Trabajo de Investigación Requisito para optar al Magister en Ciencias Odontológicas con Mención en Periodontologia / las especies reactivas de oxígeno (ERO), entre ellas H202, son liberadas durante la inflamación crónica inducen la destrucción tisular por medio de la sobreexpresión de citoquinas proinflamatorias y la activación de metaloproteinasas de matriz (MMP), en ocasiones involucrando la activación de la vía de señalización NFκB. Si bien, los fibroblastos del ligamento periodontal (FLP) regulan la homeostasis del periodonto, no se conoce el efecto de las ERO sobre la síntesis y actividad de las MMPs y las vías de señalización involucradas. Objetivo: Evaluar la actividad de MMPs -2 y -9 en conjunto con la participación de la vía NFκB en cultivos primarios de FLP humano tratados o no con dosis subletales de H2O2. Metodología: FLP fueron aislados y cultivados a partir de 14 terceros molares sanos de 14 sujetos con indicación de extracción y expuestos a dosis subletales de peróxido. La activación de NFκB se determinó mediante la translocación nuclear de la subunidad p65 en presencia de H2O2 y/o SN50, un péptido inhibidor de la subunidad p50 de la vía NFκB y controles respectivos mediante inmunofluorescencia. Los FLP fueron estimulados con dosis subletales de H2O2 (2,5-10 µM) por 24 h y/o SN50 como control negativo. Los sobrenadantes fueron recolectados y procesados. La actividad de las proformas y formas activas de MMP-2 y MMP-9 fueron determinadas mediante zimografías en gelatina y evaluadas por densitometría. Los resultados fueron expresados como unidades arbitrarias densitométricas (ua) por mg de proteínas totales. Los resultados fueron analizados por medio del test estadístico ANOVA con el software StataV11.1. Resultados: La viabilidad celular se mantuvo en los grupos estimulados con H2O2 en dosis de 2,5-10 µM por 24 h. El H2O2 Indujo la translocación nuclear de NFκB. El porcentaje de activación (% A) de MMP-9 fue mayor en el grupo H2O2 5 μM que en el grupo 5 μM/ SN50 (p=0,051); mientras que el % A de MMP-2, aumentó significativamente en el grupo H2O2 5 μM comparado con el control. La actividad de MMP-9 fue significativamente mayor en el grupo H2o2 2,5 μM comparado con el de 5 μM/ SN50 y el de 10 μM; mientras que la actividad de MMP-2 aumentó significativamente en el grupo de 5 μM en comparación con el grupo control, 10 μM y el grupo de 5 μM + SN50. Conclusiones: La actividad gelatinolítica de MMP-2 aumenta con dosis subletales de H2O2 (<10 µM), en parte vía NFκB en FLP humano. La actividad de MMP-9 en FLP humano, está regulada parcialmente por la vía NFκB. El aumento en la actividad de MMP-2 inducido por H2O2, podría estar relacionado con la destrucción de tejido en las enfermedades periodontales. / FINANCIAMIENTO FONDECYT 1090461

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2016. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-09-19T16:16:11Z No. of bitstreams: 1 2016_CláudioRodriguesRezendeCosta.pdf: 3347733 bytes, checksum: 9681f3bf003d6bb60d7a5814cd12ecad (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-10-03T21:20:24Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_CláudioRodriguesRezendeCosta.pdf: 3347733 bytes, checksum: 9681f3bf003d6bb60d7a5814cd12ecad (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-03T21:20:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_CláudioRodriguesRezendeCosta.pdf: 3347733 bytes, checksum: 9681f3bf003d6bb60d7a5814cd12ecad (MD5) / Pesquisas recentes têm mostrado compostos bioativos como responsáveis por efeitos farmacológicos de plantas. Dentre muitas, a Eugenia dysenterica tem apresentado efeitos antioxidante, antifúngico, antidiarreico, atividade inibitória sobre a enzima tirosinase e potencial efeito para tratamentos gástricos. Este estudo teve como objetivo avaliar os efeitos da Eugenia dysenterica em cultura primária de células de mucosa gengival e ligamento periodontal. Foi estabelecido cultura primária das células e ensaio de MTT foi realizado em linhagens celulares de mucosa gengival e ligamento periodontal humanos, testando nove concentrações de fração acetônica do extrato de folhas de Eugenia dysenterica. As concentrações de 41,5 e 8,3μg/mL apresentaram menor citotoxicidade em células gengivais (p<0,05), porém foram citotóxicas para as linhagens do ligamento periodontal. Na concentração de 83μg/mL a fração acetônica de folhas do extrato de Eugenia dysenterica não apresentou ação antifúngica para Candida albicans. Como controle positivo foi utilizado o digluconato de clorexidina nas concentrações de 0,12% e 0,2%. O digluconato de clorexidina apresentou intensa citotoxicidade para as células gengivais quando comparadas ao extrato de Eugenia dysenterica (p<0,05). O ensaio de ferida com as células gengivais