Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:40Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-02-22 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Introdução: O osso é um tecido mineralizado que está sob a influência de diversos fatores sistêmicos, locais e ambientais. Dentre os fatores sistêmicos, o estrógeno é um hormônio bem conhecido por exercer uma função inibitória sobre a reabsorção óssea. Devido ao fato do osso alveolar de ratas jovens sofrer contínua e intensa remodelação para acomodar os dentes em formação e erupção, ele constitui um adequado modelo in vivo para estudar a possível ação do estrógeno sobre os osteoclastos. Objetivo: Na tentativa de investigar a possibilidade do estrógeno induzir a morte de osteoclastos, foi examinado o osso alveolar de ratas jovens tratadas com estrógeno. Métodos: Quinze ratas de 22 dias foram divididas em grupos: Estrógeno (GE), Sham (GS) e Controle (GC). Os animais do GE receberam, durante 7 dias, injeção intramuscular diária de 0,125mg/100g de estrógeno (Benzoginoestril-ap®) diluído em óleo de milho. Os animais do GS receberam o óleo utilizado como veículo de diluição. Após 8 dias, fragmentos contendo osso alveolar foram removidos e processados para microscopia de luz e microscopia eletrônica de transmissão. Os cortes foram corados em hematoxilina/eosina (HE) e o método do TRAP (fosfatase ácida resistente ao tartarato) foi utilizado como marcador de osteoclastos. Foi realizada a análise quantitativa do número de osteoclastos TRAP-positivos/mm de superfície óssea. Para detecção de apoptose, cortes foram submetidos ao método do TUNEL (Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP Nick End Labeling); os métodos TUNEL/TRAP combinados foram também utilizados. Resultados: O número de osteoclastos TRAP-positivos/mm de superfície óssea foi significantemente reduzido no GE comparado ao GC e ao GS. No GE, foram observados osteoclastos TRAP-positivos exibindo núcleos TUNEL-positivos. Além disso, imagens ultraestruturais revelaram osteoclastos encolhidos exibindo núcleos com massas conspícuas e tortuosas de cromatina condensada, típicos de apoptose. Conclusões: Os resultados reforçam a idéia que o estrógeno inibe a reabsorção óssea promovendo a redução no número de osteoclastos, indicando, portanto, que esta redução pode ser, pelo menos em parte, uma conseqüência da apoptose de osteoclastos. / Introduction: Bone is a mineralized tissue which is under the influence of several systemic, local and environmental factors. Among systemic factors, estrogen is a hormone well known for its inhibitory function on bone resorption. Since alveolar bone of young rats undergoes continuous and intense remodeling to accommodate the growing and erupting tooth, it is a suitable in vivo model to study the possible estrogen action on bone. Purpose: In an attempt to investigate the possibility that estrogen may induce death of osteoclasts, we have examined the alveolar bone of estrogen treated young rats. Methods: Fifteen 22-day-old female rats were divided into Estrogen (EG), Sham (SG) and Control (CG) groups. Rats from EG received during 7 days, daily intramuscular injection of 0.125mg/100bw of estrogen (Benzoginoestril-ap®) diluted in corn oil. Rats from SG received oil used as diluition vehicle. After 8 days, fragments containing alveolar bone were removed and processed for light microscopy and transmission electron microscopy. Sections were stained with hematoxylin/eosin (HE) and tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP) was used as an osteoclast marker. Quantitative analysis of the number of TRAP-positive osteoclasts/mm of bone surface was carried out. For detection of apoptosis, sections were submitted to the TUNEL (Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP Nick End Labeling) method; TUNEL/TRAP methods combined were also used. Results: The number of TRAP-positive osteoclasts/mm of bone surface was significantly reduced in EG compared to CG and SG. TRAP-positive osteoclasts exhibiting TUNEL-positive nuclei were observed in EG. In addition, the ultrastructural images revealed shrunken osteoclast exhibiting nuclei with conspicuous and tortuous masses of condensed chromatin, typical of apoptosis. Conclusion: Our results reinforce the idea that the estrogen inhibits bone resorption by promoting reduction in the number of osteoclasts, indicating therefore, that this reduction may be, at least in part, a consequence of osteoclast apoptosis. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-01-24Bitstream added on 2014-06-13T19:00:39Z : No. of bitstreams: 1 reis_acg_dr_jabo.pdf: 749766 bytes, checksum: 91288058e5c8e2a0b2b59a94f7d36cb3 (MD5) / Considerando-se a importância da paca, roedor histricomorfo componente da fauna silvestre brasileira, diante de seu potencial zootécnico e ainda da possibilidade de tornar-se uma nova opção de animal experimental e sopesando-se também o valor da aplicação de técnicas não invasivas na para elucidar fatores reprodutivos, visa-se com esta pesquisa, neste roedor, caracterizar as flutuações hormonais de progestinas e estrógenos fecais durante o ciclo estral e período gestacional, validar um método não invasivo para diagnóstico da gestação, bem como avaliar o uso de miçangas como forma de marcar e individualizar as amostras fecais. Nove fêmeas adultas, não nulíparas, diagnosticadas não prenhes mediante exame ultrassonográfico, tiveram suas fezes marcadas, por meio da ingestão de miçangas, e colhidas diariamente durante 43 dias consecutivos; após este período, machos foram adicionados aos grupos das fêmeas que tiveram as fezes colhidas, apenas uma vez por semana, até o parto. Os valores de progestágenos fecais observados durante o ciclo foram de 0,37 a 7,9 ng/g de fezes secas e de estrógenos fecais de 5,08 a 37,72 ng/g de fezes secas e não foi possível observar flutuações de progestágenos que caracterizassem fase lútea e que fosse compatível com