização de um único conjunto de genes de referência para normalizar os dados de
expressão de ambas as amostras (machos e fêmeas), eliminando o efeito de sexo.
Assim, objetivou-se com esse trabalho avaliar a estabilidade e recomendar genes de
referência para PCR quantitativo em tempo real em diferentes tecidos de codornas de
corte de ambos os sexos. Foram analisadas as estabilidades de 10 genes constitutivos
(GAPDH, RPL5, MRPS27, MRPS30, TFRC, HMBS, EEF1, LDHA, B2M e UBC) em
quatro tecidos (coração, coxa, cérebro e baço), de codornas machos e fêmeas, a partir da
ferramenta RefFinder disponível online. O RefFinder se baseia nos resultados dos
programas e métodos comumente utilizados para esta finalidade (Bestkeeper,
NormFinder, GeNorm e método ΔCq) e a análise foi feita separadamente para cada
tecido. Os resultados confirmam o conhecimento prévio de que diferentes tecidos
expressam genes diferentes, notável a partir das diferentes recomendações para cada
tecido. Entretanto, é importante notar que, apesar de o sexo influenciar na expressão de
genes, foi possível observar genes constitutivos estáveis para ambos os sexos. Os genes
que se mostraram mais estáveis foram: MRPS30, EEF1 e HMBS no músculo da coxa;
B2M, UBC e GAPDH no cérebro; MRPS30, TFRC e HMBS no coração; e EEF1,
LDHA e HMBS no baço; sendo, portanto, recomendados para serem empregados como
genes de referência em estudos de expressão gênica de codornas de corte machos e
fêmeas. A recomendação de genes estáveis que podem ser utilizados em ambos os sexos
de codornas facilita a execução de estudos genéticos posteriores que necessitem avaliar
os animais eliminando o efeito de sexo, influenciando, consequentemente, no
desenvolvimento de toda a cadeia produtiva.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:ri.ufs.br:riufs/6392 |
| Date | 16 February 2016 |
| Creators | Macário, Maíse dos Santos |
| Contributors | Barbosa, Leandro Teixeira, Nascimento, Carlos Sousa do |
| Publisher | Universidade Federal de Sergipe, Pós-Graduação em Zootecnia, UFS, Brasil |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFS, instname:Universidade Federal de Sergipe, instacron:UFS |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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