mostrou que não houve indução do fechamento da ferida pós tratamento com Eugenia dysenterica, assim como também diminuiu a motilidade das células após o tratamento. O ensaio de mineralização foi evidenciado com vermelho de alizarina S e Von Kossa para as células de ligamento periodontal tratadas com o extrato de Eugenia dysenterica e estas não apresentaram diferenciação e capacidade de mineralização. Frente aos resultados, concluiu-se que o extrato de Eugenia dysenterica não se apresentou citotóxico para as células gengivais, porém nas concentrações utilizadas inibiu a proliferação e motilidade de células gengivais, alterou a morfologia celular e não apresentou efeito osteogênico para as células do ligamento periodontal. _________________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Recent research has determined bioactive compounds as responsible for pharmacological effects of plants. Among all, the Eugenia dysenterica has shown antioxidant, anti-fungal and anti-diarrheal effects, inhibitory activity on the enzyme tyrosinase and potential effect on gastric treatments. This study aimed to evaluate the effects of Eugenia dysenterica in primary culture of gingival mucosa and periodontal ligament cells. First, the primary culture of cells were established and MTT assay was performed both cell lines. Nine concentrations of Eugenia dysenterica extract were used. The concentrations of 41.5 and 83μg/mL showed less cytotoxicity in gingival cells (p <0.05), but were cytotoxic to the periodontal ligament samples. The concentration of 83μg/mL Eugenia dysenterica extract had no antifungal effects on Candida albicans. As a positive control, chlorhexidine digluconate was used at concentrations of 0.12% and 0.2%. Chlorhexidine was severe cytotoxic to gingival cells when compared to the Eugenia dysenterica extract (p <0.05). The healing assay with gingival and periodontal ligament cells showed no induction of wound closure after treatment with Eugenia dysenterica, as well as decreased the motility of the cells after treatment. Alizarin Red S and Von Kossa staining were used to evidence the mineralization of periodontal ligament cells treated with the extract Eugenia dysenterica but there was no or mineral deposits on these cells after the treatment. Based on the results, it was concluded that the Eugenia dysenterica extract were not cytotoxic to gingival cells. However, the concentrations used inhibited proliferation and motility of cells, modified cellular morphology and did not have osteogenic effect for periodontal ligament cells.

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / En pacientes asistentes a la clínica de Prótesis Fija de la Facultad de Odontología de La Universidad de Chile, durante el año 2005. Se seleccionó una muestra de 36 sectores a rehabilitar con prótesis fija (PF). Los pacientes fueron interceptados en la etapa de toma de impresión para casquete, donde se confeccionó un provisional de acrílico de termo polimerización, sobre el mismo modelo de trabajo o definitivo, en donde antes de cementar ,el provisorio, temporalmente, una de sus caras era sometida a un arenado de oxido de aluminio de 250 micrones, para así obtener una cara no pulida. - Se dividió la muestra en cuatro grupos: A- Grupo 1: sectores donde el provisional presenta la cara palatina no pulida y la cara vestibular era el control. B.-Grupo 2: sectores donde el provisional presenta la cara vestibular no pulida y la cara palatina era el control. C.-Grupo 3: sectores donde el provisional presenta la cara mesial no pulida y la cara distal era el control. D.-Grupo 4: sectores donde el provisional presenta la cara distal no pulida y la cara mesial era el control. - Se realizaron 3 mediciones: • Una medición inicial, para tener registro del estado periodontal antes de cementar el provisional, el cual presentaba una de sus caras no pulida. • La segunda medición se realizó retirando el provisional a los 14 días después de la cementación temporal e inmediatamente se procedió a pulir la cara áspera. • La tercera medición se realizó retirando nuevamente el provisional a los 14 días después de la segunda cementación temporal, correspondiente al día 28. • Simultáneamente se realizaron mediciones en todas las caras control. - En cada medición se registró: • -Índice de higiene • -Índice gingival • -Profundidad de sondaje • -Nivel de inserción relativo Los resultados fueron analizados estadísticamente con pruebas de T-studen no pareado y con los resultados obtenidos podemos establecer que la hipótesis fue corroborada con el estudio realizado, es decir, no existe diferencia significativa en la salud periodontal del dento soporte restaurado, con los cambios cualitativos que sufre el provisional durante el tratamiento.

