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Previous issue date: 2018-03-09 / The research for renewable energy sources became even more essential due
the imminent depletion of the fossil fuel sources. In this context Brazil has a
prominent position on the world stage, since it has already used ethanol from
sugar cane for some decades. The second generation ethanol (2G) is produced
from the lignocellulosic biomass of the vegetable, which is composed by
cellulose, hemicellulose and lignin. The hydrolysis of these compounds requires
a specific and high cost enzymatic cocktail. On this scenario, the Trichoderma
reesei fungus gains spotlight, since it is one the microorganisms with the
highest potential to produce hydroliytic enzymes. Therefore, the attempt to
increase the cellulases production of this fungus is an important for the
production of biofuels more attractive to the market. The aim of this work is to
confirm the deletion of the sequence which codifies the zinc finger motif of the
transcription factor ACE1 for cellulose repression from the T. reesei RUT-C30
strain and to characterize the enzymatic production of these mutant strains
named T. reesei RUT-C30Δzface1. The enzymatic quantification was carried
using the substrates carboxymethyl cellulose, microcrystalline cellulose and
Whatman paper filter. The deletion confirmation occurred by the absence of the
amplification gene ace1 on the mutants and the amplification of a 429 pb
fragment of the RUT-C30 parental strain when the same primers and PCR
conditions where used. These results suggest that the deletion of the zinc finger
motif of the from ACE1 transcription factor is a prominent way to achieve an
economically viable production of bioethanol. / Com a depleção eminente das fontes de combustíveis fósseis, torna-se cada
vez mais imprescindível a busca por fontes renováveis de energia. Neste
âmbito, o Brasil tem destaque no cenário mundial, pois já utiliza o etanol a
partir da cana-de-açúcar há algumas décadas. O etanol de segunda geração
(2G) é produzido a partir da massa lignocelulolítica do vegetal, que é composta
de celulose, hemicelulose e lignina. A hidrólise desses compostos necessita de
um coquetel enzimático específico e de alto custo. Neste cenário, o fungo
Trichoderma reesei ganha destaque, pois é um dos microrganismos com maior
potencial para produção de enzimas hidrolíticas. Desta forma, as tentativas de
aumentar a produção de celulases desse fungo, torna a produção do bioetanol
uma alternativa mais atrativa ao mercado. Este trabalho teve como objetivos
confirmar a deleção da sequência que codifica o dedo de zinco do fator de
transcrição do repressor de celulase ACE1 da linhagem T. reesei RUT-C30 e
caracterizar a produção enzimática dessas linhagens mutantes denominadas T.
reesei RUT-C30Δzface1. A confirmação de deleção ocorreu pela ausência de
amplificação do gene ace1 nos mutantes e amplificação de um fragmento de
479 pb na linhagem parental RUT-C30, quando utilizados os mesmos primers e
condições de reação de PCR. A dosagem enzimática com os substratos
carboximetilcelulose (CMC), celulose microcristalina (Avicel®) e papel de filtro
Whatman (PF), mostraram que o RUT-C30Δzface1 tem a atividade celulolítica
aumentada em até 3,2 vezes em Avicel e 2,1 vezes em CMC e PF em
comparação à linhagem parental RUT-C30. Em 24 horas de hidrólise os
mutantes apresentaram liberação de açúcar 1,4 vezes maior em relação ao
RUT-C30. Estes resultados sugerem que a deleção parcial do fator de
transcrição ACE1 é um proeminente caminho para a conquista de uma
produção de bioetanol economicamente viável.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:tede.unioeste.br:tede/3702 |
| Date | 09 March 2018 |
| Creators | Bueno, Indianara Kawana |
| Contributors | Maller , Alexandre, Maller , Alexandre, Simão, Rita de Cássia Garcia, Maller , Ana Claudia Paiva Alegre |
| Publisher | Universidade Estadual do Oeste do Paraná, Cascavel, 6588633818200016417, 500, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas, UNIOESTE, Brasil, Centro de Ciências Médicas e Farmacêuticas |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações do UNIOESTE, instname:Universidade Estadual do Oeste do Paraná, instacron:UNIOESTE |
| Rights | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 7878055067573953101, 600, 600, 600, -8940439713387849267, 6997636413449754996 |
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