Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The objective of present study was to investigate (Pro)renin receptor function in the theca and
granulosa cells during the preovulatory period and luteinization in cattle. During the initial
preovulatory period, prorenin induced the resumption of oocyte meiosis even in the presence
of follicular hemisections or forskolin. In granulosa cells, pró-renina did not increase LHinduced
epiregulin (EREG) mRNA after 6 h of culture. Treatment with prorenin plus LH
increased amphiregulin (AREG) and prostaglandin synthase 2 (PTGS2) mRNA in granulosa
cells. The absence of prorenin effect to stimulate EREG, AREG, and PTGS2 in granulosa
cells was established using different combinations of treatments with prorenin and/or aliskiren
([P]RR inhibitor) and/or LH. Treatment of granulosa cells with LH plus EGFR antagonist
(AG1478) did not regulate prorenin and (P)RR after 6 h of culture. This result was confirmed
in vivo using a model of intrafollicular treatment with AG1478 and intramuscular treatment
with GnRH. Finally, (P)RR protein and transcripts for prorenin and pro-fibrotic genes
increased in the granulosa cells from 12 h post-GnRH. In the theca cells, (P)RR mRNA and
protein increased 6 h after treatment of cows with GnRH. The LH effect to stimulate (P)RR
transcript was confirmed in vitro. Intrafollicular treatment with aliskiren did not reduce the
ovulation rate. In cultured theca cells, AREG and EREG mRNA were not significantly
expressed and ADAM17 was not stimulated by prorenin. Intrafollicular injection of AG1478
did not regulate LH-induced (P)RR, although increased CYP17A1 protein. Prorenin did not
induce androstenedione and testosterone synthesis in cultured theca cells. In the corpus
luteum, prorenin and (P)RR mRNA were increased at day 10 of estrous cycle compared to
day 5, but were not regulated by prostaglandin in vivo, as observed for profibrotic genes.
Intrafollicular treatment with aliskiren reduces serum progesterone levels in cows that
ovulated. Prorenin role in progesterone synthesis through (P)RR was also evidenced in vitro.
Moreover, prorenin induced ERK1/2 phosphorylation in luteal cells, although ERK1/2
inhibition (PD0325901) did not completely inhibit prorenin-induced progesterone synthesis,
as evidenced using AG1478. In summary, these results demonstrate that prorenin and (P)RR
are stimulated by LH at the end of the preovulatory period and, therefore, they are not related
to genes regulated by LH at the initial ovulatory process in granulosa cells; (P)RR is
stimulated by LH in the theca cells independently of EGFR; and prorenin stimulate
progesterone synthesis through (P)RR, which involves ERK1/2 and EGFR participation. In
conclusion, (P)RR is upregulated in granulosa and theca cells after gonadotropins peak and
prorenin/(P)RR play an important role in the resumption of oocyte meiosis and on
progesterone synthesis in the corpus luteum in cattle. / O objetivo do presente trabalho foi investigar a função do receptor de (pro)renina [(P)RR] nas
células da teca e da granulosa durante o período pré-ovulatório e luteinização em bovinos. No
início do período pré-ovulatório, pró-renina reiniciou a meiose oocitária bloqueada tanto pelas
metades foliculares, quanto por forscolina. Nas células da granulosa, pró-renina não aumentou
a expressão de RNAm para epirregulina (EREG) que foi induzido por LH após 6 horas de
cultivo. Pró-renina mais LH aumentaram a expressão de RNAm para anfirregulina (AREG) e
prostaglandina endoperoxidase sintetase-2 (PTGS2). Contudo, a ausência do efeito de prórenina
para estimular o RNAm para EREG, AREG e PTGS2 nas células da granulosa foi
evidenciada utilizando as diferentes combinações de tratamento com pró-renina e/ou
alisquireno [inibidor do (P)RR] e/ou LH. O tratamento das células da granulosa com LH e
antagonista de EGFR (AG1478) não regularam o RNAm para pró-renina e (P)RR após 6
horas de cultivo. Esse resultado foi confirmado in vivo, utilizando um modelo de tratamento
intrafolicular com AG1478 e GnRH intramuscular em vacas. Por fim, (P)RR e o RNAm para
pró-renina e genes prófibróticos aumentaram nas células da granulosa a partir das 12 horas
após tratamento de vacas com GnRH. Nas células da teca, a expressão de (P)RR aumentaram
6 horas após tratamento de vacas com GnRH. O estimulo de LH sobre o transcrito de (P)RR
foi confirmado in vitro. O tratamento intrafolicular com alisquireno não reduziu a taxa de
ovulação. No nosso cultivo de células da teca, a expressão de RNAm para AREG e EREG
não foi significativa e ADAM17 não foi estimulado por pró-renina. Injeção intrafolicular com
AG1478 não regulou (P)RR estimulado por LH, mas aumentou a proteína para CYP17A1.
Pró-renina não induziu a síntese de androstenediona e testosterona no nosso sistema de
cultivo. No corpo lúteo, RNAm para pró-renina e (P)RR foi aumentado no dia 10 do ciclo
estral comparado ao dia 5 e não foram regulados por prostaglandina in vivo, como observado
para os genes pró-fibróticos. O tratamento intrafolicular com alisquireno diminuiu os níveis
de progesterona plasmática em vacas que ovularam. O papel de pró-renina na síntese de
progesterona através de (P)RR também foi evidenciado in vitro. Ainda, pró-renina induziu a
phosphorilação de ERK1/2 nas células luteais, embora o bloqueio de ERK1/2 (PD0325901)
não inibiu completamente a síntese de progesterona induzida por pró-renina, como
evidenciado pelo uso de AG1478. Em resumo, esses resultados demonstram que pró-renina e
(P)RR são estimulados por LH no final do período pré-ovulatório e, portanto, não estão
relacionados com os genes regulados por LH no início do processo ovulatório nas células da
granulosa; (P)RR é estimulado por LH nas células da teca de forma independente de EGFR; e
a pró-renina estimula a síntese de progesterona via (P)RR envolvendo a participação de
ERK1/2 e EGFR neste processo. Em conclusão, (P)RR é regulado positivamente nas células
da granulosa e da teca após o pico de LH e a pró-renina/(P)RR possui um importante papel no
reinicio da meiose oocitária e na síntese de progesterona pelo corpo lúteo em bovinos.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufsm.br:1/11578 |
| Date | 10 March 2017 |
| Creators | Dau, Andressa Minussi Pereira |
| Contributors | Gonçalves, Paulo Bayard Dias, Bordignon, Vilceu, Mesquita, Fernando Silveira, Barreta, Marcos Henrique, Ferreira, Rogério |
| Publisher | Universidade Federal de Santa Maria, Centro de Ciências Rurais, Programa de Pós-Graduação em Medicina Veterinária, UFSM, Brasil, Medicina Veterinária |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFSM, instname:Universidade Federal de Santa Maria, instacron:UFSM |
| Rights | Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International, http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 500500000007, 600, fcd33ccc-f08d-428c-b7da-9d3757cf0a96, 80caad6e-cd88-462a-8a8b-a44df32d0994, cde930e5-d271-4b34-9a50-da931c4f4923, adffc152-b51a-4994-bc74-2305d45886af, 4873df17-19c3-4994-9cf4-8c5245e99114, bcc508a3-883f-4d67-9707-b35fdc0af016 |
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