A utilização de fatores de crescimento no tratamento periodontal tem sido amplamente estudada. No entanto, sua aplicabilidade no tratamento de seres humanos ainda não foi estabelecida. Os objetivos deste trabalho foram determinar os efeitos da aplicação de PDGF-BB, IGF-1, TGF-ß1 e sua combinação na proliferação de células cultivadas originadas do ligamento periodontal de humano (células FL2). Além disso, analisou-se a adesão dessas células a fragmentos radiculares periodontalmente comprometidos tratados previamente ou não por associação de ácido cítrico e tetraciclina após a raspagem. Para tanto, foi estabelecida cultura primária de fibroblastos obtidos de 3º molares retidos e/ou impactados extraídos de pacientes saudáveis. Para analisar a taxa de proliferação celular, foram plaqueadas 72 placas de Petri contendo inicialmente 103 células aleatoriamente divididas em 4 grupos que receberam a adição de PDGF-BB (grupo 1), TGF-ß1 (grupo 2), IGF-1 (grupo 3) ou de sua combinação (grupo 4) ao meio de cultura e 2 grupos controle (sem adição de fatores de crescimento) e contadas em triplicatas após 1, 3, 5 e 7 dias. Paralelamente, foram obtidos 30 fragmentos de dentes extraídos de 14 pacientes com perda de inserção à sondagem > 6 mm aleatoriamente distribuídos em 10 grupos de acordo com o tratamento: raspagem (grupo 1), raspagem e aplicação dos fatores de crescimento isolados ou em combinação (grupos 2-5), raspagem e condicionamento ácido (grupo 6) ou raspagem, condicionamento ácido e aplicação dos fatores de crescimento isolados ou em combinação (grupos 7-10). Os resultados obtidos foram estatisticamente avaliados pelo teste ANOVA e por métodos descritivos. Os resultados demonstraram que o TGF-ß1 apresentou os melhores efeitos na proliferação de células do ligamento periodontal em cultura, enquanto que na adesão das células aos fragmentos a combinação dos três fatores apresentou resultados mais favoráveis, com diferenças estatisticamente significantes (p<0,05) em relação aos grupos tratados sem o condicionamento ácido radicular, com exceção do grupo tratado através da combinação. Esses dados sugerem que a aplicação de fatores de crescimento, especialmente do TGF-ß1 associado ou não ao PDGF-BB e IGF-1, poderia ser favorável à regeneração dos tecidos periodontais perdidos com o processo de doença periodontal. / The use of growth factors in regenerative periodontal treatment has been largely reviewed in the past years. However, its applicability in humans is not established yet. The purpose of this study was to determine the effects of the application of PDGF-BB, IGF-1, TGFß1 alone or in combination over the proliferation of cultured human periodontal ligament fibroblasts (FL2 cells). Besides, the adhesion of FL2 cells to periodontally compromised root fragments previously treated or not with citric acid and tetracycline was evaluated. Periodontal ligament fibroblasts were obtained from third molars extracted from healthy patients and treated as explants in order to develop a primary cell line culture. To analyze the growth factor effects on periodontal ligament cells, 72 Petri dishes were cultured with 103 cells each randomly distributed among 4 experimental and 2 control groups. The experimental groups received PDGF-BB (group 1), TGF-ß1 (group 2), IGF-1 (group 3) or its combination (group 4) added to the culture medium while the controls received the supplemented culture medium only. The Petri dishes were counted in triplicates 1, 3, 5 and 7 days after the culture allowing the establishment of a growth curve for each treatment group. In a parallel experiment, 30 teeth fragments were obtained from 14 patients presenting probing attachment level > 6 mm and were randomly distributed among 10 treatment groups: scaling (group 1), scaling and growth factor application (groups 2-5), scaling and acid treatment (group 6) and scaling and acid treatment followed by growth factor application (groups 7-10). The data were statistically evaluated by ANOVA and descriptive methods. The results obtained have demonstrated that TGF-ß1 provided the more pronounced effects over cultured periodontal ligament fibroblasts proliferation while the combination of growth factors presented the most significant results over the its adhesion to periodontally compromised tooth fragments previously treated by scaling and citric acid associated to tetracycline conditioning for 3 minutes. These results were statistically different from the non-conditioned treatment groups (p<0,05), except for the group treated with the combination of growth factors. These findings suggest that these substances, especially TGF-ß1 combined or not with PDGF-BB and IGF-1, could enhance regeneration of periodontal tissues lost with the disease.