picos de estradiol entre elevações de progestágenos. Durante a gestação os valores de progestágenos oscilaram de 1,33 a 6,42 ng/g de fezes secas; os valores de estrógenos fecais variaram de 8,97 a 1964 ng/g de fezes secas com acentuado aumento no segundo terço de gestação. Um diagnóstico de gestação pode ser confirmado com observação de níveis de estrógenos fecais acima de 41,06 ng/g de fezes por duas semanas consecutivas. O marcador plástico é item seguro e sem contraindicações na marcação e individualização das fezes de paca / Considering the importance of Cuniculus paca, a hystricomorph rodent component of Brazilian wildlife, its livestock potential besides the possibility that it might become a new option for animal experimentation and also the value of non invasive techniques to elucidation of reproductive parameters, the aim of this study was to characterize, for this rodent, hormonal fluctuations of fecal progestins and estrogens during estrous cycle and pregnancy, validate a non-invasive method for pregnancy diagnosis and evaluate the use of plastic beads as a fecal marker. Nine adult females, non nulliparous, non-pregnancy diagnosed by ultrasound, had their feaces marked, through the ingestion of beads, and collected daily for 43 days, after this period, males were added to female groups and the feaces were collected only once a week until parturition. The values of fecal progestagens observed throughout the cycle were 0.37 to 7.9 ng/g of dry feces and fecal estrogens were 5.08 to 37.72 ng/g dry feces; no progestins fluctuation that characterize luteal phase compatible with estradiol peak was observed. During pregnancy, progesterone values ranged from 1.33 to 6.42 ng/g dry feces, fecal estrogen values vary from 8.97 to 1964 ng/g dry feces with a sharp rise in the second third of gestation. A pregnancy diagnosis can be confirmed by observation of fecal estrogen levels up to 41.06 ng/g of feces for two consecutive weeks. The plastic marker was found to be safe and effective at yielding readily identifiable stools in pacas

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2004-03-01Bitstream added on 2014-06-13T19:56:55Z : No. of bitstreams: 1 park_dm_me_arafo.pdf: 1747236 bytes, checksum: ddf8c7542e229e017862e37608d671dc (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A reabsorção óssea é um fator limitante que determina o grau de movimentação dentária induzida ortodonticamente. Vários hormônios, dentre os quais os estrógenos desempenham importante papel no equilíbrio entre formação e reabsorção óssea. Embora alguns trabalhos demonstrem relação direta entre os estrógenos e a movimentação ortodôntica, a influência destes hormônios na movimentação dentária após remoção do aparelho ortodôntico e na estrutura óssea alveolar durante esta fase ainda não foi esclarecida. Sendo a manutenção da estabilidade dental pós-tratamento ortodôntico essencial para o êxito do tratamento, o conhecimento e o controle dos fatores que interferem nesta estabilidade tornam-se imprescindível à Ortodontia. Assim, este trabalho teve por objetivo avaliar a influência do estrógeno (17ß -estradiol) no osso alveolar e na movimentação dentária após remoção do aparelho ortodôntico em ratas ciclando normalmente (grupo C), ovariectomizadas (grupo OVX) e ovariectomizadas com terapia de reposição estrogênica (grupo OVXE2), submetidas à movimentação ortodôntica por 14 dias. Um aparelho ortodôntico foi instalado no incisivo e primeiro molar superior esquerdo. O hemiarco direito serviu como controle, não recebendo qualquer tipo de aparelho ortodôntico. A análise histomorfométrica do osso alveolar mostrou que as ratas ovariectomizadas apresentaram maior reabsorção óssea. Estas ratas apresentaram também maior magnitude de movimentação dentária em relação às ratas ciclando ou aquelas ovariectomizadas com reposição hormonal. Avaliados conjuntamente, estes resultados sugerem que, para realizar um tratamento ortodôntico efetivo é necessário ser considerada, no diagnóstico bem como no planejamento do tratamento ortodôntico em pacientes com distúrbios hormonais relacionados aos estrógenos a obtenção de informações acerca... . / Bone resorption is a limiting factor that determines the degree of orthodontically induced dental movement. Several hormones, including estrogens, play a key role in both bone formation and bone resorption processes. Even though many studies have shown a direct relationship between estrogens and orthodontically induced dental movement, their effect on dental movement after removing orthodontic appliance and on alveolar bone morphology during this phase remains to be clarified. Being the maintenance of dental stability following orthodontic treatment an important key for a successful treatment, the knowledge and control of factors that could affect this stability are essential for Orthodontics. Then, the aim of this study was to evaluate the influence of estrogen (17ß - estradiol) on alveolar bone morphology and on dental movement following removal of orthodontic appliance in normally cycling rats, ovariectomized rats and ovariectomized rats with estrogen reposition therapy. The orthodontic appliance was installed in the left maxillary incisive and first maxillary molar, where remained for 14 days. The untreated right side was used as control. Histological analysis of alveolar bone revealed that ovariectomized rats presented more bone resorption than the others two groups. Also, ovariectomized rats presented larger dental movement than that observed in normally cycling rats while estrogen reposition therapy in ovariectomized rats was capable of reversing that effect. Taken together, these results strongly suggest that in order to have a more effective orthodontic treatment, getting more information about the general healthy state of patients, mainly concerned with estrogen disturbs, is necessary during both the diagnostic and planning orthodontic treatment.

