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Previous issue date: 2008-09-04 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Paracoccidioides brasiliensis, an important human pathogen causative of
paracoccidioidomycosis (PCM), a systemic mycosis with broad distribution in Latin America.
Adhesion to and invasion of host cells are essential steps involved in the infection and
dissemination of pathogens. Furthermore, pathogens use their surface molecules to bind to
host extracellular matrix components to establish infection. An adhesin of P. brasiliensiswas
isolated from two dimensional electrophoresis and characterized. Peptides obtained by partial
sequencing of the isolated protein, which presenteda molecular mass of 29 kDa and pI 5.8,
were subjected to sequence analysis of their amino acids, that revealed strong homology to
triose phosphate isomerase (TPI) from several sources. The complete cDNA and gene
encoding TPI of P. brasiliensis (PbTPI) were characterized and both contained an open
reading frame predicted to encode a 249 amino acid protein that presented all the peptides
characterized in the native PbTPI. The complete coding PbTPI cDNA was cloned and over
expressed in Escherichia coli host. The purified recombinant TPI was used to produce
polyclonal antibody in rabbit. By immunoelectron microscopy and Western blot analysis, TPI
was detected in the cell wall and the cytoplasm of the yeast phase of P. brasiliensis. The
expression of PbTPI was analyzed in transition from mycelia to yeast phase. The native
PbTPI is preferentially expressed in the yeast parasitic phase of P. brasiliensis. The
recombinant PbTPI was found to bind to laminin and fibronectin in ligand far-Western blot
assays. TPI binds preferentially to laminin, as determined by peptide inhibition assays. Of
special note, the treatment of P. brasiliensisyeast cells with anti-PbTPI polyclonal antibody
and the incubation of pneumocytes and VERO cells with the recombinant protein promoted
inhibition of adherence and internalization of P. brasiliensisto those in vitrocultured cells.
These observations indicate that TPI could be contribute to the adhesion of the microorganism
to host tissues and to the dissemination of infection. / Paracoccidioides brasiliensis é um importante patógeno humano que causa a
paracoccidioidomicose (PCM), uma micose sistêmica com ampla distribuição na América
Latina. A adesão e a invasão de células são eventos essenciais envolvidos na infecção e
disseminação do patógeno. Para isso, patógenos utilizam suas moléculas de superfície para se
ligar a componentes da matriz extracelular e estabelecer a infecção. Uma proteína antigênica
de P. brasiliensisfoi isolada a partir do gel de eletroforese bidimensional de proteínas totais
do fungo e caracterizada. Peptídeos obtidos por sequenciamento parcial da proteína de 29 kDa
e pI 5.8 mostraram homologia com triose fosfato isomerase (TPI) de diversos organismos. O
cDNA e o gene completos que codificam para TPI de P. brasiliensis (PbTPI) foram
caracterizados, e ambos contém uma ORF que codifica para uma proteína com 249
aminoácidos que apresenta todos os peptídeos caracterizados na PbTPI nativa. O cDNA
completo que codifica para PbTPI foi expresso em Escherichia coli. A proteína recombinante
TPI foi utilizada para produção de anticorpo policlonal em coelho. Através de imunomicroscopia de transmissão eletrônica e análises por Western blotting, foi detectada a
presença da TPI, na parede celular de leveduras de P. brasiliensis e no citoplasma. A
expressão da PbTPI foi analisada na transição das fases de micélio para levedura. A PbTPI
nativa está preferencialmente expressa na fase parasitária de P. brasiliensis. A PbTPI
recombinante foi capaz de se ligar a laminina e fibronectina em ensaios de Western blotting
de afinidade. PbTPI se liga preferencialmente a laminina, como foi determinado por ensaio de
inibição com peptídeos sintéticos. Uma observação importante, é que tanto o tratamento de P.
brasiliensiscom anticorpo anti-PbTPI, quanto de pneumócitos e células VERO tratados com a
TPI recombinante, promoveram considerável inibição da aderência e internalização de P.
brasiliensisàs células cultivadas in vitro. Essas observações indicam que a TPI possivelmente
contribui para a adesão do microrganismo aos tecidos do hospedeiro e para a disseminação da
infecção.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.bc.ufg.br:tede/4003 |
| Date | 04 September 2008 |
| Creators | Pereira, Luiz Augusto |
| Contributors | Soares, Célia Maria de Almeida, Ulhoa, Cirano José, Campos, Ivan Torres Nicolau, Izaac, Silvia Maria Salem, Giannini, Maria José Soares Mendes, Soares, Célia Maria de Almeida |
| Publisher | Universidade Federal de Goiás, Programa de Pós-graduação em Medicina Tropical e Saúde Publica (IPTSP), UFG, Brasil, Instituto de Patologia Tropical e Saúde Pública - IPTSP (RG) |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFG, instname:Universidade Federal de Goiás, instacron:UFG |
| Rights | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 6085308344741430434, 600, 600, 600, 600, -7769011444564556288, -3854583469976220812, 2075167498588264571 |
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