Resumo: O diagnóstico preciso e a elaboração de um plano de tratamento adequado podem constituir uma tarefa bastante complexa, especialmente nos traumatismos dentoalveolares, pois necessitam de uma abordagem multidisciplinar e conhecimento sobre o processo de reparo após o traumatismo. O objetivo do trabalho foi analisar o conhecimento dos cirurgiões dentistas sobre plano de tratamento das injúrias do ligamento periodontal após traumatismo dentoalveolar. Para tanto, a partir de um questionário, foram abordadas perguntas referentes ao perfil dos profissionais entrevistados e conduta frente às injúrias do ligamento periodontal (concussão, subluxação, luxação extrusiva, luxação lateral e luxação intrusiva) ocasionadas por traumatismo dentoalveolar. Seiscentos e noventa e três cirurgiões dentistas que participaram da 23ª Reunião Anual da SBPqO (2006) responderam o questionário e os dados obtidos foram submetidos à análise descritiva, enquanto o teste estatístico foi aplicado para demonstrar as freqüências e o nível de significância entre as variáveis (Teste qui-quadrado ou Teste Exato de Fisher). De acordo com os resultados obtidos, grandes dificuldades foram encontradas com relação ao plano de tratamento das luxações extrusiva, lateral e intrusiva. De maneira geral, a especialidade não influenciou na elaboração de planos adequados para as injúrias mais complexas. Foi possível concluir que os cirurgiões dentistas não apresentam conhecimento suficiente para tratar de maneira adequada as injúrias mais severas do ligamento periodontal após traumatismo dentoalveolar / Abstract: An accurate diagnosis and the establishment of an adequate treatment plan may constitute quite a complex task, particularly in cases of dentoalveolar trauma, which require a multidisciplinary approach and knowledge of the repair process in tooth injuries. The aim of this study was to analyze the dentists' knowledge of the treatment plan for periodontal ligament injuries after dentoalveolar trauma. For such purpose, a questionnaire was prepared with questions arguing about the profile of the interviewed professionals and their conduct facing periodontal ligament injuries (concussion, subluxation, extrusive luxation, lateral luxation and intrusive luxation) secondary to dentoalveolar trauma. Six hundred and ninety three dentists attending the 23rd Annual Meeting of the SBPqO (2006) filled out the questionnaire and the obtained data were subjected to descriptive analysis. Either chi-square test or Fisher's exact test was applied to determine the frequencies and the significance level among the variables. The results revealed great difficulties in establishing a treatment plan for extrusive, lateral and intrusive luxations. In general, the dental specialty of the participants did not influence the elaboration of adequate treatment plans for the most severe injuries. It could be concluded that dentists do not have sufficient knowledge to treat properly the most severe types of periodontal ligament injuries following a dentoalveolar trauma

A utilização de fatores de crescimento no tratamento periodontal tem sido amplamente estudada. No entanto, sua aplicabilidade no tratamento de seres humanos ainda não foi estabelecida. Os objetivos deste trabalho foram determinar os efeitos da aplicação de PDGF-BB, IGF-1, TGF-ß1 e sua combinação na proliferação de células cultivadas originadas do ligamento periodontal de humano (células FL2). Além disso, analisou-se a adesão dessas células a fragmentos radiculares periodontalmente comprometidos tratados previamente ou não por associação de ácido cítrico e tetraciclina após a raspagem. Para tanto, foi estabelecida cultura primária de fibroblastos obtidos de 3º molares retidos e/ou impactados extraídos de pacientes saudáveis. Para analisar a taxa de proliferação celular, foram plaqueadas 72 placas de Petri contendo inicialmente 103 células aleatoriamente divididas em 4 grupos que receberam a adição de PDGF-BB (grupo 1), TGF-ß1 (grupo 2), IGF-1 (grupo 3) ou de sua combinação (grupo 4) ao meio de cultura e 2 grupos controle (sem adição de fatores de crescimento) e contadas em triplicatas após 1, 3, 5 e 7 dias. Paralelamente, foram obtidos 30 fragmentos de dentes extraídos de 14 pacientes com perda de inserção à sondagem > 6 mm aleatoriamente distribuídos em 10 grupos de acordo com o tratamento: raspagem (grupo 1), raspagem e aplicação dos fatores de crescimento isolados ou em combinação (grupos 2-5), raspagem e condicionamento ácido (grupo 6) ou raspagem, condicionamento ácido e aplicação dos fatores de crescimento isolados ou em combinação (grupos 7-10). Os resultados obtidos foram estatisticamente avaliados pelo teste ANOVA e por métodos