As diversas interações hormonais durante e gestação e parto na espécie canina são parcialmente conhecidas. A resposta dos tecidos frente ao estímulo hormonal é dependente da expressão gênica de seus receptores, bem como da concentração local dos hormônios. Desta maneira, o presente estudo apresentou como objetivos: caracterizar a expressão gênica dos receptores de estrógeno e ocitocina no endométrio, miométrio e placenta, correlacionando com as concentrações séricas dos respectivos hormônios durante a gestação e o parto. As cadelas gestantes foram alocadas em 4 grupos de acordo com a idade gestacional: até 20 dias de gestação (grupo 1, n=11), de 20 a 40 dias de gestação (grupo 2, n=12), de 40 a 60 dias de gestação (grupo 3, n=12) e em pródromos do parto (grupo 4, n=11). As cadelas dos grupos 1, 2 e 3 foram submetidas à ovário-histerectomia e as cadelas do grupo 4, à cesariana seguida da ovário-histerectomia. Amostras de endométrio, miométrio e placenta foram colhidas, bem como amostras de sangue para obtenção do soro sangüíneo. A extração do RNA total e a confecção do cDNA das amostras foram realizadas a partir de kits comerciais. As reações da PCR em tempo-real foram realizadas para os genes (RNAm) do receptor do estrógeno α (REα) e receptor da ocitocina (OTR), utilizando o 18S e RPS5 como controles endógenos. As dosagens hormonais foram realizadas por radioimunoensaio. A expressão gênica do RNAmREα e RNAmOTR diferiram de acordo com o tecido e período gestacional. No endométrio, a expressão do RNAmREα foi constante durante toda a gestação e parto, enquanto que o RNAmOTR foi mais expresso no grupo 4. Em relação ao miométrio, a expressão do RNAmREα foi maior nos grupos 2 e 4, já o RNAmOTR foi mais expresso nos grupos 3 e 4. Na placenta, o RNAmREα apresentou maior expressão nos grupos 1 e 2, e o RNAmOTR não sofreu mudanças durante a gestação e o parto. As concentrações séricas de ocitocina mantiveram-se constantes, enquanto os níveis estrogênicos aumentaram a partir de 40 dias de gestação até o início do parto. Conclui-se que a expressão gênica dos REα e OTR diferem de maneira temporal durante a gestação e o parto nos tecidos avaliados e as concentrações séricas de ocitocina não interferem na expressão gênica de tais receptores, enquanto os níveis de estrógeno elevam-se ao final da gestação, sendo possível atribuir a tal perfil a diferente modulação dos REα e OTR nos tecidos estudados. / Several hormone interactions during pregnancy and parturition in the canine species are still unknown. Tissue response to hormonal stimulation is dependent on the expression of its receptor gene, as well as of the local hormonal concentration. Hence, the present study aimed to characterize the expression of the canine estrogen and oxytocin receptor genes in the endometrium, myometrium and placenta and its correlation with blood levels of the referred hormones during pregnancy and parturition. Pregnant bitches were allocated into 4 groups according to the gestational period: up to 20 days of pregnancy (Group 1, n=11), from 20 to 40 days of pregnancy (Group 2, n=12), from 40 to 60 days of pregnancy (Group 3, n=12) and in the early stage of labor (Group 4, n=11). Bitches from groups 1, 2 and 3 were subjected to ovaryhisterectomy and bitches from group 4 were submitted to cesarian section followed by ovaryhistectomy. Endometrium, myometrium and placenta samples were colleted, as well as blood samples. Extraction of the total RNA and cDNA synthesis were accomplished through commercial kits. The real-time PCR reactions were performed for the estrogen-α (REα) and oxytocin (OTR) receptor genes, using the 18S and RPS5 as control. Estrogen and oxytocin hormonal assays were performed by radioimunoassay. The results of the mRNAREα and mRNAOTR gene expression differed among gestational periods and tissues. In the endometrium, RNAmREα expression was homogeneous during pregnancy and labor, whereas group 4 presented a higher expression of RNAmOTR. In relation to the myometrium, RNAmREα expression increased in groups 2 and 4, whilst RNAmOTR expression was higher in groups 3 and 4. In the placenta, groups 1 and 2 presented the highest RNAmREα expression and the RNAmOTR expression did not change during pregnancy and parturition. Blood concentration of oxytocin remained constant, while estrogen levels increased from 40 days of gestation to labor. In conclusion, the expression of canine REα and OTR genes differed temporally during pregnancy and parturition in the experimented tissues. Oxytocin blood levels did not influence the receptor gene expression, whereas estrogen concentrations increased at the end of the gestation, possible modulating REα and OTR expression in the canine endometrium, myometrium and placenta.

