diagnosticar precozmente y tratar a los individuos enfermos de forma apropiada. Por
otro lado, el estudio de las personas infectadas permite aplicar, medidas de prevención
y evitar que estas personas desarrollen la enfermedad.
La prueba de la tuberculina (PT) ha sido utilizada durante los últimos 100 años como
herramienta para el diagnóstico de la infección tuberculosa. Su principal inconveniente
radica en que la mayoría de proteínas presentes en el PPD no son específicas de
Mycobacterium tuberculosis. Esto provoca una disminución en la especificidad de la
prueba, ya que individuos sensibilizados por exposición previa a micobacterias no
tuberculosas (MNT) o vacunados con la BCG también responden inmunológicamente
al PPD. Además, la PT presenta una baja sensibilidad en pacientes con alteraciones
en la inmunidad celular.
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La citoquina efectora clave en el control de la infección micobacteriana para la
activación de los macrófagos y el desarrollo de la inmunidad protectora contra M.
tuberculosis es el IFN-g. Por lo tanto, un método de inmunodiagnóstico basado en la
cuantificación in vitro de la respuesta inmune celular puede ser una alternativa a la PT.
En los últimos años, se han descrito dos antígenos específicos de M. tuberculosis:
Early Secretory Antigen Target-6 (ESAT-6) y Culture Filtrate Protein 10 (CFP-10).
Estos antígenos están ausentes en la cepa vacunal de la BCG y en la mayoría de
MNT. También se ha estudiado un tercer antígeno llamado TB7.7. En este sentido han
sido desarrollados diferentes métodos de cuantificación de la respuesta inmune celular
utilizando estos antígenos específicos micobacterianos para la estimulación de las
células T sensibilizadas y para la detección in vitro de IFN-g.
En base a esta tecnología se han estandarizado dos técnicas comerciales: Quantiferon
Gold In tube (QFN-G-IT) y T-SPOT.TB. QFN-G-IT estimula los linfocitos presentes en
muestras de sangre total con los antígenos ESAT-6, CFP-10 y TB7.7 en un mismo
tubo, y determina la producción de IFN-g mediante técnica de ELISA. Por otro lado, TSPOT.
TB requiere una separación de células mononucleares para estimularlas con los
antígenos ESAT-6 y CFP-10 por separado, y el IFN-g se detecta mediante ELISPOT.
De esta forma, la Tesis se ha centrado en la estandarización y evaluación clínica de
estas técnicas inmunológicas para el diagnóstico de la infección tuberculosa y TB
activa, así como su aplicabilidad en la práctica clínica en pacientes adultos y
pediátricos (inmunocompetentes e inmunodeprimidos), y el estudio del efecto de las
MNT sobre la positividad de la PT. Finalmente, la Tesis se completa con la evaluación
de nuevos marcadores y antígenos alternativos en el diagnóstico in vitro de la TB.
En resumen, las técnicas basadas in vitro son más específicas que la PT, ya que están
menos influenciadas por la vacuna de la BCG y la sensibilización a MNT. Por lo tanto,
el uso de estas técnicas puede ayudar a reducir el número de quimioprofilaxis
innecesarias en población adulta y pediátrica. La detección de IFN-g liberado por las
células T sensibilizadas tras estimular con antígenos específicos de M. tuberculosis es
una herramienta diagnóstica alternativa en el diagnóstico de la infección tuberculosa
en población inmunocompetente e inmunodeprimida. Además, estas técnicas in vitro
pueden ayudar en el inmunodiagnóstico de la TB activa. Por otro lado, el estudio de
nuevos antígenos específicos y biomarcadores es una herramienta potencial para el
estudio de la respuesta del huésped contra M. tuberculosis durante el tratamiento y la
búsqueda de nuevos marcadores para el diagnóstico de la infección tuberculosa y TB
activa. / The bases of tuberculosis (TB) control programs consist of a diagnosis and correct
treatment of patients with active TB. An essential factor for controlling the spread of this
disease is the ability to diagnose infected individuals in their early stages before they
become infectious to others through the progression to active TB.
The tuberculin skin test (TST) has been until now the only tool available for the
diagnosis of latent tuberculosis infection (LTBI). Unfortunately, this test has some
disadvantages because of its poor specificity that lead to false positive results by the
BCG vaccine strain and nontuberculous mycobacteria (NTM) cross-reaction. Moreover,
TST has a low sensibility in groups with impaired cellular immunity giving false negative
results.