descritivos. Os resultados demonstraram que o TGF-ß1 apresentou os melhores efeitos na proliferação de células do ligamento periodontal em cultura, enquanto que na adesão das células aos fragmentos a combinação dos três fatores apresentou resultados mais favoráveis, com diferenças estatisticamente significantes (p<0,05) em relação aos grupos tratados sem o condicionamento ácido radicular, com exceção do grupo tratado através da combinação. Esses dados sugerem que a aplicação de fatores de crescimento, especialmente do TGF-ß1 associado ou não ao PDGF-BB e IGF-1, poderia ser favorável à regeneração dos tecidos periodontais perdidos com o processo de doença periodontal. / The use of growth factors in regenerative periodontal treatment has been largely reviewed in the past years. However, its applicability in humans is not established yet. The purpose of this study was to determine the effects of the application of PDGF-BB, IGF-1, TGFß1 alone or in combination over the proliferation of cultured human periodontal ligament fibroblasts (FL2 cells). Besides, the adhesion of FL2 cells to periodontally compromised root fragments previously treated or not with citric acid and tetracycline was evaluated. Periodontal ligament fibroblasts were obtained from third molars extracted from healthy patients and treated as explants in order to develop a primary cell line culture. To analyze the growth factor effects on periodontal ligament cells, 72 Petri dishes were cultured with 103 cells each randomly distributed among 4 experimental and 2 control groups. The experimental groups received PDGF-BB (group 1), TGF-ß1 (group 2), IGF-1 (group 3) or its combination (group 4) added to the culture medium while the controls received the supplemented culture medium only. The Petri dishes were counted in triplicates 1, 3, 5 and 7 days after the culture allowing the establishment of a growth curve for each treatment group. In a parallel experiment, 30 teeth fragments were obtained from 14 patients presenting probing attachment level > 6 mm and were randomly distributed among 10 treatment groups: scaling (group 1), scaling and growth factor application (groups 2-5), scaling and acid treatment (group 6) and scaling and acid treatment followed by growth factor application (groups 7-10). The data were statistically evaluated by ANOVA and descriptive methods. The results obtained have demonstrated that TGF-ß1 provided the more pronounced effects over cultured periodontal ligament fibroblasts proliferation while the combination of growth factors presented the most significant results over the its adhesion to periodontally compromised tooth fragments previously treated by scaling and citric acid associated to tetracycline conditioning for 3 minutes. These results were statistically different from the non-conditioned treatment groups (p<0,05), except for the group treated with the combination of growth factors. These findings suggest that these substances, especially TGF-ß1 combined or not with PDGF-BB and IGF-1, could enhance regeneration of periodontal tissues lost with the disease.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Odontologia, Florianópolis, 2009. / Made available in DSpace on 2012-10-24T15:18:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 276657.pdf: 3219044 bytes, checksum: c6d78c71a089cc2beb0d99894aa79ad8 (MD5) / Diversas pesquisas clínicas ou com cultura de células têm sido realizadas com o intuito de identificar o meio mais adequado para a conservação de dentes avulsionados ou de fibroblastos periodontais. Embora, na maioria das vezes, essas pesquisas confirmem ou refutem uma hipótese experimental, normalmente elas dão origem a algumas dúvidas. Esta tese de doutorado é composta de 4 pesquisas desenvolvidas com os objetivos de: 1) verificar se a renovação do leite, em intervalos regulares de 12, 24 ou 48h, é capaz de prolongar sua capacidade de manter a viabilidade de fibroblastos do ligamento periodontal humano (FLPH); 2) verificar se o tempo de estocagem da solução salina balanceada de Hank (HBSS) exerce influência sobre a sua capacidade de manter a viabilidade de FLPH; 3) comparar o efeito de diferentes meios de conservação sobre a viabilidade de FLPH; e 4) comparar o efeito de diferentes meios de conservação sobre a viabilidade e a capacidade proliferativa de FLPH. Para executá-las, as células foram conservadas, a 5 e/ou a 20°C, em própolis, clara de ovo, água de coco, HBSS, Save-A-Tooth®, leite desnatado e leite integral por períodos variáveis. Células armazenadas em Meio Essencial Mínimo (MEM) a 37°C e em água de torneira (5 e/ou a 20°C) serviram de controle-positivo e negativo, respectivamente. A viabilidade e a capacidade de proliferação