Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The interruption of the blood supply causes a change in the cellular redox status, promotes oxidative
stress, tissue damage and changes in heart function. Therefore, antioxidant compounds, such as usnic
acid, can prevent these changes, since they are able to re-establish cellular redox status and preserve
the tissue functions. The goal of this study was to determine whether pretreatment with inclusion
complex usnic acid (UA) / β-cyclodextrin (βCD) promotes cardioprotection after ischemia and
reperfusion. Initially, the characterization of inclusion complex between the AU and the βCD was
performed through thermogravimetry / derivative thermogravimetry (TG / DTG), differential scanning
calorimetry (DSC), spectrophotometry in the infrared (FTIR) and scanning electron microscopy
(MEV). After characterization, was initiated evaluating the cardioprotective effects of the inclusion
complex AU / βCD. For this, Wistar rats (250-300 g) divided into two groups: the group pretreated
with 50 mg / kg / day AU / βCD and pretreated with βCD group. After the pretreatment, the heart of
the animal was removed to be mounted in an isolated organ perfusion system for induction of ischemia
and reperfusion and were evaluated the pressure developed in the left ventricle (LVDP), heart rate
(HR) and arrhythmia severity index (ASI). Also was determined in liver and heart the amount of
lactate dehydrogenase (LDH) released, the formation of malondialdehyde (MDA), the activity of
superoxide dismutase (SOD) and catalase (CAT). Furthermore was verified the amount of thiol
groups. The results of the physico-chemical characterization showed that UA was complexed in the
cavity of βCD and may be seen in the TG weight loss in the second step, where the inclusion complex
showed Δm = 19.2% while the physical mixture, Δm = 16.2%. Furthermore, it was demonstrated by
SEM that the physical mixture has not interacted with βCD while the inclusion complex underwent
shape change. The FTIR spectra indicated the presence of the AU in the inclusion complex in a higher
proportion, in turn, the physical mixture was observed in the presence of AU lesser extent. When
evaluating the cardioprotective effects of the inclusion complex AU / βCD, it was found that the
pretreatment preserved LVDP (AU: 89.9% vs. 6.3 + βCD: 53.9 + 8.6%, p < 0 05) reduced the scores
obtained in ASI (AU: 2.5 + 0.5 ua vs. βCD: 11.00 + 0.57 ua; p < 0.0001) and did not change the FC
(AU / βCD: 78 5 + 8.6% vs βCD: 79.6 + 9.2%, p > 0.05). In biochemical assays, pretreatment reduced
the amount of LDH released (AU: 0.063 + 0.026 U / L vs βCD: 0.224 + 0.036 U / L, p < 0.05) reduced
the formation of MDA (AU: 5, 87 + 0.57 nmol MDA / g vs βCD: 13.02 + 1.04 nmol MDA / g, p <
0.0001), promoted the SOD activity (AU: 0.086 + 0.013 U SOD / mg protein vs. βCD: 0,050 + 0,004
U SOD / mg protein, p < 0.05) and CAT (AU: 0.054 + 0.006 ΔE / min / mg protein vs. βCD: 0.023 +
0.002 ΔE / min / mg protein; p < 0.001) and increased presence of thiol groups (AU: 97.83 + 4.23 mol
/ mg protein vs. βCD: 54.31 + 3.28 mol / mg protein, p < 0.0001 ). Moreover, to investigate the
toxicity was not observed change in baseline levels of LDH (AU: 0.068 + 0.021 U / L vs βCD: 0.070 +
0,023U / L; p > 0.05) and MDA (AU: 8.59 + 0.27 nmol MDA / g vs βCD: 8.43 + 0.21 nmol MDA / g,
p > 0.05) nor change in the SOD activity (AU: 0,025 + 0,001 U SOD / mg protein vs. βCD 0.026 +
0.001 U SOD / mg protein, p > 0.05), or CAT (AU: 0.020 + 0.004 ΔE / min / mg protein vs. βCD:
0.015 + 0.002 ΔE / min / mg protein, p > 0.05) in the liver by promoting increase of thiol groups only
(AU: 245.4 + 15.6 mmol / mg protein vs. βCD: 181.8 + 14.3 mmol / mg protein , p < 0.05). Thus, it
was found that the pretreatment with the inclusion complex preserved contractile function, heart
protection promoted and showed no signs of toxicity. / A interrupção do suprimento sanguíneo causa alteração do status redox celular, promove estresse
oxidativo, danos teciduais e alteração da função cardíaca. Diante disso, compostos antioxidantes,
como o ácido úsnico, podem prevenir essas alterações, uma vez que são capazes de reestabelecer o
status redox celular e de preservar as funções teciduais. Assim, o objetivo desse estudo foi verificar se