A homeostase hidro-eletrolítica é controlada por informações sobre volume e a concentração dos íons dos líquidos corporais. Alterações da osmolalidade são detectadas por receptores presentes em diversas regiões do SNC, entre as quais os órgãos circunventriculares. Alterações conformacionais nestas células ativam neurônios localizados nos núcleos paraventricular (PVN) e supra-óptico (SON) do hipotálamo, que secretam ocitocina (OT) e vasopressina (AVP). A osmolalidade plasmática aumenta em conseqüência da alimentação, o que induz a secreção de OT e AVP. Os esteróides ovarianos podem influenciar o balanço de líquidos, modulando sistemas hormonais que regulam tanto o consumo quanto a excreção de água, ou agindo diretamente em neurônios ocitocinérgicos e vasopressinérgicos do hipotálamo. No entanto, esta ação não é ainda entendida. É possível que esses sistemas respondam de forma diferente às variações de estrógeno, talvez por ação direta através de receptores de estrógeno tipo em neurônios OT e AVP do PVN e SON, e por ação indireta através de receptores de estrógeno tipo em órgãos circunventriculares. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a participação do estradiol na modulação da secreção de AVP em resposta ao estímulo osmótico induzido pela realimentação após jejum. Para tanto, foi realizada a determinação da concentração plasmática de AVP, a análise da ativação de neurônios AVP, o conteúdo protéico de ER no PVN e no SON bem como a ativação neuronal pela expressão de FOS e a expressão de ER nos órgãos circunventriculares de animais ovariectomizados tratados com estradiol ou veículo. Os resultados mostram que a realimentação após jejum de 48 horas aumenta a expressão de FOS e a expressão da proteína de ER no PVN e SON, a expressão de FOS nos órgãos circunventriculares estudados e a concentração plasmática de AVP. No entanto, não foi observada diferença significativa entre os tratamentos. Houve uma inibição da expressão de ER nos órgãos circunventriculares estudados. Aparentemente, o estradiol não participa da elaboração de uma resposta frente ao estímulo osmótico induzido pela realimentação e não interfe na ativação de neurônios AVP e na secreção desse hormônio para circulação sanguínea. / The hydroelectrolyte homeostasis is controlled by information on volume and concentration of ions in the body fluids. Osmolality changes are detected by receptors in various regions of the CNS, including the circumventricular organs. Conformational changes of these cells activate neurons located in the paraventricular (PVN) and supraoptic (SON) nucleus of the hypothalamus, which secrete oxytocin (OT) and vasopressin (AVP). Feeding increases the plasma osmolality which induces the secretion of AVP and OT. Ovarian steroids may influence the balance of fluids modulating hormonal systems that regulate both consumption and excretion of water or acting directly on oxytocinergic and vasopressinergic neurons of the hypothalamus. However, this action is not clearly understood. It is possible that these systems respond differently to the estrogen changes perhaps by direct action through estrogen receptor type in AVP and OT neurons of the PVN and SON, and by indirect action through estrogen receptor type in circumventricular organs. The objective of this study was to evaluate the participation of estrogen in the modulation of AVP secretion in response to osmotic stimulus induced by refeeding after fasting. For this purpose, we performed the determination of plasma AVP, the analysis of the activation of AVP neurons, the protein content of ER in the PVN and SON as well as activation by neuronal expression of FOS and the expression of ER in the circumventricular organs in estrogen-primed and -unprimed ovariectomized animals. The results show that refeeding after fasting for 48 hours increases the expression of FOS and ER protein in the PVN and SON, the expression of FOS in the circumventricular organs studied and plasma AVP. However, there was no significant difference between treatments with estrogen or vehicle. There was an inhibition of ER expression in the circumventricular organs studied. Apparently, estrogen does not participate in the preparation of a response to the osmotic stimulus induced by refeeding and it does not interfere in the activation of AVP neurons or the secretion of this hormone to the bloodstream.

