nÃo hà / IntroduÃÃo: Rev Responsive Element (RRE) à uma molÃcula RNA responsÃvel pelo transporte do mRNA viral do HIV-1 do nÃcleo para o citoplasma da cÃlula CD4, atravÃs da via RRE-Rev, essencial para a replicaÃÃo viral. As mutaÃÃes de resistÃncia a Enfuvirtida sÃo primariamente localizadas no perÃmetro de 10 aminoÃcidos do HR1, regiÃo correspondente no RRE. Caracterizar o RRE poderà fornecer uma nova abordagem terapÃutica para a terapia do HIV. Objetivos: Sequenciar e caracterizar o RRE da gp41 para avaliar sua variabilidade e correlaÃÃo com parÃmetros laboratoriais em sequÃncias de pacientes infectados pelo HIV-1 que receberam terapia antirretroviral ou virgens. Em estudo in vitro avaliar a mutaÃÃo 36D na presenÃa de Enfuvirtida. Metodologia: 62 amostras de pacientes com HIV-1 do Cearà foram coletadas e 35 sequÃncias de RRE foram obtidas e distribuÃdas em trÃs grupos para fins de anÃlise comparativa: N (virgens de terapia), T (uso de antirretroviral sem inibidor de fusÃo) e F (uso de antirretroviral associados a Enfuvirtida). SequÃncias obtidas foram alinhadas com o banco de dados de Los Alamos para HIV usando HIV BLAST Search. Estudo in vitro utilizou dois vÃrus de laboratÃrio pNLA-3 (36D e 36G) observando citopatogenicidade e proliferaÃÃo na presenÃa de doses crescentes de Enfuvirtida. Resultados: A anÃlise filogenÃtica demonstrou alta prevalÃncia do HIV-1 subtipo B (97,2%). Observou-se aumento da resposta imunolÃgica no grupo T (71,5%) comparado ao F (2,98%). MutaÃÃes mais comuns e polimorfismos do Grupo N foram Q32L (41,6%), N42S (8,3%), R46K (33,3%), L54M (41,6%); no grupo T: Q32R (8,3%), R46K (25%), L54M (33,3%); e no grupo F: Q32L (18,2%), G36D (9,1%), V38A (9,1%), N42S (27,3%), N42T (9,1%), R46K (27,3%), L54M (45,4%), K77R (54,5%). TrÃs amostras demonstraram mutaÃÃes de resistÃncia significativas para os inibidores de fusÃo. AnÃlise dos sÃtios primÃrios de ligaÃÃo do RRE observou presenÃa de mutaÃÃo 28A em 27,2% e 8,3% nos grupos F e N respectivamente, e 27S em 8,3% no grupo T. Houve pressÃo seletiva da regiÃo HR1 do HIV-1 de pacientes usando antirretroviral, independente da exposiÃÃo à Enfuvirtida. NÃo houve diferenÃa estatÃstica significativa nas curvas de p24 do vÃrus 36D comparado com 36G, independente de concentraÃÃes de T20 (p>0.05). Observou-se menor formaÃÃo de sincÃcio, com diminuiÃÃo da capacidade fusogÃnica, sem impacto na infectividade. ConclusÃo: O estudo definiu as mutaÃÃes e polimorfismos mais prevalentes no CearÃ, sugerindo alta preservaÃÃo nas regiÃes de sÃtio primÃrio de ligaÃÃo do Rev-RRE. Evidenciou baixo perfil de resistÃncia a Enfuvirtida em regimes com falha utilizando esta medicaÃÃo. Detectou-se pressÃo seletiva no HR1 do HIV-1 de pacientes em uso de Antirretroviral, independente de exposiÃÃo à Enfuvirtida. Evidenciado in vitro menor formaÃÃo sincicial no vÃrus 36D, com diminuiÃÃo na atividade fusogÃnica, mantendo infectividade. / Introduction: Rev Responsive Element (RRE) is a RNA molecule responsible to mRNA from HIV-1 virus nuclear transportation to cytoplasm through RRE-Rev pathway, essential to virus replication. Enfuvirtide resistance mutations are primary located in a perimeter of 10 amino acids of HR1, a corresponded region of RRE. Characterize RRE should provide a new approach for HIV therapy. Objectives: Sequence and characterize RRE from gp41 to evaluate variability and correlate with laboratory parameters in sequences from HIV-1-infected patients, which were receiving regimens including Enfuvirtide, naÃve or rescue therapy. Also evaluated mutation G to D at codon 36 in the presence of fusion inhibitor (enfuvirtide). Methods: Sixty-two samples from HIV patients in Ceara/Brazil were collected and Thirty-five RRE sequences and clinical follow-up were analyzed, distributed into three groups: N (naÃve therapy), T (treated patients with rescue regimens) and F (rescue regimens containing Enfuvirtide). Sequences obtained were aligned with Los Alamos HIV sequence database by using the HIV BLAST Search. Culture Study was performed using two different pNLA-3 (36D and 36G) with increasing amounts of enfuvirtide. Results: A phylogenetic analyses demonstrated higher prevalence of HIV-1 subtypes B (97.2%). An increased immunology response was observed in CD4 count higher on group T (71.5%) compared with F (2.98%). Group N most common mutations and polymorphisms were Q32L (41.6%), N42S (8.3%), R46K (33.3%), L54M (41.6%); group T: Q32R (8.3%), R46K (25%), L54M (33.3%); and group F: Q32L (18.2%), G36D (9.1%), V38A (9.1%), N42S (27.3%), N42T (9.1%), R46K (27.3%), L54M (45.4%), K77R (54.5%). Three samples demonstrated significant resistance mutations to fusion inhibitors. Analysis of RRE nucleotide primary sites observed mutation 28A in 27.2% and 8.3% on groups F and N respectively, and 27S in 8.3% on group T. There was selective pressure on HR1 region from HIV-1 patients using antiretroviral, independent of enfuvirtide exposure. There was no statistical difference between p24 curves of virus 36D compared with 36G, independent of T20 concentrations (p>0.05). It was observed less syncytial formation in 36D virus, with diminished fusogenic activity besides keeping infectivity. Conclusions: This study defined most prevalent RRE polymorphisms in Ceara/Brazil and suggests highly preserved regions primary sites to Rev connection. Observed a low resistance profile to enfuvirtide in failing regimens with this drug. Selective pressure on HR1 region in failed regimens with out fusion inhibitors was detected. A less syncytial formation in 36D virus with diminished fusogenic activity was detected.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.teses.ufc.br:7078 |
| Date | 18 November 2011 |
| Creators | Melissa Soares Medeiros |
| Contributors | Aldo Ãngelo Moreira Lima, EstevÃo Portela Nunes, Roberto da Justa Pires Neto, AnastÃcio de Queiroz Sousa, Jeovà Keny Baima Colares |
| Publisher | Universidade Federal do CearÃ, Programa de PÃs-GraduaÃÃo em Farmacologia, UFC, BR |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFC, instname:Universidade Federal do Ceará, instacron:UFC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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