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Previous issue date: 2004-05-03 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / An antigen of Paracoccidioides brasiliensis (Pb) was gel isolated and
characterized. Endoproteinase Lys-C digested peptides of the purified protein which
presented, molecular mass of 29-kDa and pI of 5.8, were subjected to sequence analysis of its
amino acids. Search at databases comparing the sequence of amino acids from the three
peptides of the native protein, revealed strong homology to triosephosphate isomerase (TPI:
E.C. 5.3.1.1) from several sources. The complete cDNA and gene encoding PbTPI were
obtained and both contained an open reading frame predicted to encode a 249 amino acid
protein that presented all the peptides characterized in the native PbTPI. The Pbtpi gene
contained 6 exons interrupted by 5 introns. Analysis performed with the deduced PbTPI
suggested its usefulness in providing phylogenetic relatedness, as well as evidenced the
correlation between the phylogeny provided by the deduced proteins and introns positions in
the cognate genes. The immunological reactivity of PbTPI was examined. The complete
coding cDNA of PbTPI was over expressed in an Escherichia coli host to produce high levels
of recombinant fusion protein with glutathione S-transferase (GST) that has been purified by
affinity chromatography. The purified recombinant TPI was recognized by sera of patients
with confirmed Paracoccidioidomycosis and not by sera of healthy individuals. Thus,
recombinant PbTPI can be a valuable addition to the still small arsenal of P. brasiliensis
immunoreactive proteins, which could be tested for incorporation in assays for serodiagnosis
of the disease. / Um antígeno de Paracoccidioides brasiliensis (Pb) foi isolado do gel e
caracterizado. Os peptídeos digeridos por Endoproteinase Lys-C da proteína purificada, que
apresentou uma massa molecular de 29-kDA e pI de 5.8, foram submetidos à análise da
seqüência de aminoácidos. Uma busca em bancos de dados de seqüências de aminoácidos
comparados com os três peptídeos da proteína nativa revelou forte homologia com triose
fosfato isomerase (TPI: E.C. 5.3.1.1) de vários organismos. O cDNA e o gene completos que
codificam para PbTPI foram obtidos, e ambos contém uma provável ORF que codifica para
uma proteína com 249 aminoácidos que apresenta todos os peptídeos caracterizados na PbTPI
nativa. O gene Pbtpi apresentou 6 exons interrompidos por 5 introns. Análises realizadas com
a PbTPI deduzida sugerem sua utilidade em prover relações filogenéticas, como também
evidenciou a correlação entre a filogenia gerada pelas proteínas deduzidas e as posições dos
introns nos genes cognatos. A reatividade imunológica da PbTPI foi examinada. O cDNA
completo que codifica para PbTPI foi altamente expresso no hospedeiro Escherichia coli,
produzindo altos níveis de uma proteína recombinante fundida a glutathione S-transferase
(GST), que foi purificada por cromatografia de afinidade. A TPI recombinante purificada foi
reconhecida por soros de pacientes com paracoccidioidomicose confirmada e não por soros
de indivíduos saudáveis. Assim, PbTPI recombinante pode ser uma adição valiosa para o
pequeno arsenal de proteínas imunoreativas de P. brasiliensis, que poderiam ser testadas por
incorporação em ensaios de sorodiagnóstico da doença.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.bc.ufg.br:tede/3778 |
| Date | 03 May 2004 |
| Creators | Pereira, Luiz Augusto |
| Contributors | Soares, Célia Maria de Almeida, Soares, Célia Maria de Almeida, Pereira, Maristela, Hahn, Rosane Cristine |
| Publisher | Universidade Federal de Goiás, Programa de Pós-graduação em Medicina Tropical e Saúde Publica (IPTSP), UFG, Brasil, Instituto de Patologia Tropical e Saúde Pública - IPTSP (RG) |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFG, instname:Universidade Federal de Goiás, instacron:UFG |
| Rights | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 6085308344741430434, 600, 600, 600, 600, -7769011444564556288, -3854583469976220812, 2075167498588264571 |
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