Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The double-strand DNA breaks are considered one of the most lethal forms of
damage that can compromise the ability of stem cells self-renew and
differentiate. Therefore, additional studies are necessary to identify genome
damage biomarkers that help the researchers to choice the better cell line to
apply in clinical use. Here, we evaluated the potential use of DNA Comet Assay,
DNA fragmentation fluorimetric assay using Picogreen dye and reactive oxygen
species (ROS) level by DCFH-DA fluorimetric assay as potential biomarkers to
identify the genome conditions of dental stem cells (DSCs) isolated from dog´s
canine teeth. The results showed important differences among the three initial
DSCs passage when compared to > 4th passages. In general, the initial DSCs
passages presented higher cell proliferation, lower DNA damage and ROS.
However, we noticed a large number of nucleus with some level of DNA
damage (30 to 40% in the initial DSCs passage and > 50% in the late passage)
that indicates an in vitro DSCs genomic fragility. The results suggest that these
relatively simple and inexpensive approaches as Comet, DNA fragmentation
could to help for sorting stem cell with less DNA damage used to research or
therapeutic use. / Quebras na dupla-fita do DNA são consideradas uma das formas mais letais de
dano que podem comprometer a capacidade das células-tronco de se autorenovarem
ou de se diferenciarem. Portanto, estudos adicionais são
necessários para identificar biomarcadores de danos genômicos que possam
ajudar os pesquisadores a escolher as melhores linhagens celulares para
estudos e seu uso clínico veterinário. Para tanto o presente estudo teve como
objetivo implantar uma técnica de obtenção de células-tronco a partir de polpa
de dente (dental stem-cells, DSCs) de cães avaliando a taxa de proliferação
celular, a morfologia das células e a qualidade celular através de indicadores
de dano de DNA e estresse oxidativo em oito diferentes passagens de cultura
em fase indiferenciada. A escolha de obtenção de células-tronco a partir da
polpa dentária se deu por ser de fácil acesso, as células possuírem
crescimento rápido e ótimo potencial de diferenciação celular. Para avaliar a
qualidade das células em oito diferentes passagens foi feita análise da taxa de
proliferação celular, de danos no DNA por duas técnicas complementares
(Ensaio do DNA Cometa e Fragmentação do DNA por análise fluorimétrica
utilizando-se o corante Picogreen) e dos níveis de espécies reativas de
oxigênio (EROs) que causam estresse oxidativo via ensaio fluorimétrico do
DCFH-DA. Os resultados mostraram importantes diferenças entre as
passagens iniciais em relação as mais tardias. Em geral até terceira passagem
a taxa de proliferação celular foi mais alta, com menor dano genômico e
produção de EROs, sendo a segunda passagem a que apresentou melhor
qualidade. Entretanto outra questão observada foi o grande número de células
com DNA danificado observado em todas as passagens. Os resultados
sugerem que testes relativamente simples e baratos como o DNA cometa e a
análise de fragmentação do DNA podem ajudar na escolher a passagem
celular em que as células apresentam melhor qualidade genômica e funcional
tanto para as pesquisas quanto na aplicação clínica regenerativa.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufsm.br:1/10159 |
| Date | 10 March 2013 |
| Creators | Aramburú Junior, Jaime Sardá |
| Contributors | Pippi, Ney Luis, Burmann, Paulo Afonso, Machado, Michel Mansur |
| Publisher | Universidade Federal de Santa Maria, Programa de Pós-Graduação em Medicina Veterinária, UFSM, BR, Medicina Veterinária |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFSM, instname:Universidade Federal de Santa Maria, instacron:UFSM |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 500500000007, 400, 500, 500, 500, 500, e7d62db5-d9ba-4842-bf91-8dd7b40e28b1, ae7b1917-8def-4e1c-94e2-e4240ab48cb9, 22fe281b-de7f-4946-b266-069bdcbbed98, fad860ca-fefe-46b6-b0ab-6c96a9bef011 |
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