celular foram determinadas pelo ensaio MTT. Os dados foram analisados pelos testes de Kruskal-Wallis, Scheffé e Mann-Whitney (a=5%). Com base nos resultados obtidos nos diferentes experimentos foi possível concluir que: 1) a renovação do leite foi capaz de prolongar a sua capacidade de manter a viabilidade de FLPH somente quando realizada, a cada 48h, no leite mantido a 5ºC; 2) o tempo de estocagem da HBSS influenciou negativamente a sua capacidade de manter a viabilidade de FLPH; 3) em ambas as temperaturas, o leite desnatado foi o melhor meio de conservação, seguido pelo leite integral e HBSS. O própolis, a clara de ovo e a água de coco podem ser indicados para a conservação de fibroblastos periodontais por um período máximo de 3h; 4) em ambas as temperaturas, os meios mais efetivos em manter a viabilidade celular (0h) foram o leite desnatado e o leite integral. Quando os meios foram mantidos a 5°C, o leite desnatado e o leite integral proporcionaram maior capacidade proliferativa aos FLPH. Quando mantidos a 20°C, a HBSS revelou os melhores resultados. / Several clinical trials or cell culture studies have been carried out in order to identify the most appropriate storage medium for the maintenance of avulsed teeth or periodontal fibroblasts. Although in most cases, these studies confirm or refute an experimental hypothesis, they often give rise to some uncertainties. This doctoral thesis is composed of 4 studies developed with the following purposes: 1) to analyze whether the replacement of milk at 12, 24 or 48 h, can extend its ability to maintain human periodontal ligament fibroblasts (HPDLF) viability; 2) to verify if the storage time influences the effectiveness of Hank's balanced salt solution (HBSS) in maintaining HPDLF viability; 3) to compare the effect of different storage media to preserve HPDLF viability; and 4) to evaluate the effect of different storage media on the maintenance of the viability and proliferative capacity of HPDLF. The cells were stored at 5 and / or 20°C in propolis, egg white, coconut water, HBSS, Save-A-Tooth ®, skimmed and whole milk for different periods of time. Cells stored at 37°C in Minimum Essential Medium (MEM) and tap water (5 and / or 20°C) served, respectively, as positive and negative controls. The viability and cellular proliferation capacity was determined by MTT assay. Data were analyzed by Kruskal-Wallis, Scheffe and Mann-Whitney tests (á = 5%). Based on the results obtained in the different experiments, it was concluded that: 1) milk replacement was able to extend its ability to maintain HPDLF viability only when carried out every 48 hours at 5°C, 2) the storage time of HBSS negatively influenced its effectiveness, 3) at both temperatures, skim milk, followed by whole milk and HBSS preserved significantly more viable cells than any other tested solution. Propolis, egg white and coconut water can be indicated to preserve HPDLF for up to 3 hours, 4) at both temperatures, the most effective mediums to maintain cell viability (0 h) were skimmed and whole milk. When the media were kept at 5° C, skimmed and whole milk provided higher proliferative capacity to HPDLF. When kept at 20°C, HBSS showed the best results.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-graduação em Odontologia / Made available in DSpace on 2012-10-23T14:48:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 263918.pdf: 1851045 bytes, checksum: b00c02c9b8564ca5d808e654762f5881 (MD5) / Os objetivos deste estudo foram: estabelecer uma linhagem de fibroblastos oriundos de ligamento periodontal de dentes humanos; avaliar a efetividade de diferentes meios de conservação em manter a viabilidade desses fibroblastos; e verificar o efeito de diferentes temperaturas sobre a efetividade dos meios estudados. Uma vez estabelecida a linhagem de fibroblastos, a viabilidade celular foi avaliada pelo método colorimétrico MTT, após a conservação a 37°C por 3, 6, 24, 48 e 72h em diferentes meios: Meio Essencial Mínimo (MEM- controle-positivo), solução salina balanceada de Hank (HBSS) estéril, HBSS não estéril, leite desnatado, Save-A-Tooth® e água (controle-negativo). Para verificar o efeito da temperatura, o experimento foi repetido utilizando-se os mesmos meios e períodos, porém cultivando-se as células em temperatura ambiente (20°C). A viabilidade celular também foi avaliada pelo método de exclusão do Azul de Tripano. As células foram coradas após 6, 24, 48 e 72h de contato com MEM, HBSS estéril, HBSS não estéril, leite desnatado e Save-A-Tooth® a 20°C. Todos os experimentos foram realizados em triplicata. Calculadas as médias dos valores de absorbância (MTT) e do percentual de viabilidade celular (Azul de Tripano), a comparação