PONTES, Vânia Maria Oliveira de. Monitoramento de reações adversas em pacientes chagásicos com benzonidazol. 2007. 128 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Farmacêuticas) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Fortaleza, 2007. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-01-08T12:25:05Z No. of bitstreams: 1 2007_dis_vmopontes.pdf: 777828 bytes, checksum: e52a6ae419dd6a6a78feb3e8d108ce99 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes(erikaleitefernandes@gmail.com) on 2013-01-23T11:40:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_dis_vmopontes.pdf: 777828 bytes, checksum: e52a6ae419dd6a6a78feb3e8d108ce99 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-01-23T11:40:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_dis_vmopontes.pdf: 777828 bytes, checksum: e52a6ae419dd6a6a78feb3e8d108ce99 (MD5) Previous issue date: 2007 / Chagas’ disease, caused by protozoan Trypanosoma cruzi, still represents one of the most important endemics diseases in American continent and has been diagnosed from south of United States to South of Argentina. In Brazil, benznidazole is the only drug currently available for specific treatment of this disease, but its safe clinical application demands attention for causing adverse reactions, mainly in adults patients. OBJECTIVE: To monitor the occurrence of adverse reactions in chagasic patients treated with benznidazole in Fortaleza, Ceará. METHODOLOGY: Descriptive longitudinal prospective study of evaluation of adverse reactions occurrence during chagasic patient treatment with benznidazole. Thirty two chronics chagasic patients were included in the study since january of 2005 to june of 2006. Data were collected through questionnaire, interview and laboratorial exams results interpretation. Blood samples were collected before, during (30 days) and after treatment with benznidazole (60 days). Biochemical, hematological and serologic tests were made. The suspects Adverse Drug Reactions (ADR) were appraised for Ceará Pharmacovigilance Centre (CEFACE). In the statistical analysis were used the SPSS 13.0 and t - Student test, considering the significance level p < 0,05. RESULTS: Twenty signs and symptoms were recorded by 28 (87,5%) patients. The most frequent symptoms were: Pruritus (57%), paresthesia (46%) and headache (46%). Most of reactions were classified according to causality and severity as probable (60,7%) and slight (73%), respectively. Of the 28 patients that presented undesirable effects, 8 (29%) had treatment withdrew and the most frequent reactions were paresthesia (87,5%) and cutaneous rash (62,5%). In relation to laboratorial tests, the alteration most meaningful was eosinophylia in 6 (18%) patients. Although not significant, there was an expressive increase of the values of the transaminases levels in 3 (9,4%) patients. After treatment, the majority of symptoms and laboratorial tests results returned to the previous levels prior to medication. CONCLUSION: Adverse reactions are frequent in patients treated with benznidazole. Clinical pharmacists can help patients to deal with these problems contributing for better therapeutic results. Keywords: Chagas Disease – Therapy; Benzonidazole; Trypanosomicides - adverse effects. / A doença de Chagas, causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi, ainda representa uma das mais importantes doenças endêmicas do continente Americano e tem sido diagnosticada desde o sul dos Estados Unidos até o sul da Argentina. No Brasil, o benzonidazol é a única droga atualmente disponível para o tratamento específico desta enfermidade, porém a aplicação clínica segura do benzonidazol demanda atenção por causar várias reações adversas, principalmente em pacientes adultos. OBJETIVO: Monitorar a ocorrência de reações adversas em pacientes chagásicos em tratamento com benzonidazol em Fortaleza - Ceará. METODOLOGIA: Estudo descritivo longitudinal prospectivo de avaliação da ocorrência de reações adversas durante o tratamento de pacientes chagásicos com benzonidazol. Foram incluídos no estudo, no período de 02 de janeiro de 2005 a 30 de junho de 2006, 32 pacientes chagásicos crônicos. Os dados foram coletados através de questionário, entrevista e interpretação de resultados de exames laboratoriais. As amostras de sangue foram coletadas antes, durante (30 dias) e ao final do tratamento com BZ (60 dias). Os exames laboratoriais foram bioquímicos (AST, ALT, uréia e creatinina); hematológicos (hemograma completo e contagem de plaquetas) e sorológicos (ELISA). As suspeitas de Reações Adversas a Medicamento (RAM) foram avaliadas pelo Centro de Farmacovigilância do Ceará (CEFACE). Na análise estatística foi utilizado o programa SPSS 13 e realizado o teste t - Student considerando nível de significância p < 0,05. RESULTADOS: Foram registrados 20 sinais e sintomas por 28 (87,5%) pacientes. Os mais freqüentes foram: prurido (57%), parestesia (46%) e cefaléia (46%). A maioria das reações foi classificada em relação à causalidade como provável (60,7%) e quanto à severidade como leve (73%). Dos 28 pacientes que apresentaram efeitos indesejáveis durante o tratamento, 8 (29%) tiveram o tratamento suspenso e as reações mais freqüentes foram parestesia (87,5%) e rash cutâneo (62,5%). A respeito dos resultados dos exames laboratoriais, a alteração mais significativa foi eosinofilia em 6 (18%) pacientes. Embora não significativo, houve um aumento expressivo dos valores das transaminases em 3 (9,4%) pacientes. Após o tratamento, houve remissão dos sintomas e em relação às alterações laboratoriais houve regressão dos valores aos níveis anteriores ao tratamento. CONCLUSÃO: As reações adversas foram freqüentes em pacientes tratados com benzonidazol. O farmacêutico clínico pode ajudar os pacientes a lidar melhor com estes problemas, contribuindo para o sucesso dos resultados terapêuticos.