O estresse crônico promove diversas alterações no funcionamento de um organismo. O aumento de glicocorticoides pode interferir no estado físico e psicológico de um individuo. Trabalhos recentes correlacionam estresse psicossocial crônico à redução do comprimento dos telômeros de determinadas células. E o estrógeno, além de ser um fator modulador da atividade do sistema de estresse, também pode interferir no comprimento dos telômeros. O objetivo desse trabalho foi verificar se a exposição crônica aos glicocorticóides promove alterações no comprimento dos telômeros de áreas encefálicas envolvidas no controle da atividade do eixo Hipotálamo-Hipófise-Adrenal (HPA) e em respostas comportamentais de ratas, e se o estrógeno pode modular essas alterações. Ratas Wistar ovariectomizadas foram tratadas com cipionato de estradiol (50 ou 100 µg/kg, s.c.) ou óleo, e submetidas à administração de corticosterona 20 mg/Kg ou veículo (salina isotônica 2% Tween 80, s.c.), durante 28 dias. No 25 º dia os animais foram submetidos ao teste do nado forçado, e no 27º dia, ao teste de labirinto em cruz elevado. No dia subsequente ao término do tratamento hormonal, os animais foram eutanasiados para coleta do sangue, cérebro e hipófise. O tratamento com cipionato de estradiol causou: aumento das concentrações plasmáticas de corticosterona e progesterona; redução da expressão de mRNA para CRH, AVP e POMC no PVN; um efeito ansiolítico a avaliado pelo teste do labirinto em cruz elevado; . um efeito depressivo indicado pelo teste de nado forçado; reduziu o tamanho dos na amígdala central e hipocampo dorsal, mas não no PVN. A corticosterona causou: redução da secreção de gonadotrofina; redução da expressão de RNA mensageiro para CRH e POMC e aumento para AVP no PVN; um efeito depressivo indicado pelo teste de nado forçado. O conjunto de resultados mostra que modificação na atividade do eixo HPA e a variação das concentrações plasmáticas de estrógeno podem provocar diversas alterações de ações hormonais, atividades comportamentais e de estrutura do DNA em áreas cerebrais. / Chronic stress promotes several changes in the functioning of an organism. Increased glucocorticoids may interfere with an individual\'s physical and psychological state. Recent works correlate chronic psychosocial stress to the reduction of the telomere length of certain cells. And estrogen, besides being a modulating factor of the activity of the stress system, can also interfere in the length of telomeres. The objective of this study was to verify if chronic exposure to glucocorticoids promotes changes in telomere length of encephalic areas involved in the control of hypothalamic-hypophysis-adrenal (HPA) axis activity and in rat behavioral responses, and whether estrogen can modulate these changes. Ovariectomized Wistar rats were treated with estradiol cypionate (50 or 100 ?g / kg, s.c.) or oil, and given 20 mg / kg corticosterone or vehicle (isotonic saline 2% Tween 80, s.c.) for 28 days. On the 25th day the animals were submitted to the forced swim test, and on the 27th day, the elevated plus maze test. On the day after the end of the hormonal treatment, the animals were euthanized for collection of blood, brain and pituitary gland. Treatment with estradiol cypionate caused: increased corticosterone and progesterone plasma concentrations; reduction of mRNA expression for CRH, AVP and POMC in PVN; an anxiolytic effect as assessed by the elevated plus maze test. A depressive effect indicated by the forced swim test; reduced size in the central amygdala and dorsal hippocampus, but not in PVN. Corticosterone caused: reduction of gonadotrophin secretion; reduction of mRNA expression for CRH and POMC and increase for AVP in PVN; a depressive effect indicated by the forced swim test. The set of results shows that changes in HPA axis activity and variation in plasma estrogen concentrations can lead to several changes in hormonal actions, behavioral activities and DNA structure in brain areas.

Submitted by SARAH MARIA BARNEZE COSTA null (sarahbarneze@hotmail.com) on 2017-04-27T05:04:44Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Final para o Repositório da Unesp - Aluna Sarah Barneze.pdf: 2655925 bytes, checksum: 922eb75a13d7d9ff08b061e4361675e1 (MD5) / Rejected by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo a orientação abaixo: Incluir o número do processo de financiamento nos agradecimentos da dissertação/tese. Corrija esta informação e realize uma nova submissão com o arquivo correto. Agradecemos a compreensão. on 2017-05-03T14:13:29Z (GMT) / Submitted by SARAH MARIA BARNEZE COSTA null (sarahbarneze@hotmail.com) on 2017-05-03T16:11:16Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Final para o Repositório da Unesp - Aluna Sarah Barneze.pdf: 2656758 bytes, checksum: 41757de66dd6c78c3165310b774a5fcb (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-05-03T16:16:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 costa_smb_me_bot.pdf: 2656758 bytes, checksum: 41757de66dd6c78c3165310b774a5fcb (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-03T16:16:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 costa_smb_me_bot.pdf: 2656758 bytes, checksum: 41757de66dd6c78c3165310b774a5fcb (MD5) Previous issue date: 2017-02-16 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A regulação da remodelação óssea ocorre por meio de fatores locais e sistêmicos. Entre os fatores locais estão as citocinas: Receptor Activator of Nuclear Factor Kappa B Ligand (RANKL), presente nos osteoblastos, e Receptor Activator of Nuclear Factor Kappa B (RANK), presente nos osteoclastos, além de outras citocinas como o Tumor Necrosis Factor Alpha (TNF-α) que podem agir no processo de deposição e/ou reabsorção óssea in vivo. Entre os fatores sistêmicos que participam da remodelação óssea estão os hormônios estrógeno (E2) e triiodotironina (T3). O objetivo do trabalho foi verificar a ação do E2, infrafisiológico (simulando a menopausa) e T3, suprafisiológico (simulando hipertireoidismo) em osteoblastos humanos derivados de células troncos mesenquimais (CTMs) na síntese proteica de RANKL e TNF-α. Os osteoblastos foram incubados por 72 horas na presença de E2 em dose fisiológica (E2F/10-8M) e infrafisiológica (E2I/10-9M), e T3 em dose fisiológica (T3F/10-9M) e suprafisiológica (T3S/10-8M), e quantificada a matriz mineralizada óssea e a síntese proteica de RANKL e TNF-α por Western Blot. A análise estatística dos dados foi realizada pelo teste de variância ANOVA complementada pelo teste de Tukey, sendo o nível de significância considerado p<0,05. O tratamento de E2 em dose E2F (1,96± 0,48; p<0,05) e E2I (3,18±0,31; p<0,001) elevou a síntese proteica de RANKL comparado ao controle (C) (1,00±0,32), e de TNF-α em dose de E2F (3,61±0,45; p<0,05) e E2I (2,45±0,07; p<0,05) também aumentou em relação ao C (1,13±0,19). Assim como o E2, o T3 elevou os níveis proteicos de RANKL em T3F (1,18±0,10; p<0,05) e T3S (1,14±0,004; p<0,05) comparado ao controle (1,00±0,02), porém, TNF-α diminui em dose de T3S (0,82±0,09; p<0,05) relacionado ao T3F (1,00±0,09) e C (0,99±0,04). Com isso, E2I diminuiu a matriz mineralizada óssea e aumentou a síntese de ambas as proteínas estudadas, o que nos leva a especulação de que a reabsorção óssea observada na menopausa seja via RANKL e TNF-α. Por outro lado, na mimetização de hipertireoidismo com o T3S, observamos diminuição da matriz mineralizada óssea, supressão da síntese proteica de TNF-α e aumento de RANKL, o que nos leva a inferir que o mecanismo de reabsorção óssea no hipertireoidismo seja via RANKL. / The regulation of bone remodeling is intermediated by local and systemic factors. The cytokines are among the local factors: Receptor Activator of Nuclear Factor Kappa B Ligand (RANKL), present in osteoblasts, and Receptor Activator of Nuclear Factor Kappa B (RANK), present in osteoclasts, in addition to other cytokines such as Tumor Necrosis Factor Alpha (TNF-α) that can act in the process of bone deposition and/or resorption in vivo. Hormones are among the systemic factors involved in bone remodeling, estrogen (E2) and triiodothyronine (T3). The aim of the study was to verify the action of E2, infraphysiological (simulating menopause) and T3, supraphysiological (simulating hyperthyroidism) in human osteoblasts derived from mesenchymal stem cells (CTMs) in the protein synthesis of RANKL and TNF-α. Osteoblasts were incubated during 72 hours in the presence of E2 at physiological dose (E2F/10 -8 M) and infraphysiological (E2I/10 -9 M), and T3 at physiological (T3F/10 -9 M) and supraphysiological (T3S/10-8 M) and quantified the bone mineralized matrix and the protein synthesis of RANKL and TNF-α by Western Blot. Statistical analysis of the data was performed by the ANOVA variance test complemented by the Tukey test, and the significance level was considered p<0.05. The treatment of E2F in E2F dose (1.96 ± 0.48, p<0.05) and E2I (3.18 ± 0.31; p <0.001) increased RANKL protein synthesis compared to control (C) (1.00 ± 0.32), and TNF-α in the dose of E2F (3.61 ± 0.45; p<0.05) and E2I (2.45 ± 0.07; p <0.05) also increased in relation to C (1.13 ± 0.19). As with E2, T3 increased RANKL protein levels in T3F (1.18 ± 0.10, p <0.05) and T3S (1.14 ± 0.004; p <0.05) compared to control (1 , 00 ± 0.02), but TNF-α decreased in dose T3S (0.82 ± 0.09; p <0.05) related to T3F (1.00 ± 0.09) and C (0, 99 ± 0.04). Thus, E2I decreased the bone mineralized matrix and increased the synthesis of both proteins studied which leads to speculation that bone resorption observed at menopause by RANKL and TNF-α pathway. On the other hand, in the mimicry of hyperthyroidism with T3S, we observed a reduction of the bone mineralized matrix, suppression of TNF-α protein synthesis and increase of RANKL, which leads us to infer that the mechanism of action for bone resorption in hyperthyroidism is by RANKL. / FAPESP: 2014/15529-0

As diversas interações hormonais durante e gestação e parto na espécie canina são parcialmente conhecidas. A resposta dos tecidos frente ao estímulo hormonal é dependente da expressão gênica de seus receptores, bem como da concentração local dos hormônios. Desta maneira, o presente estudo apresentou como objetivos: caracterizar a expressão gênica dos receptores de estrógeno e ocitocina no endométrio, miométrio e placenta, correlacionando com as concentrações séricas dos respectivos hormônios durante a gestação e o parto. As cadelas gestantes foram alocadas em 4 grupos de acordo com a idade gestacional: até 20 dias de gestação (grupo 1, n=11), de 20 a 40 dias de gestação (grupo 2, n=12), de 40 a 60 dias de gestação (grupo 3, n=12) e em pródromos do parto (grupo 4, n=11). As cadelas dos grupos 1, 2 e 3 foram submetidas à ovário-histerectomia e as cadelas do grupo 4, à cesariana seguida da ovário-histerectomia. Amostras de endométrio, miométrio e placenta foram colhidas, bem como amostras de sangue para obtenção do soro sangüíneo. A extração do RNA total e a confecção do cDNA das amostras foram realizadas a partir de kits comerciais. As reações da PCR em tempo-real foram realizadas para os genes (RNAm) do receptor do estrógeno &alpha; (RE&alpha;) e receptor da ocitocina (OTR), utilizando o 18S e RPS5 como controles endógenos. As dosagens hormonais foram realizadas por radioimunoensaio. A expressão gênica do RNAmRE&alpha; e RNAmOTR diferiram de acordo com o tecido e período gestacional. No endométrio, a expressão do RNAmRE&alpha; foi constante durante toda a gestação e parto, enquanto que o RNAmOTR foi mais expresso no grupo 4. Em relação ao miométrio, a expressão do RNAmRE&alpha; foi maior nos grupos 2 e 4, já o RNAmOTR foi mais expresso nos grupos 3 e 4. Na placenta, o RNAmRE&alpha; apresentou maior expressão nos grupos 1 e 2, e o RNAmOTR não sofreu mudanças durante a gestação e o parto. As concentrações séricas de ocitocina mantiveram-se constantes, enquanto os níveis estrogênicos aumentaram a partir de 40 dias de gestação até o início do parto. Conclui-se que a expressão gênica dos RE&alpha; e OTR diferem de maneira temporal durante a gestação e o parto nos tecidos avaliados e as concentrações séricas de ocitocina não interferem na expressão gênica de tais receptores, enquanto os níveis de estrógeno elevam-se ao final da gestação, sendo possível atribuir a tal perfil a diferente modulação dos RE&alpha; e OTR nos tecidos estudados. / Several hormone interactions during pregnancy and parturition in the canine species are still