La thérapie antirétrovirale (TAR) n'éradique pas le VIH de l'organisme. Le VIH persiste grâce à la prolifération de lymphocytes T CD4+ infectés de manière latente. De plus, bien que la plupart des provirus persistent sous une forme latente, un petit nombre de cellules infectées produisent des protéines virales et des virions. Les immunosuppresseurs administrés aux personnes subissant une greffe de rein, pour prévenir le rejet d’organe, inhibent la prolifération des lymphocytes T et l'activation immunitaire. Nous avons émis l'hypothèse que les immunosuppresseurs pourraient réduire à la fois la taille du réservoir viral latent ainsi que les marqueurs associés à la production résiduelle de VIH. Sept participants vivant avec le VIH sous TAR efficace et ayant subi une transplantation rénale suivie de la prise d’un traitement immunosuppresseur ont été recrutés. Des échantillons sanguins longitudinaux ont été prélevés avant et après la greffe (6-7 échantillons/participant, sur 2 ans).
Les effets des immunosuppresseurs sur l'activation des lymphocytes T ainsi que les taux d’anticorps plasmatiques dirigés contre l'enveloppe du VIH (un reflet de la production virale résiduelle) ont été évalués par cytométrie en flux et ELISA, respectivement. L'ADN total du VIH et les transcrits d'ARN-gag-LTR associés aux cellules ont été quantifiés par qPCR et la fréquence des cellules p24+ par HIV-Flow. Pour confirmer les résultats obtenus in vivo, nous avons optimisé un protocole de culture cellulaire pour évaluer l'impact des immunosuppresseurs les plus fréquemment utilisés (MMF, tacrolimus, dasatinib) sur les cellules infectées dans un environnement contrôlé.
Suite à la transplantation et à l’initiation du traitement immunosuppresseur, nous avons observé une diminution significative des niveaux d'expression des marqueurs d’activation et de prolifération HLA-DR et Ki67 dans les lymphocytes T CD4+, accompagnée d'une augmentation de la fréquence des cellules mémoires centrales et d'une forte diminution de la fréquence des lymphocytes T régulateurs. Les niveaux d'anticorps ciblant l'enveloppe du VIH ont également diminué pendant le traitement immunosuppresseur. Il y avait une diminution modeste et transitoire des niveaux d'ADN et d'ARN du VIH un mois après la transplantation rénale. Les résultats de HIV-Flow n'ont montré aucun impact significatif des immunosuppresseurs sur le réservoir inductible, avec de grandes variations entre les participants. Le modèle de culture cellulaire in vitro a révélé que de faibles doses d'immunosuppresseurs induisent généralement une diminution des marqueurs du VIH, alors que des doses plus élevées conduisent à des variations dépendantes des donneurs. Ainsi, nos résultats montrent que les traitements immunosuppresseurs diminuent la prolifération et l'activation des lymphocytes T CD4+, ce qui est concomitant avec une diminution modeste et transitoire des taux d'ADN et d'ARN du VIH. Nos résultats indiquent que la combinaison des traitements immunosuppresseurs actuels sont toutefois insuffisants pour affecter profondément et durablement le réservoir du VIH et suggèrent que la taille du réservoir est étroitement régulée par des forces homéostatiques difficiles à contrer. / Antiretroviral therapy (ART) does not eradicate HIV from the body. HIV persists through
proliferation of latently infected CD4+T-cells. Moreover, although most proviruses persist in a
latent form, a small number of infected cells produce viral protein and virions.
Immunosuppressants given to people undergoing kidney transplants to prevent rejection inhibit
T-cell proliferation and immune activation. We hypothesized that immunosuppressants could
reduce both the size of the latent viral reservoir as well as markers associated with residual
production of HIV. Seven participants living with HIV on suppressive ART who underwent
kidney transplantation and initiated immunosuppressive therapy were enrolled. Longitudinal
blood samples were collected before and after the transplant (6-7 samples/participant, over
2years).
The effects of immunosuppressants on T-cell activation as well as plasma HIV-envelope
antibody responses (a surrogate of residual viral production) were assessed by flow cytometry
and ELISA, respectively. Total HIV-DNA and cell-associated LTR-gag-RNA transcripts were
quantified by qPCR and the frequency of p24+ cells by HIV-Flow in isolated CD4+T-cells. To
confirm the results saw in vivo, we optimized a cell culture protocol to assess the impact of
frequently given immunosuppressants (tacrolimus, MMF and dasatinib) on infected cells in a
controlled environment.
Following organ transplant and initiation of immunosuppressive treatment, we observed a
significant decrease in the expression levels of HLA-DR and Ki67 in CD4+T-cells, which was
accompanied by an increase in the frequency of central memory cells and a sharp decrease in the
frequency of regulatory T-cells. Antibody levels targeting HIV envelope also decreased during
immunosuppressive therapy. There was a modest and transient decrease in HIV DNA and RNA
levels one month following kidney transplantation. HIV-Flow results showed no significant
impact of immunosuppressants on the inducible reservoir, with large variations between
participants. The in vitro cell culture model showed that low doses of immunosuppressants
generally induces a reduction in HIV markers, but higher doses lead to variations between
donors. Immunosuppressive therapy decreases the proliferation and activation of CD4+ T-cells
which is concomitant with a modest and transient decrease in HIV DNA and RNA levels. Our results indicate that current immunosuppressive drugs are insufficient to profoundly
and durably affect the HIV reservoir and suggest that the size of the reservoir is tightly regulated
by homeostatic forces that are difficult to counteract.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:umontreal.ca/oai:papyrus.bib.umontreal.ca:1866/28413 |
| Date | 08 1900 |
| Creators | Modica, Alessandro |
| Contributors | Chomont, Nicolas |
| Source Sets | Université de Montréal |
| Language | fra |
| Detected Language | French |
| Type | thesis, thèse |
| Format | application/pdf |
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