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Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / Os neutrófilos são essenciais para a resposta imune inata contra uma variedade de patógenos. Eles são capazes de modular a resposta imune através da produção de citocinas e quimiocinas, degranulação e a sua interação direta com outras células no local da infecção, tais como as células dendríticas. A interação entre as células do sistema imune inato é essencial para direcionar a resposta imune adaptativa, a qual é responsável pela eliminação de microrganismos e manutenção de memória imunológica. Objetivo: Este estudo avaliou a interação de neutrófilos humanos com Leishmania braziliensis, através da análise da expressão de moléculas de superfície, liberação de enzimas presentes nos grânulos e produção de espécies reativas de oxigênio (ROS). Também foi avaliada a interação entre neutrófilos humanos infectados e células dendríticas, a fim de se observar o efeito desta interação na indução da ativação das células dendríticas. Metodologia: Os neutrófilos foram purificados a partir do sangue periférico de doadores saudáveis e as células dendríticas foram geradas in vitro. Os neutrófilos foram infectados ou não com L. braziliensis e co-cultivados com as células dendríticas. Em seguida, os sobrenadantes e as células foram coletadas para avaliar a liberação de enzimas, tais como mieloperoxidase (MPO) e metaloproteinase 9 (MMP-9). O fenótipo e a função dos neutrófilos foram analisados através da expressão de Mac-1 (CD18 e CD11b), CD16, CD62-L e produção de ROS. As células dendríticas foram adicionadas à co-cultura e a expressão de CD1a, a DC-SIGN, HLA-DR e CD80 foram avaliados, bem como a produção de citocinas e quimiocinas. Resultados: A infecção de neutrófilos com L. braziliensis induz a produção de MPO, MMP-9, IL-8, LTB4 e ROS. Observou-se também um aumento na expressão de Mac-1 e uma diminuição na expressão de CD16 e CD62-L. As células dendríticas tratadas com o sobrenadante dos neutrófilos infectados apresentaram redução significativa da expressão do DC-SIGN e aumento da expressão do HLA-DR e CD80. Nessas condições, observamos também a presença de IL-8 na cultura. Conclusões: Os resultados obtidos nesse estudo sugerem que os neutrófilos, além de agirem como células efetoras na destruição do parasito, também podem ser importantes na modulação da ativação das células dendríticas. / Neutrophils are essential in the innate immune response against a variety of pathogens. They are able to modulate immune response by cytokine and chemokine production, release of granules and their direct interaction with other cells at the infection site. Dendritic cells are recruited in response to cytokines and chemokines produced by neutrophils. The interaction between cells of the innate immune system is essential for targeting the adaptive immune response, which is responsible for eliminating microorganisms and the maintenance of immunological memory. Objective: Evaluate the interaction of human neutrophils with Leishmania braziliensis, through the analysis of surface molecule expression, release of granules enzymes and production of reactive oxygen species (ROS). We also evaluated the interaction between human infected neutrophils and dendritic cells, in order to observe the effect of this interaction on dendritic cells. Methodology: Neutrophils were purified from peripheral blood of healthy donors and dendritic cells were generated in vitro. Neutrophils were infected or not with L. braziliensis and cocultured with DC. Afterwards, supernatants and cells were harvested to evaluate the release of granules enzymes, such as myeloperoxidase (MPO) and metalloproteinase 9 (MMP-9). Neutrophils phenotype and function were analyzed by the expression of Mac-1 (CD18 and CD11b), CD16 and ROS production. Dendritic cells were added to the co-culture to asses the rate of infection of DCs in the presence of neutrophils. Dendritic cells were also treated with supernatant of infected neutrophils and the expression of CD80, DC-SIGN and HLA-DR were evaluated, as well as the cytokine production. We also filtered the supernatant of infected neutrophils to compare the difference in the activation of dendritic cells. Results: Neutrophil infection with L. braziliensis induced the production of MPO, MMP-9, IL-8, LTB4 and ROS. We also observed an increase in Mac-1 and a decrease in CD16 and CD62-L expression. Dendritic cells treated with the infected supernatant of neutrophils showed a significant reduction of the DC-SIGN expression and increased expression of HLA-DR and CD80. Under these conditions, we also observed the presence of IL-8 in culture. Conclusions: Neutrophils act as effector cells in the destruction of the parasite and could be important in mediating the activation of DCs.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.arca.fiocruz.br:icict/10996 |
| Date | January 2015 |
| Creators | Suarez, Martha Sena |
| Contributors | Tavares, Natália Machado, Bou Habib, Elvira Maria saraiva Chequer, Carvalho, Lucas Pedreira de, Brodskyn, Cláudia Ida, Brodskyn, Cláudia Ida |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, instname:Fundação Oswaldo Cruz, instacron:FIOCRUZ |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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