Made available in DSpace on 2015-05-19T13:30:31Z (GMT). No. of bitstreams: 2 185.pdf: 4365385 bytes, checksum: 6c364e4e8e6f1c7012d8d4bc56993d0c (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2013 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil / A doença de Chagas, causada pelo protozoário hemoflagelado Trypanosoma cruzi, consiste em um grave problema de saúde pública na América Latina, com cerca de 7 a 8 milhões de pessoas infectadas. O benznidazol é atualmente o único fármaco disponível para o tratamento, apresentando boa atividade na fase aguda, mas com eficácia questionada na fase crônica, além de apresentar severos efeitos colaterais e longo período de tratamento. Tendo em vista a sua fácil síntese e baixo custo, adutos aromáticos oriundos da reação Morita-Baylis-Hillman têm sido considerados promissores como quimioterápicos. Neste sentido, foi avaliada a atividade tripanocida e citotóxica de seis adutos Morita-Baylis-Hillman. Para analisar possíveis efeitos dos adutos sobre estruturas específicas do protozoário foi utilizado a microscopia confocal a laser, através da marcação com Rodamina 123, MitoSOXT, Laranja de Acridina e Kit Live/Dead(R). As alterações morfológicas em parasitas submetidos ao tratamento foram acompanhadas por microscopia eletrônica de transmissão. Nossos resultados mostraram que todos os compostos foram capazes de inibir o crescimento de formas epimastigotas e causaram uma diminuição da viabilidade em formas tripomastigotas, apresentando uma moderada citotoxicidade para células de mamíferos. Os adutos MBH1, MBH2, MBH5 e MBH7 também foram efetivos em inibir a infecção de macrófagos e diminuir a viabilidade das formas amastigotas. Os compostos não foram capazes de alterar os níveis de produção do óxido nítrico em macrófagos. Análises pela microscopia confocal e microscopia eletrônica de transmissão (MET) apontam a mitocôndria como principal alvo intracelular destes compostos. Alterações compatíveis com a perda da viabilidade e morte celular por necrose e autofagia foram observadas por MET. Os resultados obtidos neste trabalho colocam os adutos Morita -Baylis-Hillman em evidência como agentes promissores para o tratamento da tripanossomíase americana

Neste trabalho, foram preparados inicialmente dez diferentes extratos brutos etanólicos de diferentes espécies vegetais da região da mata atlântica mineira das proximidades do município de Alfenas-MG. Após a padronização do teste antichagásico in vitro contra as formas epimastigotas da cepa Y, e utilizando-se o método colorimétrico com solução de resazurina, todos os extratos foram submetidos ao bioensaio, o que permitiu a determinação do extrato de maior potencial anti-epimastigota como sendo da Miconia willdenowii, da família Melastomataceae. Tal extrato, foi posteriormente submetido a particionamento por extração líquido-líquido com hexano, acetato de etila e uma mistura etanol:água (1:3), o que permitiu separar compostos em grupos por diferença de polaridade. As 3 frações obtidas foram novamente submetidas ao teste biológico, para determinação do grupo de compostos de maior atividade. A fração acetato foi assim determinada como a de maior potencial contra as formas epimastigotas dos parasitas da doença de Chagas, sendo esta submetida ao fracionamento por cromatografia em coluna, obtendo-se assim ao final, um total de 12 subfrações. Estas foram na sequência submetidas também ao teste in vitro, determinando-se as de maior potencial contra os epimastigotas. No geral, três destas subfrações apresentaram maior atividade antichagásica (A2, A3 e A4), as quais foram analisadas por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) por conseguinte, a partir das quais puderam ser isoladas dois derivados de hidroquinonas, já relatadas para outras espécies de Miconia: miconidina e primina. As duas substâncias tiveram suas estruturas identificadas por espectroscopia de RMN e também espectrometria de massas, e confirmadas com dados da literatura. A quantificação das duas substâncias isoladas foi feita para cada amostra de M. willdenowii (extrato bruto, fração acetato e subfrações), o que