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Previous issue date: 2015-07-30 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O presente trabalho buscou caracterizar fitoquimicamente, avaliar o potencial
antifúngico frente às principais linhagens causadoras de esporotricose no Brasil; a
atividade antioxidante e a citotoxicidade preliminar dos óleos essenciais adquirido
comercialmente (OCM) e obtido por extração no laboratório de Farmacognosia da
Faculdade de Farmácia da Universidade Federal de Juiz de Fora (OEX) e do extrato
hidroetanólico 95% (v/v), obtidos a partir das folhas de Pimenta pseudocaryophyllus
(Gomes) Landrum (Myrtaceae). O screening fitoquímico realizado com o extrato
hidroetanólico resultou na identificação de flavonoides, taninos e proantocianidinas.
A quantificação destes metabólitos secundários na droga vegetal, por
espectrofotometria UV-VIS, resultou em 18,77% de constituintes fenólicos totais,
10,69% de taninos e 0,52% de flavonoides. O perfil cromatográfico obtido por CGEM
do OEX indicou elevados teores de monoterpenos (48,83%) e fenilpropanoides
(39,08%), tendo como constituinte majoritário o eugenol (34,38%). O OCM
apresentou elevados teores de sesquiterpenos (25,64%) e fenilpropanoides
(70,05%), e também apresentou o eugenol como constituinte majoritário (66,93%).
Extrato e frações apresentaram notável atividade antioxidante pelo método de
redução do DPPH, sugere-se que a mesma seja atribuída aos altos teores de
compostos fenólicos, flavonoides e taninos encontrados. Promissores resultados de
atividade antioxidante foram encontrados para os OEX e OCM, os quais possuem
como constituinte majoritário o eugenol. Para a avaliação da atividade antifúngica
foram utilizadas as seguintes linhagens fúngicas: Sporothrix schenckii ATCC 1099-
18, Sporothrix schenckii IPEC 15383, Sporothrix brasiliensis ATCC 5110 e
Sporothrix brasiliensis IPEC 17943 e duas linhagens clínicas de Sporothrix
schenckii, denominadas genericamente como A e B. O OEX apresentou atividade
antifúngica frente a todas as linhagens em concentrações que variaram de 260,46 a
520,90 μg/mL. Foi observada atividade fungicida frente a todas as linhagens em
concentrações acima de 520,90 μg/mL. O OCM foi capaz de inibir todas as
linhagens em concentrações que variaram de 65,52 a 260,10 μg/mL. Foi observada
atividade fungicida frente a todas as linhagens em concentrações acima de 262,10
μg/mL. O eugenol apresentou atividade antifúngica frente a todas as linhagens em
concentrações que variaram de 34,36 a 137,48 μg/mL. Foi observada atividade
fungicida frente a todas as linhagens em concentrações acima de 137,48 μg/mL. Ao
ajustar os resultados de atividade antifúngica a 100% do constituinte majoritário
eugenol, verificou-se a existência de sinergismo entre os constituintes do OEX, que
apresentou maior atividade antifúngica (CIM=89,54 μg/mL) do que o eugenol
(CIM=136,11 μg/mL) para quatro das seis linhagens estudadas. Foi observado que
somente duas das linhagens estudadas apresentaram susceptibilidade à anfotericina
b e três linhagens foram consideradas resistentes ao cetononazol com valores de
CIM de 4,0 μg/mL. Em relação ao itraconazol, todas as linhagens estudadas foram
consideradas resistentes, com valores de CIM>128 μg/mL. Estes resultados
sugerem indícios de resistência fúngica das linhagens estudadas em relação aos
fármacos de referência empregados no tratamento da esporotricose. As
eletromicrografias das linhagens fúngicas revelaram que, tanto nos fungos expostos
aos tratamentos experimentais, quanto naqueles expostos aos fármacos de
referência, pode-se observar deformidades na estrutura fúngica quando comparadas
ao grupo não tratado. Em relação aos ensaios de citotoxicidade realizados com
fibroblasto murino (L929) pelo método de redução do MTT, o extrato não apresentou
citotoxicidade nas concentrações avaliadas (10 a 100 μg/mL), o eugenol não
apresentou citotoxicidade em concentrações menores ou igual a 125 μg/mL, o OCM
não foi tóxico em concentrações menores ou igual a 250 μg/mL. Já em relação ao
OEX concentrações inferiores ou igual a 62,5 μg/mL não apresentaram