unknown. Tissue response to hormonal stimulation is dependent on the expression of its receptor gene, as well as of the local hormonal concentration. Hence, the present study aimed to characterize the expression of the canine estrogen and oxytocin receptor genes in the endometrium, myometrium and placenta and its correlation with blood levels of the referred hormones during pregnancy and parturition. Pregnant bitches were allocated into 4 groups according to the gestational period: up to 20 days of pregnancy (Group 1, n=11), from 20 to 40 days of pregnancy (Group 2, n=12), from 40 to 60 days of pregnancy (Group 3, n=12) and in the early stage of labor (Group 4, n=11). Bitches from groups 1, 2 and 3 were subjected to ovaryhisterectomy and bitches from group 4 were submitted to cesarian section followed by ovaryhistectomy. Endometrium, myometrium and placenta samples were colleted, as well as blood samples. Extraction of the total RNA and cDNA synthesis were accomplished through commercial kits. The real-time PCR reactions were performed for the estrogen-&alpha; (RE&alpha;) and oxytocin (OTR) receptor genes, using the 18S and RPS5 as control. Estrogen and oxytocin hormonal assays were performed by radioimunoassay. The results of the mRNARE&alpha; and mRNAOTR gene expression differed among gestational periods and tissues. In the endometrium, RNAmRE&alpha; expression was homogeneous during pregnancy and labor, whereas group 4 presented a higher expression of RNAmOTR. In relation to the myometrium, RNAmRE&alpha; expression increased in groups 2 and 4, whilst RNAmOTR expression was higher in groups 3 and 4. In the placenta, groups 1 and 2 presented the highest RNAmRE&alpha; expression and the RNAmOTR expression did not change during pregnancy and parturition. Blood concentration of oxytocin remained constant, while estrogen levels increased from 40 days of gestation to labor. In conclusion, the expression of canine RE&alpha; and OTR genes differed temporally during pregnancy and parturition in the experimented tissues. Oxytocin blood levels did not influence the receptor gene expression, whereas estrogen concentrations increased at the end of the gestation, possible modulating RE&alpha; and OTR expression in the canine endometrium, myometrium and placenta.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005-02-16Bitstream added on 2014-06-13T20:45:00Z : No. of bitstreams: 1 traversomartinez_ae_dr_arafo.pdf: 265959 bytes, checksum: 4d4ed4b0dacd2d55f96b02084a0d8a78 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / O estudo teve como objetivo avaliar em mulheres menopáusicas, com e sem reposição hormonal, possíveis diferenças na resposta inicial ao tratamento periodontal básico, assim como determinar se a reposição hormonal com estrógeno influencia na estabilidade das condições clínicas periodontais após tratamento periodontal e terapia de manutenção. Foram selecionadas 38 mulheres na fase da menopausa com periodontites crônica, sendo divididas em dois grupos segundo seus níveis plasmáticos de estrógeno: 18 mulheres no grupo estrógeno-suficiente (>40 pg/ml) e 20 mulheres no grupo estrógeno-deficiente (<30 pg/ml). Todas as pacientes fizeram exame de sangue para avaliar os níveis plasmáticos de 17-beta estradiol, no início e no final do estudo, também foi feito o exame dos níveis de FSH só no início do estudo, para comprovação da menopausa. Os parâmetros clínicos de avaliação foram: índice de placa visível, índice de sangramento marginal, sangramento à sondagem, profundidade de sondagem e nível de inserção clínico. Um operador calibrado (Kappa 0.711) e cego para os grupos experimentais realizou todas as avaliações. Todos os parâmetros clínicos foram avaliados em 6 momentos: inicial, reavaliação (após 40 dias do tratamento básico), avaliações sucessivas a cada 3, 6 , 9, e 12 meses do final do tratamento. O tratamento periodontal básico foi realizado por dois pesquisadores segundo a necessidade individual de cada paciente. O grupo estrógeno-suficiente apresentou maior proporção de sítios com placa visível em todos os períodos de avaliação. Após sessão inicial houve reduções significativas dos níveis de placa visível tanto para o grupo estrógeno-deficiente como para o grupo estrógeno-suficiente. Em relação ao sangramento (marginal e a sondagem) ambos os grupos apresentaram uma tendência de redução dos níveis de sangramento... . / The aim of the present study was investigated if estrogen replacement therapy influences the response to the active periodontal therapy (scaling and root planning), or stability of clinical periodontal conditions in women during menopause. Thirty-eight menopausal women with chronic periodontitis were recruited and divided in two groups according serum estrogen levels: 1) estrogen-sufficient (> 40 pg/ml, n = 18) or 2) estrogen-deficient (< 30 pg/ml, n = 20). At the beginning and at the end of the study the women suffer blood exam to evaluate the serum levels of 17-ß-estradiol, and at the beginning of the study the FSH levels was examined to prove the menopausal period. Clinical measurements for evaluation were: visible plaque, marginal bleeding, bleeding on probing, probing depths and clinical attachment level. An examiner (Kappa 0.711), blind to the experimental groups, made the evaluations. Clinical measurements were taken in 6 times: initial, reevaluation (40 days after the basic treatment) and successive evaluations in each 3, 6, 9 and 12 months from the final treatment. The active periodontal therapy was made for two researchers according to the individual needs of each patient. The estrogen-sufficient group presented bigger proportions of supragingival plaque in all periods of evaluation. After the first section there was significant reduction of supragingival plaque for both estrogen-sufficient and estrogen-deficient groups. Concern about the bleeding (marginal or on probing) both groups presented a tendency to reductions on bleeding levels after the periodontal treatment, however the estrogen-deficient group presented greater percentiles of visible plaque sites in all periods after initial evaluation. The clinical attachment level was different between the groups... (Complete abstract, click electronic address below).