dos resultados foi realizada pelo teste de Kruskal-Wallis. Posteriormente, foi aplicado o teste de comparações múltiplas de Scheffé para localizar as diferenças significativas entre as médias de absorbância e o percentual de células viáveis nos diferentes meios e períodos, num nível de significância de 5%. O teste de Mann-Whitney foi utilizado para comparar os resultados obtidos com o ensaio MTT à temperatura ambiente e a 37°C. Os resultados do MTT realizado à temperatura ambiente demonstraram que o controle-positivo (MEM-37) foi o melhor meio de conservação, seguido pelo leite e depois pela HBSS não estéril e estéril. Após 72h, o desempenho do leite e da HBSS estéril e não estéril foi semelhante. No experimento a 37°C, o leite foi o melhor meio de conservação até 24h. Após 48 e 72h, o desempenho do leite diminuiu e o da HBSS aumentou, apresentando resultados similares aos do grupo-controle. Independentemente da temperatura de cultivo, a água foi o pior meio de conservação e o Save-A-Tooth® demonstrou resultados semelhantes aos da água a partir de 24h. Em relação ao efeito da temperatura, no geral o cultivo a 37°C reduziu a viabilidade das células conservadas em água e em Save-A-Tooth®, mas aumentou a das mantidas em leite, HBSS estéril e HBSS não estéril, pelo menos até 24h. Pelo método do corante Azul de Tripano, os melhores meios de conservação foram o leite e a HBSS estéril e não estéril, não havendo diferença estatística entre eles, em qualquer período de tempo. Foi concluído que: a técnica de cultivo celular utilizada permitiu a obtenção de uma linhagem de fibroblastos periodontais; a temperatura interfere na efetividade do meio de conservação; leite desnatado, à temperatura ambiente, pode ser utilizado como meio de conservação até 48h. The aims of this study were to establish a fibroblast lineage from human periodontal ligament cells, to evaluate the effectiveness of different storage media for maintaining the viability of fibroblasts, and to verify the effect of different temperatures on the effectiveness of these media. After the determination of the fibroblasts lineage, the cell viability was evaluated by the MTT colorimetric method, after preservation at 37°C for 3, 6, 24, 48, and 72h in the following media: Minimal Essential Medium (MEM - positive-control), sterile and non-sterile Hank's balanced salt solution (HBSS), non-fat milk, Save-A-Tooth®, and water (negative-control). In order to verify the effect of the temperature, the experiment was repeated using the same storage media and periods, but with cell culturing at room temperature (20°C). The cell viability was also evaluated by Trypan Blue exclusion method. The cells were stained after 6, 24, 48, and 72h of contact with MEM, sterile and non-sterile HBSS, non-fat milk, and Save-A-Tooth® at 20°C. All experiments were performed in triplicate. After calculating the mean absorbance values (MTT) and the mean percent cell viability (Trypan Blue), the results were compared using the Kruskal-Wallis test. Scheffé's multiple comparisons test was used to determine the differences between absorbance means and the percent of viable cells in the different media and periods (p = 0.05). Mann-Whitney's test was used to compare the results obtained from MTT at room temperature and 37o C. MTT results at room temperature revealed that the positive-control (MEM-37) was the best storage medium, followed by milk, non-sterile HBSS, and sterile HBSS. After 72h, the performance of milk, sterile and HBSS non-sterile was similar. Milk was the best storage medium at 37o C for up to 24h. After 48 and 72h, milk performed poorer and HBSS performed better, exhibiting similar results to the positive-control. Regardless of the culture temperature, water was the poorer preservation medium, while Save-A-Tooth® showed similar results to the water after 24h. The culture at 37o C reduced the viability of cells preserved in water or Save-A-Tooth®, but increased the viability of cells maintained in milk, sterile and non-sterile HBSS, for up to 24h. The Trypan Blue staining method showed that the best storage media were milk, sterile and non-sterile HBSS, without statistical difference between them. Based on these results, it was concluded that the cell culture used allowed to obtain a periodontal fibroblasts lineage; the temperature interferes in the storage medium effect; non-fat milk at room temperature can be used for preservation for up to 48h.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2004Bitstream added on 2014-06-13T20:41:20Z : No. of bitstreams: 1 sousa_ha_dr_araca.pdf: 1664411 bytes, checksum: 8fb8470dab0600cadc30a00a2b17662b (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Not available.

