Neste trabalho, foram preparados inicialmente dez diferentes extratos brutos etanólicos de diferentes espécies vegetais da região da mata atlântica mineira das proximidades do município de Alfenas-MG. Após a padronização do teste antichagásico in vitro contra as formas epimastigotas da cepa Y, e utilizando-se o método colorimétrico com solução de resazurina, todos os extratos foram submetidos ao bioensaio, o que permitiu a determinação do extrato de maior potencial anti-epimastigota como sendo da Miconia willdenowii, da família Melastomataceae. Tal extrato, foi posteriormente submetido a particionamento por extração líquido-líquido com hexano, acetato de etila e uma mistura etanol:água (1:3), o que permitiu separar compostos em grupos por diferença de polaridade. As 3 frações obtidas foram novamente submetidas ao teste biológico, para determinação do grupo de compostos de maior atividade. A fração acetato foi assim determinada como a de maior potencial contra as formas epimastigotas dos parasitas da doença de Chagas, sendo esta submetida ao fracionamento por cromatografia em coluna, obtendo-se assim ao final, um total de 12 subfrações. Estas foram na sequência submetidas também ao teste in vitro, determinando-se as de maior potencial contra os epimastigotas. No geral, três destas subfrações apresentaram maior atividade antichagásica (A2, A3 e A4), as quais foram analisadas por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) por conseguinte, a partir das quais puderam ser isoladas dois derivados de hidroquinonas, já relatadas para outras espécies de Miconia: miconidina e primina. As duas substâncias tiveram suas estruturas identificadas por espectroscopia de RMN e também espectrometria de massas, e confirmadas com dados da literatura. A quantificação das duas substâncias isoladas foi feita para cada amostra de M. willdenowii (extrato bruto, fração acetato e subfrações), o que permitiu deduzir que a presença de tais compostos, nestas amostras, é a principal responsável pela atividade tripanocida apresentada pelas mesmas. O bioensaio anti-T. cruzi realizado também para os compostos isolados permitiu observar o alto potencial tripanocida frente a forma epimastigota do parasita, apresentando valores de CE50 inferiores até mesmo que a droga padrão de referência, o benznidazol. O teste de citotoxicidade in vitro com fibroblastos derivados de pele humana normal também com a miconidina e primina, isoladas de M. willdenowii, demonstrou que estas só apresentavam efeito adverso a partir de 50 µg/mL (dentre as concentrações testadas), valor este superior ao CE50 apresentado pelas mesmas, sugerindo o alto potencial efetivo de utilização destes compostos na terapia da doença de Chagas. / In this work, ten different ethanol crude extracts were prepared from different plant species of rainforest nearby the city of Alfenas-MG. After standardization of in vitro antichagasical test against T. cruzi (Y strain) epimastigote form, and using colorimetric method with resazurin solution, all extracts had the activity evaluated and the most active was Miconia willdenowii extract, from the Melastomataceae family. This extract was subsequently subjected to partitioning by liquid-liquid extraction using hexane, ethyl acetate and ethanol:water (1:3) mixture, allowing the separation of compounds in groups by difference in polarity. The 3 fractions obtained were submitted to bioguided assay in order to determine the most active. The ethyl acetate fraction displaying the higher potential against epimastigote form of Chagas’ disease parasites was extensively purified under CC conditions. In the end, this process provided a total of 12 subfractions. All subfractions were subjected to bioguided assay, determining those with the greatest potential against epimastigote. Overall, three subfractions showed antichagasical activity (A2, A3 and A4), which were analyzed by high performance liquid chromatography (HPLC), and two hydroquinones derivatives previously reported for other species Miconia: miconidin and primin, could be isolated. Both compounds had their structures identified by NMR spectroscopy, mass spectrometry and confirmed by database comparison in the literature. The quantification of these two compounds was made for each sample of M. willdenowii (crude extract, acetate fraction and subfractions), which allowed deducing that their presence or absence is related to trypanocidal activity. The anti-T. cruzi bioassay, when performed to the isolated compounds, allowed observing higher trypanocidal potential than the reference drug (benznidazole). The in vitro cytotoxicity assay for miconidin and primin, using normal human skin-derived fibroblasts, showed that they only present cytotoxicity over 50 µg/mL, in which is higher than the EC50 presented by these compounds in the trypanocidal assay, suggesting high potential for effective use of these compounds as therapeutical alternative for Chagas’ disease after further studies. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:10.254.254.39:tede/879 |
| Date | 31 July 2015 |
| Creators | ROSA, Welton |
| Contributors | SOARES, Marisi Gomes, http://lattes.cnpq.br/4121936683722215, AMBROZIN, Alessandra Regina Pepe, SARTORELLI, Patrícia |
| Publisher | Universidade Federal de Alfenas, Instituto de Química, Brasil, UNIFAL-MG, Programa de Pós-Graduação em Química |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UNIFAL, instname:Universidade Federal de Alfenas, instacron:UNIFAL |
| Rights | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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