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:06Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-09-19Bitstream added on 2014-06-13T20:45:59Z : No. of bitstreams: 1 souza_jbg_dr_araiq.pdf: 923971 bytes, checksum: 6085d4ee0078ecc2d198c1ff65ff5cdd (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Os antibióticos, oxitetraciclina, tetraciclina, clorotetraciclina e doxiciclina, os estrógenos naturais, estrona, 17 β-estradiol, e o sintético 17 α-etiniletradiol tornaram-se objetos de estudo nos últimos anos devido aos impactos ambientais que podem causar, mesmo estando presentes em ambientes aquáticos em baixas concentrações provocando alterações biológicas através de diversos mecanismos de ação. Por este motivo, este trabalho teve como objetivo validar métodos para análise dessas substâncias em água superficial, água subterrânea e esgoto sanitário tratado. O método validado para análise de antibióticos baseou-se em cromatografia líquida com detector ultravioleta, foi utilizada extração em fase sólida com cartuchos Oásis-HLB, obtendo-se limites de quantificação de 6,5 ng L-1 para a oxitetraciclina e tetraciclina e 15 ng L-1 para clorotetraciclina e doxiciclina, em água superficial e água subterrânea, não foi possível a validação do método para esgoto sanitário tratado. A cromatografia líquida com detecção por fluorescência foi utilizada para a determinação dos estrógenos. A otimização do preparo das amostras foi obtida utilizando extração em fase sólida com cartuchos C18, o limite de quantificação para a estrona foi de 0,6 μg L-1 e de 6,25 ng L-1 para o 17 β-estradiol e 17 α-etinilestradiol, para as matrizes de água superficial, subterrânea e esgotos sanitário tratado. Os resultados referentes à validação do método mostraram níveis aceitáveis para a recuperação (entre 76 e 118%) e coeficiente de variação (entre 1 e 13%), o que atesta a exatidão e a precisão do mesmo para os níveis de concentração estudados, para todas as matrizes. No estudo em Campo Grande, as amostras de água superficial foram coletadas nos rios Lageado e Guariroba próximo aos pontos de captação do sistema de abastecimento público... / The antibiotics, oxytetracycline, tetracycline, chlortetracycline and doxycycline and the strogenes: naturals, estrone, 17β-estradiol, and the sinthetic 17 α-ethinylestradiol becaome object of study in the last years due to environmental impacts and serious health problems that they can cause, even when they are present in aquatic environment at low concentrations provoking biological changes though the several mechanisms of action. For this reason, this work had as goal certificate methods to analyze these chemicals in superficial water, subterranean water and treated sanitary drainage. The certificate method to antibiotic analyzes was based in liquid chromatography with ultraviolet detector, it was used extraction in solid phase with cartridge Oasis-HLB, obtaining with that limits to quantification of 6,5ng L-1 to the oxytetracycline and tetracycline and 15 ng L-1 and 6,25 ng L-1 to the 17 β-estradiol and 17 α-etinilestradiol, it was not possible the method validation for treated sanitary drainage. The liquid chromatographic with fluorescence detection was used to estrogens determination. The optimization os samples prepare was obtained using ecxtraction in solid phase with C18 cartridge, the limit of quantification to the estrone was 0,6 μg L-1 and 6,25 ng L-1 to the 17 β-estradiol and 17 α- ethinylestradiol, to the matrixes of subterranean water and treat sanitary drainage. In Campo Grande resource, the samples of capitation of superficial water were collected at the rivers Lageado and Guariroba next to the capitation places of public supplying system. Subterranean water samples and treated sanitary drainage were obtained at the campus of Universidade Federal de Mato Grosso do Sul. The results referring to the validation of the method shown acceptable levels to the recover (between 76 to 118%) and the variation coefficient (between 1 to 13%), these show... (Complete abstract click electronic access below)