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Previous issue date: 2013-04-25 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Introduction: Malaria is a public health issue distributed in tropical and subtropical
regions worldwide. In Brazil, the disease still has a high number of cases in which
Plasmodium vivax (P. vivax) is responsible for most of diagnosis. Lately, these cases
have been performing so complicated that becomes a matter of concern because the
species has a wide geographic distribution, and there is a need to control the
infection. One alternative for infection control would be the development of a vaccine.
However, a major problem for its development is the lack of understanding of the
immune response against the antigen candidates. Among the candidate antigens,
the Protein 1 Merozoite Surface (MSP-1) of Plasmodium has excelled, because
studies show that antibodies against different regions of MSP-1 confer clinical
protection in individuals living in endemic areas. The aim of this study was to
characterize the humoral immune response against the recombinant antigen of
conserved and variable regions of PvMSP-1 in individuals living in endemic areas in
the state of Amazonas. Methods: For this purpose, we produced three recombinant
proteins, two corresponding to the variable region (block 2) and the conserved (block
ICB1) of PvMSP-1 (using sequences identified by previous workers, and selected by
bioinformatics as epitopes B cell). The proteins were expressed and purified using
synthetic genes optimized for expression in Escherichia coli. The serum reactivity
from symptomatic and asymptomatic patients against the proteins was evaluated by
ELISA, along with protein ICB2 PvMSP-5-1 (obtained in previous work. Results and
Conclusion: The expression and purification of recombinant proteins were
performed successfully. The serological analysis against recombinant antigens
showed a higher level of antibodies against the protein ICB2-5 for both groups (Rio
Pardo and Manaus). Regarding IgG antibody response against the three proteins
(P1, P2 and P3), it was observed that the P2 protein was recognized in the serum of
most patients symptomatic of Manaus and Rio Pardo, whereas P3 has been the
most recognized in asymptomatic . The subclasses analysis showed that the IgG3
was the most prevalent against ICB2-5. The level of reactivity was low to subclasses
for all proteins, but when the frequencies of serum IgG2 and IgG3 responders were
assembled in silico (ICB2-5 + P1 + P2 + P3). These results recognition level
overcame ICB2-5 alone, suggesting that the development of the repertoire of
recombinant proteins corresponding to block 2 is capable to expand the spectrum of
reactive serum. / Introdução: A malária é um problema de saúde pública amplamente distribuída nas
regiões tropicais e subtropicais no mundo. No Brasil, a doença ainda apresenta
elevados números de casos, no qual o Plasmodium vivax (P. vivax) é responsável
pela maior parte de diagnóstico. Nos últimos anos, esses casos vêm se
apresentando de forma complicada, tornando-se este um motivo de preocupação,
pois está espécie apresenta ampla distribuição geográfica, dessa maneira torna-se
necessário o controle da infecção. Uma das alternativas para controle da infecção
seria o desenvolvimento de uma vacina. No entanto, um dos grandes problemas
para seu desenvolvimento é a incompreensão das respostas imunológicas contra os
antígenos candidatos. Dentre os antígenos candidatos, a “proteína 1” de superfície
do merozoíto (MSP-1) de Plasmodium tem se destacado, pois estudos demonstram
que anticorpos contra as diferentes regiões de MSP-1 conferem proteção clínica em
indivíduos que residem em áreas endêmicas. O objetivo desta trabalho foi
caracterizar a resposta imune humoral contra antígenos recombinantes de regiões
variavéis e conservada da PvMSP-1 em indivíduos que residem em áreas
endemicas no estado do Amazonas. Material e métodos: Para tanto, foram
produzidas três proteínas recombinantes, duas correspondente a região variável
(bloco 2) e uma da conservada (bloco do ICB1) da PvMSP-1 (utilizando sequencias
identificadas em trabalhadores anteriores, e selecionadas por bioinformática como
os epítopos de células B). Tais proteínas foram expressas e purificadas utilizando
genes sintéticos otimizados para expressão em Escherichia coli. A reatividade de
soros de pacientes sintomáticos e assintomáticos contra estas proteínas, juntamente
com a proteína ICB2-5 de PvMSP-1 (obtida em trabalhos anteriores), foi avaliada por
ELISA indireto. Resultados e Conclusão: A expressão e purificação das proteínas
recombinantes foram realizadas com êxito. A análise sorológica contra os antígenos
recombinantes demonstrou maior nível de anticorpos contra a proteína ICB2-5 para
ambas as aéreas (Rio Pardo e Manaus). Em relação à resposta de anticorpos IgG
contra às três proteínas (P1, P2 e P3), foi observado que a proteína P2 foi a mais
reconhecida nos soros de pacientes sintomáticos de Manaus e Rio Pardo, enquanto
que a P3 foi a mais reconhecida nos assintomáticos. Em análise a resposta de
subclasses observou-se que o IgG3 foi o mais prevalente contra ICB2-5. Em relação
às três proteínas o nível de reatividade foi baixo para as subclasses, porém quando
as frequências de soros respondedores IgG3 e IgG2 foram reunidas in silico(ICB2-
5+P1+P2+P3). Estas superaram os resultados nos níveis de reconhecimento da
ICB2-5 sozinha, sugerindo que o desenvolvimento de um repertório de proteínas
recombinantes correspondentes ao Bloco 2 é capaz de expandir o espectro de soros
reagentes.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:http://localhost:tede/5192 |
| Date | 25 April 2013 |
| Creators | Almeida, Maria Edilene Martins de. |
| Contributors | Mariúba, Luis André Morais, Nogueira, Paulo Afonso |
| Publisher | Universidade Federal do Amazonas, Programa de Pós-graduação em Imunologia Básica e Aplicada, UFAM, Brasil, Instituto de Ciências Biológicas |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFAM, instname:Universidade Federal do Amazonas, instacron:UFAM |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 8851295382702565619, 600, 500, 1984485651082134923 |
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