Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-graduação em Odontologia / Made available in DSpace on 2012-10-23T14:48:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1
263918.pdf: 1851045 bytes, checksum: b00c02c9b8564ca5d808e654762f5881 (MD5) / Os objetivos deste estudo foram: estabelecer uma linhagem de fibroblastos oriundos de ligamento periodontal de dentes humanos; avaliar a efetividade de diferentes meios de conservação em manter a viabilidade desses fibroblastos; e verificar o efeito de diferentes temperaturas sobre a efetividade dos meios estudados. Uma vez estabelecida a linhagem de fibroblastos, a viabilidade celular foi avaliada pelo método colorimétrico MTT, após a conservação a 37°C por 3, 6, 24, 48 e 72h em diferentes meios: Meio Essencial Mínimo (MEM- controle-positivo), solução salina balanceada de Hank (HBSS) estéril, HBSS não estéril, leite desnatado, Save-A-Tooth® e água (controle-negativo). Para verificar o efeito da temperatura, o experimento foi repetido utilizando-se os mesmos meios e períodos, porém cultivando-se as células em temperatura ambiente (20°C). A viabilidade celular também foi avaliada pelo método de exclusão do Azul de Tripano. As células foram coradas após 6, 24, 48 e 72h de contato com MEM, HBSS estéril, HBSS não estéril, leite desnatado e Save-A-Tooth® a 20°C. Todos os experimentos foram realizados em triplicata. Calculadas as médias dos valores de absorbância (MTT) e do percentual de viabilidade celular (Azul de Tripano), a comparação dos resultados foi realizada pelo teste de Kruskal-Wallis. Posteriormente, foi aplicado o teste de comparações múltiplas de Scheffé para localizar as diferenças significativas entre as médias de absorbância e o percentual de células viáveis nos diferentes meios e períodos, num nível de significância de 5%. O teste de Mann-Whitney foi utilizado para comparar os resultados obtidos com o ensaio MTT à temperatura ambiente e a 37°C. Os resultados do MTT realizado à temperatura ambiente demonstraram que o controle-positivo (MEM-37) foi o melhor meio de conservação, seguido pelo leite e depois pela HBSS não estéril e estéril. Após 72h, o desempenho do leite e da HBSS estéril e não estéril foi semelhante. No experimento a 37°C, o leite foi o melhor meio de conservação até 24h. Após 48 e 72h, o desempenho do leite diminuiu e o da HBSS aumentou, apresentando resultados similares aos do grupo-controle. Independentemente da temperatura de cultivo, a água foi o pior meio de conservação e o Save-A-Tooth® demonstrou resultados semelhantes aos da água a partir de 24h. Em relação ao efeito da temperatura, no geral o cultivo a 37°C reduziu a viabilidade das células conservadas em água e em Save-A-Tooth®, mas aumentou a das mantidas em leite, HBSS estéril e HBSS não estéril, pelo menos até 24h. Pelo método do corante Azul de Tripano, os melhores meios de conservação foram o leite e a HBSS estéril e não estéril, não havendo diferença estatística entre eles, em qualquer período de tempo. Foi concluído que: a técnica de cultivo celular utilizada permitiu a obtenção de uma linhagem de fibroblastos periodontais; a temperatura interfere na efetividade do meio de conservação; leite desnatado, à temperatura ambiente, pode ser utilizado como meio de conservação até 48h.
The aims of this study were to establish a fibroblast lineage from human periodontal ligament cells, to evaluate the effectiveness of different storage media for maintaining the viability of fibroblasts, and to verify the effect of different temperatures on the effectiveness of these media. After the determination of the fibroblasts lineage, the cell viability was evaluated by the MTT colorimetric method, after preservation at 37°C for 3, 6, 24, 48, and 72h in the following media: Minimal Essential Medium (MEM - positive-control), sterile and non-sterile Hank's balanced salt solution (HBSS), non-fat milk, Save-A-Tooth®, and water (negative-control). In order to verify the effect of the temperature, the experiment was repeated using the same storage media and periods, but with cell culturing at room temperature (20°C). The cell viability was also evaluated by Trypan Blue exclusion method. The cells were stained after 6, 24, 48, and 72h of contact with MEM, sterile and non-sterile HBSS, non-fat milk, and Save-A-Tooth® at 20°C. All experiments were performed in triplicate. After calculating the mean absorbance values (MTT) and the mean percent cell viability (Trypan Blue), the results were compared using the Kruskal-Wallis test. Scheffé's multiple comparisons test was used to determine the differences between absorbance means and the percent of viable cells in the different media and periods (p = 0.05). Mann-Whitney's test was used to compare the results obtained from MTT at room temperature and 37o C. MTT results at room temperature revealed that the positive-control (MEM-37) was the best storage medium, followed by milk, non-sterile HBSS, and sterile HBSS. After 72h, the performance of milk, sterile and HBSS non-sterile was similar. Milk was the best storage medium at 37o C for up to 24h. After 48 and 72h, milk performed poorer and HBSS performed better, exhibiting similar results to the positive-control. Regardless of the culture temperature, water was the poorer preservation medium, while Save-A-Tooth® showed similar results to the water after 24h. The culture at 37o C reduced the viability of cells preserved in water or Save-A-Tooth®, but increased the viability of cells maintained in milk, sterile and non-sterile HBSS, for up to 24h. The Trypan Blue staining method showed that the best storage media were milk, sterile and non-sterile HBSS, without statistical difference between them. Based on these results, it was concluded that the cell culture used allowed to obtain a periodontal fibroblasts lineage; the temperature interferes in the storage medium effect; non-fat milk at room temperature can be used for preservation for up to 48h.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufsc.br:123456789/90755 |
| Date | January 2007 |
| Creators | Kremer, Beatriz Dulcineia Mendes de Souza |
| Contributors | Universidade Federal de Santa Catarina, Felippe, Mara Cristina Santos, Felippe, Wilson Tadeu |
| Publisher | Florianópolis, SC |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | 1 v.| il., grafs., tabs. |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFSC, instname:Universidade Federal de Santa Catarina, instacron:UFSC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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