o pré-tratamento com complexo de inclusão ácido úsnico (AU)/β-ciclodextrina (βCD) promove a
cardioproteção após a lesão por isquemia e reperfusão. Inicialmente, foi realizada a caracterização do
complexo de inclusão entre o AU e a βCD através das técnicas de termogravimetria/termogravimetria
derivada (TG/DTG), calorimetria exploratória diferencial (DSC), espectrofotometria na região do
infravermelho (FTIR) e microscopia eletrônica de varredura (MEV). Após a caracterização e
confirmação da formação de complexo de inclusão entre o AU e a βCD, foi iniciado a avaliação dos
efeitos cardioprotetores do complexo de inclusão AU/βCD. Para tanto, foram utilizados ratos wistar
(250-300 g) distribuídos em dois grupos: o grupo pré-tratado com 50 mg/kg/dia de AU/βCD e o grupo
pré-tratado com βCD. Após o pré-tratamento, o coração dos animais foi removido para ser montado
em sistema de perfusão de órgão isolado para a indução da lesão por isquemia e reperfusão, onde
foram avaliados a pressão desenvolvida no ventrículo esquerdo (PDVE), frequência cardíaca (FC) e o
índice de severidade de arritmia (ASI). Em seguida, foi determinado em fígado e coração a quantidade
de lactato desidrogenase (LDH) liberada, a formação de malondialdeído (MDA), a atividade das
enzimas Superóxido Dismutase (SOD) e Catalase (CAT) e verificado a quantidade de grupamentos
tióis. Os resultados da caracterização físico-química demonstraram que o AU foi complexado a
cavidade da βCD, podendo ser visto na TG na segunda etapa de perda de massa, onde o complexo de
inclusão apresentou Δm=19,2% enquanto a mistura física, Δm=16,2%. Além disso, foi demonstrado
pela MEV que a mistura física não interagiu com a βCD ao passo que o complexo de inclusão sofreu
alteração de forma. Os espectros de FTIR indicaram a presença do AU no complexo de inclusão em
maior proporção, por sua vez, na mistura física foi observada a presença do AU em menor proporção.
Ao avaliar os efeitos cardioprotetores do complexo de inclusão AU/βCD, verificou-se que o prétratamento
preservou a PDVE (AU: 89,9 + 6,3% vs βCD: 53,9 + 8,6%; p < 0,05), reduziu os escores
obtidos no ASI (AU: 2,5 + 0,5 u.a. vs βCD: 11,00 + 0,57 u.a.; p < 0,0001) e não alterou a FC
(AU/βCD: 78,5 + 8,6% vs βCD: 79,6 + 9,2%, p > 0,05). Nos ensaios bioquímicos, o pré-tratamento
reduziu a quantidade de LDH liberada (AU: 0,063 + 0,026 U/L vs βCD: 0,224 + 0,036 U/L; p < 0,05),
diminuiu a formação de MDA (AU: 5,87 + 0,57 nmol de MDA/g de tecido vs βCD: 13,02 + 1,04 nmol
de MDA/g de tecido, p < 0,0001), promoveu a atividade da SOD (AU: 0,086 + 0,013 U SOD/mg de
proteína vs βCD: 0,050 + 0,004 U SOD/mg de proteína; p < 0,05) e da CAT (AU: 0,054 + 0,006
ΔE/min/mg de proteína vs βCD: 0,023 + 0,002 ΔE/min/mg de proteína; p < 0,001) e aumentou a
presença de grupos tióis (AU: 97,83 + 4,23 μmol/mg de proteína vs βCD: 54,31 + 3,28 μmol/mg de
proteína; p < 0,0001). Ademais, ao investigar a toxicidade, não foi evidenciada alteração dos níveis
basais de LDH (AU: 0,068 + 0,021 U/L vs βCD:0,070 + 0,023U/L; p > 0,05) e de MDA (AU: 8,59 +
0,27 nmol de MDA/g de tecido vs βCD: 8,43 + 0,21 nmol de MDA/g de tecido, p > 0,05) , nem
alteração da atividade da SOD (AU: 0,025 + 0,001 U SOD/ mg de proteína vs βCD: 0,026 + 0,001 U
SOD/mg de proteína, p > 0,05) e nem da CAT (AU: 0,020 + 0,004 ΔE/min/mg de proteína vs βCD:
0,015 + 0,002 ΔE/min/mg de proteína; p > 0,05) no tecido hepático, promovendo apenas aumento de
grupamentos tióis (AU: 245,4 + 15,6 μmol/mg de proteína vs βCD: 181,8 + 14,3 μmol/mg de proteína,
p < 0,05). Assim, verificou-se que o pré-tratamento com o complexo de inclusão preservou a função
contrátil, promoveu cardioproteção e não mostrou sinais de toxicidade.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:ri.ufs.br:riufs/3990 |
| Date | 27 February 2015 |
| Creators | Santos, Péligris Henrique dos |
| Contributors | Santos, Sandra Lauton |
| Publisher | Universidade Federal de Sergipe, Pós-Graduação em Ciências Fisiológicas, UFS, Brasil |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFS, instname:Universidade Federal de Sergipe, instacron:UFS |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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