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Previous issue date: 2009-03-18 / Equine theileriosis is considered to be one of the most important parasitic diseases
that affect horses, and has great economic impact on the equine industry. The
disease is caused by the etiologic agent Theileria equi, which is classified as a
hematozoan. The losses associated with equine theileriosis are related to clinical
manifestation as well as restriction to international travel to positive horses. Chronic
infected equines suffer the risk of the disease relapse which leads to losses in
reproduction performance and are potentially disseminators of the disease. In the last
years, studies on the immunologic diagnosis and vaccination against T. equi have
focused to obtain distinct antigenic proteins. On the outer membrane of this
protozoan, major surface proteins has been characterized and named as EMAs (equi
merozoite antigen). Of these, EMA-1 has been used as antigen for diagnosis due to
its conservation in diverse isolates. Its role as a potential immunogen has been well
documented due its ability to stimulate a humoral response with production of
specific antibodies in infected animals. Through this antibodies one can used as tool
for immune diagnostic of this disease. EMA-1 is also a strong candidate to be use as
a vaccine in the control of equine theileriosis. In this study we used the Pichia
pastoris yeast as expression system for the production of the EMA-1 protein of T.
equi and evaluated its antigenicity and immunogenicity. When tested for antigenicity,
the recombinant protein was recognized by antibodies form chronic T. equi infected
horses, suggesting that epitopes of the native were conserved in the recombinant
protein. Also we were able to observe that this protein was immunogenic in mice.
The data obtained in this study demonstrated that the yeast P. pastoris is an
expression system of heterologous protein suitable for the production of EMA-1 from
T. equi. / A Theileriose eqüina é considerada uma das principais doenças parasitárias que
acometem os eqüinos, acarretando grande impacto econômico na equinocultura. A
doença é causada pelo hematozoário Theileria equi. As perdas econômicas
associadas à theileriose eqüina estão relacionadas tanto aos fatores clínicos, quanto
à restrição ao trânsito internacional de animais soropositivos, já que animais
portadores crônicos são passíveis de reagudizações, gerando perda de performance
física e reprodutiva, e são potencialmente disseminadores da enfermidade. Nos
últimos anos, os estudos sobre o diagnóstico imunológico e vacinação contra T. equi
concentram-se na obtenção de frações antigênicas. Na membrana externa deste
protozoário foram caracterizadas proteínas principais de superfície denominadas de
EMAs (equi merozoite antigen). Dentre estas, a EMA-1 destaca-se como antígeno
para diagnóstico em função de sua conservação entre diversos isolados. Seu papel
também tem sido caracterizado como imunógeno por estimular forte resposta
humoral com produção de anticorpos em animais infectados, podendo ser usado
como ferramenta para imunodiagnóstico dessa doença. EMA-1 é também um
potencial candidato como antígeno vacinal no controle da theileriose equina. Neste
estudo utilizou-se o sistema eucariótico de expressão baseado na levedura
metilotrófica Pichia pastoris, para a produção da proteína EMA-1 de T. equi e a
avaliação quanto a sua antigenicidade e imunogenicidade. Quanto a sua
antigenicidade, a proteína recombinante foi reconhecida por anticorpos de animais
portadores crônicos de T. equi, sugerindo que epítopos nativos foram conservados
na proteína recombinante. Também foi observado que a proteína recombinante foi
capaz de gerar resposta imune em camundongos vacinados com esta proteína. Os
dados obtidos neste estudo demonstram que a levedura P. pastoris é um sistema de
expressão heterólogo adequado para a produção da proteína EMA-1 de T. equi,
podendo ser utilizada como imunobiológico no desenvolvimento de testes
diagnósticos e vacina recombinante.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpel.edu.br:123456789/1267 |
| Date | 18 March 2009 |
| Creators | Nizoli, Leandro Quintana |
| Contributors | CPF:20732660025, http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4763076J5, Nogueira, Carlos Eduardo Wayne, CPF:37145860082, http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4785783H3, Conceição, Fabrício Rochedo, Leite, Fabio Pereira Leivas |
| Publisher | Universidade Federal de Pelotas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, UFPel, BR, Biotecnologia |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPEL, instname:Universidade Federal de Pelotas, instacron:UFPEL |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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