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Investigação histoquimiluminescente com lectinas e avaliação da influência dos hormônios esteroides na expressão de glicosiltransferases em neoplasias prostáticas

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2017-08-09T13:55:42Z
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Previous issue date: 2016-08-12 / FACEPE / O câncer está associado a alterações na glicosilação de glicoproteínas e glicolipídios de
superfície celular que podem afetar as interações entre esses glicanos de superfície
celular e lectinas endógenas determinando o potencial metastático do tumor. Este
trabalho teve como objetivo avaliar o glicofenótipo de tecidos de próstata normal,
Hiperplasia Prostática Benigna (HPB) adenocarcinoma próstatico (AP) e investigar se
estrógeno regula a glicosilação alterada no câncer da próstata andrógeno refratário
usando as linhagens DU-145 e PC-3. As lectinas Concanavalin A (Con A), Ulex europaeus
agglutinin (UEA-I) e Peanut agglutinin (PNA) foram conjugadas ao éster de
acridina (EA-lectinas). As amostras de tecido foram incubadas com lectinas-EA e a
quimiluminescência do complexo lectina-tecido-EA foi expressa em unidades relativas
de luz (URL). Tecidos transformados demonstraram uma expressão estatisticamente
significativa inferior de α-D-glucose / manose e Gal-β (1-3) -GalNAc que os tecidos
normais. No entanto, uma maior expressão de α-L-fucose foi observada em AP em
relação a tecidos normais e a BHP. Observou-se uma diminuição da expressão dos
valores de URL por inibição da interação entre tecidos e lectinas-AE utilizando os seus
carboidratos específicos. A relação entre URL e a área de tecido mostrou uma
correlação linear para todos lectinas-AE em ambos os tecidos transformados. Nos
estudos in vitro utilizando linhagens de câncer de próstata andrógeno refratário, DU-145
e PC-3 tratadas com estradiol ou estradiol associado à fulvestranto, foi observado na
linhagem PC-3 aumento de expressão de CMP-Neu5Ac: GalNAc-R α-2,6sialiltransferase
(ST6GALNac-I) quando exposta a estradiol e uma diminuição de
expressão na presença do antagonista fulvestranto. Esse comportamento não foi
observado na linhagem DU-145. O receptor de estrógeno ERα apresentou diminuição
de expressão em células PC-3 tratadas com fulvestranto, não sendo observada diferença
de expressão do receptor de estrógeno β em nenhuma das linhagens. Lectin blotting
usando as lectinas VVA (Vicia Villosa Lectin) e SNA (Sambucus nigra aglutinin)
possibilitou identificar a sialilação do antígeno Tn nas células PC-3 tratadas com
estradiol, bem como a expressão do antígeno Tn não sialilado na linhagem DU-145 nas
mesmas condições de tratamento. A capacidade de migração de células PC-3 tratadas
com estradiol, estradiol combinado a fulvestranto e estradiol combinado a SNA foi
avaliada através do ensaio migração (cicatrização de ferida), sendo observado que
estradiol induz migração celular enquanto que fulvestranto e SNA reduzem a
capacidade migratória. Portanto, podemos inferir que no câncer de próstata há uma
alteração na glicosilação e que estrógeno possivelmente pode atuar regulando a
expressão de glicosiltransferases responsáveis pela alteração da glicosilação conferindo
um potencial metastático tumoral. / Cancer is associated with glycosylation alterations in cell-surface glycoproteins and
glycolipids that can affect interactions between those glycans and endogenous lectins,
determining the metastatic potential of the tumor. This study aimed to evaluate the
glycophenotype in normal prostate, benign prostatic hyperplasia (BPH) and prostatic
adenocarcinoma (PCa) tissues and investigate as estrogen regulates the altered
glycosylation in prostate cancer androgen refractory using DU-145 and PC-3 cells.
Concanavalin A (Con A), Ulex europaeus agglutinin (UEA-I) and Peanut agglutinin
(PNA) lectins were conjugated to acridinium ester (lectins-AE). Tissue samples were
incubated with lectins-AE. The chemiluminescence of the tissue-lectin-AE complex was
expressed in relative light units (RLU). Transformed tissues showed statistical
significant lower α-D-glucose/mannose and Gal-β(1-3)-GalNAc expression than normal
tissues. However, higher α-L-fucose expression was observed in PCa in relation to
normal and BHP tissues. We observed an expressive decreasing of the values of RLU
by inhibition of the interaction between tissues and lectins-AE using their specific
carbohydrates. The relationship between RLU and tissue area showed a linear
correlation for all lectin-AE in both transformed tissues. In vitro studies using DU-145
and PC-3 androgen-refractory cell lines treated with estradiol or estradiol associated to
fulvestrant was observed in PC-3 cell line increased α 2,6-sialyltransferase
(ST6GALNac-I) expression when exposed to estradiol and decreased of expression in
presence of the fulvestrant antagonist. This behavior was not observed in DU -145 cells.
The estrogen receptor ERα presented decreased expression in PC-3 cells treated with
fulvestrant, not seen difference in estrogen receptor β expression in any of the cells
lines. Through lectin blotting using the VVA lectins (Lectin Vicia villosa) and SNA
(Sambucus nigra aglutinin) was identified sialylation Tn antigen (sTn) in PC-3 cells
treated with estradiol as well as the Tn antigen in DU-145 under the same conditions of
treatment. Migration capacity of the PC-3 cells treated with estradiol, fulvestrant and
SNA was measured by wound-healing assay (n=2). We observed that estradiol induced
cell migration while fulvestrant (ICI) and SNA lectin reduced migration capacity into
the wounds. Representative image of the cell cultures with scratches at 24 h are shown.
Therefore, we can infer that there is change in glycosylation in prostate cancer and that
estrogen can act regulating the expression of glycosyltransferase responsible for the
glycosylation altered conferring tumor metastatic potential.

Identiferoai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/20410
Date12 August 2016
CreatorsSILVA, Lúcia Patrícia Bezerra Gomes da
Contributorshttp://lattes.cnpq.br/6466300269003304, CARVALHO JUNIOR, Luiz Bezerra de, BELTRÃO, Eduardo Isidoro Carneiro
PublisherUniversidade Federal de Pernambuco, Programa de Pos Graduacao em Biologia Aplicada a Saude, UFPE, Brasil
Source SetsIBICT Brazilian ETDs
LanguageBreton
Detected LanguageEnglish
Typeinfo:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
Sourcereponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE
RightsAttribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil, http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/, info:eu-repo/semantics/openAccess

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