CD4 T cells represent the major players in the protection against TB. Of greatest
relevance are the T helper (Th) 1 cells, that produce IFN-g. The IFN-g cytokine
activates macrophages for the development of a protective immunity against
Mycobacterium tuberculosis. Therefore, an immunodiagnostic assay based on the in
vitro quantification of this cellular immune response could be an alternative to the TST
for the diagnosis of LTBI.
In the last years, two specific M. tuberculosis antigens have been described. These
antigens are early secretory antigenic target 6 (ESAT-6) and culture filtrate protein 10
(CFP-10), absent in BCG strain and in the majority of NTM. A new third M. tuberculosis
antigen called TB7.7 has been also studied. In vitro assays for the diagnosis of LTBI,
based on the detection of IFN-g secreted by effector T cells stimulated with these
specific antigens, have been developed.
There are two commercially available IFN-g T-cell based assays: QuantiFERON-TB
Gold In-Tube (QFN-G-IT) and T-SPOT.TB, both approved by the U.S. Food and Drug
Administration. QFN-G-IT test stimulates whole-blood with ESAT-6, CFP- 10 and
TB7.7 in the same tube, and measures the concentration of IFN-g in supernatants with
an ELISA assay. On the other hand, T-SPOT.TB assay stimulates isolated peripheral
blood mononuclear cells with ESAT-6 and CFP-10 separately, and detects number of
IFN-g producing T cells by means of an ELISPOT.
In this sense, the main objectives of this Thesis are the standardization and clinical
evaluation of these new immunological assays for the diagnosis of LTBI and active TB,
their application in clinical practice in adult and pediatric immunocompetent and
immunosuppressed population, and the evaluation of NTM effect in the LTBI diagnosis.
Finally, we study and evaluate new antigens and potential biomarkers for the diagnosis
of active TB and LTBI.
In summary, IFN-g tests are more specific than TST because they are less affected by
BCG vaccination and NTM sensitization. So, the utilization of these assays can help to
reduce unnecessary LTBI treatment among adult and pediatric population. Therefore,
detection of IFN-g produced by T cells after M. tuberculosis specific antigen stimulation
is an alternative diagnostic tool for LTBI in immunocompetent and immunosuppressed
patients. In addition, IFN-g assays could help in the immunodiagnosis of active TB. On
the other hand, the study of new specific antigens and biomarkers is a potential tool for
studying host immune response during anti-TB therapy and finding novel diagnostic
markers for active TB and M. tuberculosis infection.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:TDX_UAB/oai:www.tdx.cat:10803/42295 |
| Date | 15 April 2011 |
| Creators | Latorre Rueda, Irene |
| Contributors | Domínguez Benítez, José Antonio, Prat i Aymerich, Cristina, Universitat Autònoma de Barcelona. Departament de Genètica i de Microbiologia |
| Publisher | Universitat Autònoma de Barcelona |
| Source Sets | Universitat Autònoma de Barcelona |
| Language | Spanish |
| Detected Language | Spanish |
| Type | info:eu-repo/semantics/doctoralThesis, info:eu-repo/semantics/publishedVersion |
| Format | 293 p., application/pdf |
| Source | TDX (Tesis Doctorals en Xarxa) |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess, ADVERTIMENT. L'accés als continguts d'aquesta tesi doctoral i la seva utilització ha de respectar els drets de la persona autora. Pot ser utilitzada per a consulta o estudi personal, així com en activitats o materials d'investigació i docència en els termes establerts a l'art. 32 del Text Refós de la Llei de Propietat Intel·lectual (RDL 1/1996). Per altres utilitzacions es requereix l'autorització prèvia i expressa de la persona autora. En qualsevol cas, en la utilització dels seus continguts caldrà indicar de forma clara el nom i cognoms de la persona autora i el títol de la tesi doctoral. No s'autoritza la seva reproducció o altres formes d'explotació efectuades amb finalitats de lucre ni la seva comunicació pública des d'un lloc aliè al servei TDX. Tampoc s'autoritza la presentació del seu contingut en una finestra o marc aliè a TDX (framing). Aquesta reserva de drets afecta tant als continguts de la tesi com als seus resums i índexs. |
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