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Previous issue date: 2017-03-30 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A lesão da medula espinhal (LME) causa perda permanente da função
neurológica abaixo do nível de lesão, gerando consequências físicas sociais e
psicológicas nos pacientes. A fisiopatologia da LME envolve processos complexos,
como hemorragia, excitotoxicidade e inflamação, geradas principalmente pelas
células microgliais. Apesar do avançado conhecimento sobre os mecanismos
patológicos, ainda não existem estratégias terapêuticas eficazes e aprovadas para o
tratamento das lesões e suas consequências sem que tenham efeitos adversos
graves. A terapia celular pode representar uma boa estratégia terapêutica por
demonstrar bons resultados na modulação do ambiente inflamatório da lesão e por
prováveis mecanismos de diferenciação. No presente estudo, investigamos a ação
das células mononucleares da medula óssea (CMMO) em lesões incompletas
(hemissecção à direita da medula espinhal, segmento T8-T9) após 42 dias de lesão
(lesão crônica). As células eram do próprio animal lesionado (transplante autólogo) e
o transplante foi intramedular, ou seja, as células eram inseridas próximas ao local da
lesão. No presente estudo, investigaram-se os efeitos funcionais do transplante por
meio da escala BBB (Basso, Beatie e Bresnahan), que permite graduar a função
motora das patas posteriores dos animais. Investigou-se também os efeitos antiinflamatórios
das CMMO. Foram utilizadas técnicas histológicas e imunohistoquímicas
usando a coloração de Violeta de Cresila e os anticorpos anti-ED-1 (marcador de
micróglia/macrófagos ativados) e anti-GFAP (marcador de astrócitos fibrilares). Foram
realizadas análises qualitativas e quantitativas. Para análise quantitativa, o número de
astrócitos e macrófagos/micróglia ativados por campo foram contados usando
microscópio binocular com gradícula de contagem (0,0625mm2) em objetiva de 40x.
As médias das contagens e os desvios-padrão obtidos foram plotados em
coordenadas cartesianas. A contagem se deu da seguinte forma: no lado direito da
medula espinhal (lado com lesão) e três campos por região medular (funículo ventral
- FV, funículo dorsal - FD, funículo lateral - FL, corno dorsal - CD, corno ventral - CV
e substância cinzenta intermediária-SCI), totalizando 18 campos de contagem por
secção. O tratamento com CMMO não foi eficaz para melhorar a função motora dos
animais lesionados quando comparamos os animais tratados e não tratados (médias
e desvios-padrão dos grupos: falso operado, n=4, 21±0; controle, n=4, 13,57±3,88;
tratado, n=5, 15,07±3,46). Na análise qualitativa por meio da coloração de Violeta de
Cresila, os animais tratados apresentaram melhor preservação tecidual quando
comparados com os animais não tratados. Na análise quantitativa da ativação
microglial, observamos que o tratamento com as CMMO reduziu a ativação dessas
células inflamatórias (controle: 19,52±7,79; tratados: 10,04±2,37), porém não reduziu
significativamente a ativação dos astrócitos (médias dos grupos: controle 17,74±
2,757; tratados 14,46± 5,283). Os resultados sugerem que mais estudos são
necessários para chegar-se a uma estratégia eficaz para os pacientes com LME. Um
possível tratamento combinado com outras estratégias pode vir a ser promissor para
a funcionalidade dos pacientes. / Spinal cord injury (SCI) causes permanent loss of neurological function below the level
of injury, generating social and psychological physical consequences in patients. The
pathophysiology of SCI involves complex processes, such as hemorrhage,
excitotoxicity and inflammation, mainly generated by microglial cells. Despite
advanced knowledge of pathological mechanisms, effective and approved therapeutic
strategies for the treatment of lesions and their consequences are still lacking without
serious adverse effects. Cell therapy may represent a good therapeutic strategy
because it demonstrates good results in the modulation of the inflammatory
environment of the lesion and by probable mechanisms of differentiation. In the present
study, we investigated the action of bone marrow mononuclear cells (BMMC) in
incomplete lesions (hemisection to the right of the spinal cord, T8-T9 segment) after
42 days of injury (chronic lesion). The cells were from the injured animal itself
(autologous transplantation) and the transplantation was intramedullary, i.e. the cells
were inserted near the site of the lesion. In the present study, the functional effects of
transplantation were investigated through the BBB scale (Basso, Beatie and
Bresnahan), which allows the motor function of the hind legs of the animals to be
graded. The anti-inflammatory effects of BMMC were also investigated. Histological
and immunohistochemical techniques using Cresila Violet staining and anti-ED-1
(microglial marker / activated macrophages) and anti-GFAP (fibrillar astrocyte marker)
antibodies were used. Qualitative and quantitative analyzes were performed. For
quantitative analysis, the number of field activated astrocytes and macrophages /
microglia were counted using binocular microscope with counting gradient
(0.0625mm2) in a 40x objective. The counting averages and the standard deviations
obtained were plotted in Cartesian coordinates. The counting was as follows: on the
right side of the spinal cord (lesion side) and three fields per medullary region (ventral
funiculus - FV, dorsal funiculus - FD, lateral funiculus - FL, dorsal horn - CD, ventral
horn - CV and intermediate gray matter-SCI), totaling 18 counting fields per section.
Treatment with BMMC was not effective in improving the motor function of the injured
animals when we compared the treated and untreated animals (means and standard
deviations of the groups: false operated, n = 4, 21 ± 0, control, n = 4, 13,57 ± 3.88,
treated, n = 5, 15.07 ± 3.46). In the qualitative analysis by means of the staining of
Cresila Violet, treated animals presented better tissue preservation when compared to
the untreated animals. In the quantitative analysis of microglial activation, we observed
that treatment with BMMC reduced the activation of these inflammatory cells (control:
19.52 ± 7.79, treated: 10.04 ± 2.37), but did not significantly reduce the activation of
the astrocytes (Mean of the groups: control 17.74 ± 2.757, treated 14.46 ± 5.283). The
results suggest that further studies are needed to come up with an effective strategy
for patients with SCI. A possible combined treatment with other strategies may turn out
to be promising for patients' functionality.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpa.br:2011/8635 |
| Date | 30 March 2017 |
| Creators | SOUZA, Celice Cordeiro de |
| Contributors | LEAL, Walace Gomes, HAMOY, Moisés |
| Publisher | Universidade Federal do Pará, Programa de Pós-Graduação em Neurociências e Biologia Celular, UFPA, Brasil, Instituto de Ciências Biológicas |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPA, instname:Universidade Federal do Pará, instacron:UFPA |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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