As espécies reativas de oxigênio/nitrogênio são produzidas por fagócitos, inicialmente, pela formação do ânion superóxido do qual se derivam outros potentes microbicidas. Em resposta ao estresse oxidativo/nitrosativo, todas as células apresentam capacidade de defesa antioxidante endógena. Fungos são capazes de modular sua defesa antioxidante aumentando sua patogenicidade frente às defesas do organismo hospedeiro. Vários dados experimentais levantam a hipótese que de que Candida albicans são fungos que aumentam sua defesa antioxidante para formação de biofilmes. Os nitróxidos são antioxidantes sintéticos que modulam a atividade do complexo NADPH oxidase (Nox2) de fagócitos, reduzindo a produção de ânions superóxido. Esse efeito dos nitróxidos diminui as ações deletérias de oxidantes durante um processo inflamatório, mas poderia comprometer a capacidade microbicida dos fagócitos. O objetivo deste trabalho foi o estudo da interação entre neutrófilos humanos e C. albicans na forma planctônica e biofilme, enfocando a defesa antioxidante enzimática como mecanismo de patogenicidade do fungo. O efeito de adição do nitróxido 4-hidroxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidina-1-oxil (Tempol) foi testado, com o intuito de verificar se este composto altera a resistência destes microrganismos ao ataque de oxidantes produzidos por fagócitos. Foi realizado o doseamento das enzimas antioxidantes superóxido dismutases (SOD) e catalase (CAT) das leveduras e dos neutrófilos na presença e ausência do Tempol. O monitoramento do burst respiratório foi utilizado para determinar os efeitos do nitróxido sobre a atividade de Nox2 dos neutrófilos. O ensaio de killing de C. albicans por neutrófilos foi realizado cultivando-se a levedura na presença de neutrófilos previamente tratados com Tempol ou apenas com o veículo e avaliado através de contagem de unidades formadoras de colônias. Os resultados revelaram uma alta atividade das enzimas SOD e CAT no fungo, sendo maior quando em biofilme. Além disso, a levedura diminuiu a atividade enzimática antioxidante dos neutrófilos humanos, quando os mesmos foram expostos. O Tempol foi capaz de reduzir essa atividade tanto na levedura quanto nos neutrófilos. A levedura em suas formas estudadas estimulou alta atividade de Nox2 dos neutrófilos e o Tempol inibiu a mesma. Através do ensaio de killing foi detectado um crescimento menor do fungo quando na presença dos neutrófilos e um maior crescimento microbiano quando adicionado o Tempol, sugerindo um comprometimento da ação fungicida dos neutrófilos. Os resultados mostraram que, na forma de biofilme, C. albicans tem uma maior defesa frente ao sistema imune do hospedeiro, decorrente, ao menos em parte, da alta atividade das enzimas SOD e CAT, o que exige uma demanda mais elevada de espécies oxidantes para controlar o foco infeccioso. A presença de um antioxidante sintético provocou diminuição da concentração destas espécies oxidantes, o que pode ser deletério no controle da infecção. / The early reactive oxygen/nitrogen species (ROS/RNS) produced by phagocytes are superoxide anions, from which are derived other oxidant compounds that are potent microbicides. In response to oxidative/nitrosative stress, all cells present endogenous antioxidant defense capacity. Some fungi are able to modulate their antioxidant defense, increasing their pathogenicity forward to the oxidant host organism attack. Attention has been given to the ability of Candida albicans biofilms modulate their antioxidant defense, associated to the increase of morbidity and mortality of infected patients. Nitroxides are synthetic antioxidants that modulate the activity of Nox2 in phagocytes, reducing the production of superoxide anions. This effect of nitroxides decreases the harmful effects of ROS/RNS during an inflammatory process, but could compromise the microbicidal capacity of phagocytes. The aim of this work was to study the interaction between human phagocytes and C. albicans in both, planktonic and biofilm, forms. Also, the effect of nitroxide 4-hydroxy-2,2,6,6-tetramethylpiperidine 1-oxyl (Tempol) was tested in order to verify the hypothesis of interference of this antioxidant in the host immune defense. The antioxidant enzymes catalase (CAT) and superoxide dismutases (SOD) were evaluated in yeasts and neutrophils, either in presence or absence of Tempol. Neutrophil respiratory burst was monitored to determine the effects of the nitroxide on superoxide anion production. Killing assay of C. albicans was performed by cultivating yeast in the presence of human neutrophils with or without Tempol addition, followed by colony forming units counting. The results showed a high activity of SOD and CAT in the fungus, which was stronger when biofilm form was established than that planktonic one. In addition, the exposure to yeast caused a decrease on antioxidant enzymes activities of human neutrophils. Tempol addition caused a significant impairment on both antioxidant enzymatic activities, as in neutrophil suspensions as in cultured fungi. Exposure to C. albicans biofilms stimulated a larger neutrophil superoxide anion formation than correspondent planktonic form, an event that was inhibited by Tempol. Nitroxide addition partially deleted neutrophil fungicide capability, suggesting a deleterious action on phagocytic fulfillment on host defence. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:10.254.254.39:tede/293 |
| Date | 17 February 2014 |
| Creators | RESENDE, Déborah Braga |
| Contributors | BRIGAGÃO, Maísa Ribeiro Pereira Lima, http://lattes.cnpq.br/0963588859777460, DIAS, Amanda Latércia Tranches, BARROS, Marcelo Paes de, BURGER, Eva |
| Publisher | Universidade Federal de Alfenas, Instituto de Ciências Biomédicas, Brasil, UNIFAL-MG, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UNIFAL, instname:Universidade Federal de Alfenas, instacron:UNIFAL |
| Rights | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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