Orientador: Celso Koogi Sonoda / Coorientador: Alessandra Marcondes Aranega / Banca: Sônia Regina Panzarini / Banca: Thallita Pereira Queiroz / Resumo: Traumas na região oral ocorrem com freqüência e representam 5% de todos os ferimentos em que indivíduos procuram tratamento. A prevalência dos traumas de luxação em crianças e pacientes jovens, desperta uma preocupação com a condição do tecido pulpar desses dentes que geralmente apresentam rizogênese incompleta. Outro fator importante é o aumento da prevalência de indivíduos com alterações sistêmicas, principalmente o Diabetes Melittus, que pode levar a um atraso na reparação tecidual e predispor o indivíduo a infecções. Portanto o objetivo deste trabalho foi estudar a reparação periodontal e pulpar de ratos diabéticos e normais submetidos à luxação extrusiva do incisivo superior. Para tanto foram utilizados 30 animais divididos em 3 grupos de 10. No grupo I (controle) não foi realizado nenhum procedimento cirúrgico. Para a indução do Diabetes no grupo III, utilizou-se a estreptozotocina diluída em tampão citrato, aplicada na veia peniana. No grupo II utilizou-se apenas o tampão citrato. Constatada a condição de Diabetes no grupo III, realizou-se neste grupo e no grupo II a luxação extrusiva em 2mm do incisivo superior direito. Após 60 dias os animais foram submetidos à eutanásia e perfusão e as peças obtidas, processadas para análise pela Hematoxilina e Eosina. Foi realizada uma análise histomorfométrica dos resultados. Entre os parâmetros analisados, as maiores alterações ocorreram na inserção do epitélio gengival, tecido pulpar e ligamento periodontal, que se apresentaram mais comprometido nos animais diabéticos. De uma forma geral, não foram encontradas diferenças estatisticamente significantes entre os grupos II e III / Abstract: Trauma to the oral region occurs frequently and comprises 5% of all injuries for which people seek treatment. The prevalence of dislocation trauma in children and young patients raises a concern about the condition of the pulp tissue of teeth that generally have incomplete root formation. Another important factor is the increasing prevalence of individuals with systemic conditions, especially diabetes mellitus, which can lead to a delay in tissue repair and predispose individuals to infection. Therefore, the purpose was to study the repair of periodontal and pulp tissue of normal and diabetic rats submitted to extrusive luxation of the maxillary incisor. Therefore, we use 30 animals divided into 3 groups of 10. In group I (control) was not carried out any surgical procedure. For the induction of Diabetes in group III was used the streptozotocin diluted in citrate buffer applied to the penile vein. Group II was used only citrate buffer. Given the condition of diabetes in group III, in this group and group II was performed the extrusive luxation of 2mm in the right maxillary incisor. After 60 days the animals were euthanized and perfusion and the specimens were processed for analysis by hematoxylin and eosin. We performed a histomorphometric analysis of the results. Among the parameters analyzed, the largest changes occurred in the insertion of the gingival epithelium, dental pulp and periodontal ligament, which were more impaired in diabetic animals. Overall, there were no statistically significant differences between groups II and III / Mestre