A paracoccidioidomicose (PCM) é uma doença sistêmica de caráter granulomatoso, causada pelo fungo termodimórfico Paracoccidioides brasiliensis. A PCM é endêmica nas Américas do Sul e Central. Vacina de DNA é uma abordagem promissora e atual na imunoterapia. O peptídeo P10 contem um epítopo da gp43 reconhecido por linfócitos T-CD4+ e é protetor contra a PCM experimental. No presente trabalho analizamos o uso de vacinas de DNA usando vetores de expressão de P10, IL-12 e HSP60 em camundongos infectados intratraquealmente (i.t.) com P. brasiliensis. Esquema Profilático: camundongos BALB/c foram imunizados com pCDNA3 com sequências codificadoras de P10, HSP60 ou IL-12 e foram infectados i.t com 3x105 leveduras do isolado Pb18. Esquema Terapêutico: Camundongos BALB/c e B10.A foram infectados i.t. e após 30 dias foram submetidos à imunização por 4 semanas, ou 5 meses somente para B10.A, com pCDNA3 codificando P10 e/ou IL-12. Níveis de anticorpos, unidades formadoras de colônias (UFC) e produção de citocinas foram analizados. Foi observada redução significativa de UFC nos pulmões dos camundongos imunizados com vetor contendo P10/IL-12. A histopatologia dos pulmões mostrou áreas preservadas e redução de inflamação nestes animais. O nível de citocinas nos pulmões mostrou aumento de IFN-g e IL-12 caracterizando uma resposta Th1. Tratamento de animais B10. A com pP10 até 5 meses, reduziu o número de leveduras infectantes perto de esterilização. / Paracoccidiodomycosis (PCM) is a systemic granulomatous disease caused by the thermo-dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis. It is widespread in South and Central America. Gene therapy is a promising approach to Ag-specific immunotherapy. Peptide 10 contains the T-cell epitope of gp43 and is protective against experimental infection in mice. Presently, we analyzed the used of DNA-based vaccine encoding P10, IL-12 and HSP60 in mice intratracheally infected with P. brasiliensis. Prophylactic protocol: BALB/c mice were immunized with pCDNA3 encoding P10, HSP60 or IL-12 prior to intratracheal infection with 3x105 yeast cells of isolate Pb18. Therapeutic protocol: BALB/c and B10. A mice were infected and after 30 days, they were immunized for 4 weeks, or 5 months for B10.A only, with pCDNA3 encoding P10 and/or IL-12. Antibody titers in sera, colony forming units (CFU) and cytokine production were measured. A significant reduction of CFU in the lungs of mice immunized with plasmid encoding P10/IL-12 was observed. The lung histopathology confirmed the results showing preserved areas and reduction of inflammation in vaccinated animals. The cytokine levels in lungs showed enhanced levels of IFN-g and IL-12 characterizing a Th1 response. Further treatment of B10.A mice up to 5 months with pP10 reduced the number of infective yeasts close to sterilization.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:usp.br/oai:teses.usp.br:tde-16072009-145544 |
| Date | 13 March 2009 |
| Creators | Rittner, Glauce Mary Gomes |
| Contributors | Travassos, Luiz Rodolpho Raja Gabaglia |
| Publisher | Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP |
| Source Sets | Universidade de São Paulo |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | Tese de Doutorado |
| Format | application/pdf |
| Rights | Liberar o conteúdo para acesso público. |
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