citotoxicidade. / The purpose of this work is to carry out the phytochemical study, evaluate the
potential antifungal against the major strains causing sporotrichosis in Brazil, the
antioxidant activity and the preliminary cytotoxicity of essential oils obtained
commercially (CMO) and obtained by extraction in Pharmacognosy Laboratory of
Pharmacy Faculty of the Federal University of Juiz de Fora (OEX) and
hydroethanolic extract 95% (v/v), obtained from the leaves of Pimenta
pseudocaryophyllus (Gomes) Landrum (Myrtaceae). The phytochemical screening
performed with the hydroethanolic extract resulted in the identification of flavonoids,
tannins and proanthocyanidins. The quantification of these secondary metabolites in
plant drug, by UV-VIS revealed the presence of phenolic constituents (18.77%),
tannins (10.69%) and flavonoids (0.52%). The chromatographic profile obtained by
GC-MS indicated the OEX high levels of monoterpenes (48.83%) and
phenylpropanoids (39.08%) having as a major constituent eugenol (34.38%). The
OCM had high levels of sesquiterpenes (25.64%) and phenylpropanoids (70.05%),
with as major constituent eugenol (66.93%). Extract and fractions showed notable
antioxidant activity by reduction of DPPH method, it is suggested that it be attributed
to the high concentration of phenolic compounds, flavonoids and tannins found.
Promising results of antioxidant activity were found for the OEX and OCM, which
have as major constituent eugenol. For evaluating the antifungal activity the following
fungal strains were used: Sporothrix schenckii ATCC 1099-18, Sporothrix schenckii
IPEC 15383, Sporothrix brasiliensis ATCC 5110 and Sporothrix brasiliensis IPEC
17943 and two clinical strains, known generically as A and B. The OEX showed
activity antifungal against all strains at concentrations ranging from 260.46 to 520.90
μg/mL. It was observed fungicidal activity against all strains at concentrations above
520.90 μg/mL. The OCM was able to inhibit all strains at concentrations ranging from
65.52 to 260.10 μg/mL. It was observed fungicidal activity against all strains at
concentrations above 262.10 μg/mL. The eugenol showed antifungal activity against
all strains at concentrations ranging from 34.36 to 137.48 μg/mL. It was observed
fungicidal activity against all strains at concentrations above 137.48 μg/mL. By
adjusting the results of antifungal activity to 100% of major constituent eugenol, it
was found that there is synergy between the constituents of the OEX, with the
highest antifungal activity (MIC = 89.54 μg/mL) than eugenol (MIC = 136.11 μg/mL)
for four of the six strains studied. It was noted that only two of the studied strains
were susceptible to amphotericin B and three strains were considered resistant
cetononazol with MIC values of 4.0 μg/mL. Compared to itraconazole, all the strains
studied were considered resistant with MIC values> 128 μg/mL. The micrographs
revealed that the fungal strains in both fungi exposed to the experimental treatments,
as those exposed to the reference drug, one can observe fungal deformities in
structure when compared to the untreated group. In relation to the cytotoxicity assays
performed with murine fibroblasts (L929) by the MTT reduction method, the extract
showed no cytotoxicity at concentrations tested (10 to 100 μg/mL), eugenol showed
no cytotoxicity at concentrations less than or equal to 125 μg/mL, OCM was not toxic
at concentrations less than or equal to 250 μg/mL. In relation to the OEX
concentrations below or equal to 62.5 μg/mL showed no toxicity.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:hermes.cpd.ufjf.br:ufjf/421 |
| Date | 30 July 2015 |
| Creators | Lazzarini, Jordana de Abreu |
| Contributors | Leite, Magda Narciso, Raposo, Nádia Rezende Barbosa, Souza, Silvia Ribeiro de, Oliveira, Murilo Gomes |
| Publisher | Universidade Federal de Juiz de Fora, Programa de Pós-graduação em Ciências Farmacêuticas, UFJF, Brasil, Faculdade de Farmácia |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFJF, instname:Universidade Federal de Juiz de Fora, instacron:UFJF |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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