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Previous issue date: 2007-04-27 / Leptospirosis is an infectious disease caused by pathogenic spirochetes of the genus
Leptospira that can affect vital organs such as lungs, liver and kidneys. The illness is
characterized by an acute bacteremic phase of approximately one week, followed by
an immune phase in which specific antibodies are found in blood and leptospires are
eliminated in urine. Clinical signs in the initial phase of leptospirosis can be confused
with other feverish diseases, making laboratory diagnosis of extreme importance to
start antibiotic treatment. The existing laboratory tests for early diagnosis of
leptospirosis are based on IgM detection and are of low sensitivity. Thus, there is an
urgent need for development of new diagnostic strategies for use in the acute phase
of leptospirosis. In the present work monoclonal antibodies (MAbs) and polyclonal
IgY were used in the standardization of three different antigen capture ELISA formats
for direct detection of leptospires in blood during the acute phase of the disease.
Detection limit of leptospires in human sera experimentally contaminated ranged
from 10 5 to 10 7 cells per millilitre in the different formats. The ELISA format with the
best performance was able to detect 10 5 leptospires per millilitre of human sera,
using as capture antibody a MAb against LipL32, the major outer membrane protein
of pathogenic leptospires, and as detection antibody biotinilated policlonal IgY
against a pathogenic serovar of Leptospira interrogans. Although this format did not
present the adequate sensitivity for detection of circulating leptospires at the levels
existing in blood in the initial phase of the disease, it can be improved in order to do
so. / A leptospirose é uma doença infecciosa causada por espiroquetas do gênero
Leptospira que pode afetar diversos órgãos vitais como pulmões, fígado e rins. A
doença caracteriza-se por uma fase inicial bacterêmica de aproximadamente uma
semana, seguida de uma fase imune na qual anticorpos específicos são detectados
no sangue e leptospiras são eliminadas na urina. Os sinais clínicos da fase inicial da
leptospirose podem ser confundidos com diversas doenças febris, o que torna o
diagnóstico laboratorial extremamente importante para decidir sobre o início do
tratamento com antibióticos. Os testes laboratoriais existentes para o diagnóstico na
fase inicial da doença são todos baseados na detecção de IgM e apresentam baixa
sensibilidade. Assim, há uma necessidade urgente de desenvolvimento de novas
estratégias de diagnóstico precoce da leptospirose. Neste trabalho foram utilizados
anticorpos monoclonais (MAbs) e anticorpo policlonal (IgY) para padronizar três
formatos de ELISA de captura de antígeno para uso na detecção direta de
leptospiras no sangue durante a fase aguda da doença. O limite de detecção de
leptospiras em soro humano experimentalmente contaminado variou entre 10 5 e 10 7
células por mililitro nos diferentes formatos. O formato que apresentou melhor
desempenho detectou 10 5 leptospiras por mililitro de soro, e utilizou como anticorpo
de captura um MAb contra LipL32, a principal proteína de membrana externa de
leptospiras patogênicas, e como anticorpo de detecção IgY biotinilada, produzida
contra um sorovar patogênico de Leptospira interrogans. Embora este formato não
apresente ainda a sensibilidade adequada para detectar o nível de leptospiras
circulantes no sangue na fase inicial da doença, ele possui potencial para ser
aperfeiçoado de forma a atingir aquele nível.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpel.edu.br:123456789/1249 |
| Date | 27 April 2007 |
| Creators | Vasconcellos, Flávia Aleixo |
| Contributors | CPF:15711986600, http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4783342J3&dataRevisao=null, Aleixo, José Antonio Guimarães |
| Publisher | Universidade Federal de Pelotas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, UFPel, BR, Biotecnologia |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPEL, instname:Universidade Federal de Pelotas, instacron:UFPEL |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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