Tesis para optar al grado académico de Magíster en Bioquímica, área de
especialización Bioquímica de Proteínas y Biotecnología, y Memoria para
optar al título de Bioquímico / La respuesta inmune de invertebrados se basa en un conjunto de elementos del
sistema inmune innato, donde los péptidos antimicrobianos (AMPs) juegan un
importante rol. Los AMPs son moléculas anfifílicas que se almacenan en el interior de
los hemocitos o circulan libremente en la hemolinfa. Su efectividad en la defensa
innata se basa en su baja especificidad, actuando contra un amplio rango de
microorganismos; su pequeño tamaño y baja toxicidad abren potenciales aplicaciones
como nuevos antibióticos, con la ventaja de que no hay evidencia de bacterias
resistentes a ellos. Considerando la diversidad de moluscos marinos en nuestras
costas, la hipótesis de este trabajo ha sido que existen AMPs en la hemolinfa o
hemocitos de moluscos chilenos comestibles.
Mediante ensayos en medio sólido, encontramos que extractos de hemocitos de
Concholepas y especies de Lapas del género Fissurellidae, exhiben actividad AM
contra V. parahaemolyticus y E. coli, ambas cepas Gram negativas. A través de
análisis mediante microscopia electrónica, caracterizamos los hemocitos y
encontramos al menos dos tipos celulares que presentan diferentes tipos de gránulos
electrón-densos en su citoplasma, que de acuerdo a lo descrito en la literatura podrían
almacenar AMPs. La caracterización y purificación de los extractos de hemocitos
mediante métodos electroforéticos mostró un péptido principal de 3,7 kDa, y los
estudios cromatográficos indican la presencia de AMPs de naturaleza hidrofóbica. La
identificación de estos péptidos esta en progreso, y se espera a futuro iniciar su
utilización en alguna aplicación biomédica o biotecnológica / The immune response of invertebrates relies on elements of the innate immune
system, among them, antimicrobials peptides (AMPs) play a relevant role. They are
amphiphilic molecules that are accumulated inside the hemocytes or are circulating
freely in the hemolymph. Their effectiveness in the innate defence relay in their low
specificity, thus acting on a wide range of microorganism; its small size and low toxicity
open potential applications as new antibiotics, with the advantage that there are no
evidence of building resistant bacteria. Considering the diversity of Chilean mollusc
marine species, we hypothesized that there are AMPs in hemolymph or hemocytes of
Chilean commercial molluscs.
Using solid agar plate assays, we found that extracts of hemocytes from
Concholepas and limpets of the Fissurellidae genus, exhibit antibacterial activity
against Vibrio parahaemolyticus and Escherichia coli both Gram negative bacteria.
Through electron microscopic analysis, we characterized the hemocytes and found at
least two cellular types bearing different kind of electron-dense granules, according to
literature, these granules may contain AMPs. The characterization and purification of
hemocytes extracts through electrophoresis showed the presence of a principal peptide
of 3,7 kDa, and chromatographic methods indicate the presence of AMPs with
hydrophobic nature. The identification of these peptides is in progress to assess their
utilization in some biomedical and biotechnological applications / Fundación
COPEC-Pontificia Universidad Católica CQ057
Fondecyt
| Identifer | oai:union.ndltd.org:UCHILE/oai:repositorio.uchile.cl:2250/140591 |
| Date | January 2010 |
| Creators | Salazar Lizama, Fabián Alberto |
| Contributors | Kettlun Maluk, Ana María, Becker Contreras, María Inés |
| Publisher | Universidad de Chile |
| Source Sets | Universidad de Chile |
| Language | Spanish |
| Detected Language | Spanish |
| Type | Tesis |
| Rights | Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Chile, http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/cl/ |
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