permitiu deduzir que a presença de tais compostos, nestas amostras, é a principal responsável pela atividade tripanocida apresentada pelas mesmas. O bioensaio anti-T. cruzi realizado também para os compostos isolados permitiu observar o alto potencial tripanocida frente a forma epimastigota do parasita, apresentando valores de CE50 inferiores até mesmo que a droga padrão de referência, o benznidazol. O teste de citotoxicidade in vitro com fibroblastos derivados de pele humana normal também com a miconidina e primina, isoladas de M. willdenowii, demonstrou que estas só apresentavam efeito adverso a partir de 50 µg/mL (dentre as concentrações testadas), valor este superior ao CE50 apresentado pelas mesmas, sugerindo o alto potencial efetivo de utilização destes compostos na terapia da doença de Chagas. / In this work, ten different ethanol crude extracts were prepared from different plant species of rainforest nearby the city of Alfenas-MG. After standardization of in vitro antichagasical test against T. cruzi (Y strain) epimastigote form, and using colorimetric method with resazurin solution, all extracts had the activity evaluated and the most active was Miconia willdenowii extract, from the Melastomataceae family. This extract was subsequently subjected to partitioning by liquid-liquid extraction using hexane, ethyl acetate and ethanol:water (1:3) mixture, allowing the separation of compounds in groups by difference in polarity. The 3 fractions obtained were submitted to bioguided assay in order to determine the most active. The ethyl acetate fraction displaying the higher potential against epimastigote form of Chagas’ disease parasites was extensively purified under CC conditions. In the end, this process provided a total of 12 subfractions. All subfractions were subjected to bioguided assay, determining those with the greatest potential against epimastigote. Overall, three subfractions showed antichagasical activity (A2, A3 and A4), which were analyzed by high performance liquid chromatography (HPLC), and two hydroquinones derivatives previously reported for other species Miconia: miconidin and primin, could be isolated. Both compounds had their structures identified by NMR spectroscopy, mass spectrometry and confirmed by database comparison in the literature. The quantification of these two compounds was made for each sample of M. willdenowii (crude extract, acetate fraction and subfractions), which allowed deducing that their presence or absence is related to trypanocidal activity. The anti-T. cruzi bioassay, when performed to the isolated compounds, allowed observing higher trypanocidal potential than the reference drug (benznidazole). The in vitro cytotoxicity assay for miconidin and primin, using normal human skin-derived fibroblasts, showed that they only present cytotoxicity over 50 µg/mL, in which is higher than the EC50 presented by these compounds in the trypanocidal assay, suggesting high potential for effective use of these compounds as therapeutical alternative for Chagas’ disease after further studies. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Os produtos naturais bioativos são fontes em potencial para o tratamento de diversas doenças associadas a altos índices de mortalidade na população mundial como, por exemplo, os cânceres e doenças infecciosas. Alguns fenilpropanoides, em especial o eugenol, o qual está presente nos óleos essenciais de diversas espécies vegetais, demonstram atividades relevantes como antimicrobianos e antiparasitários. Além disso, há diversos relatos científicos que demonstram o potencial antiproliferativo do eugenol frente a linhagens distintas de células tumorais. Da mesma forma, diversas substâncias que contêm o grupo funcional sulfonamida foram citadas como bioativa, em vista de apresentarem efeitos biológicos importantes, como antibacteriano, antifúngico, antiparasitário e antitumoral. Buscando a obtenção de novos produtos bioativos e em vista das ações biológicas relacionadas ao uso do eugenol e de sulfonamidas, empregou-se nesse trabalho a estratégia de hibridação molecular para o planejamento de substâncias inéditas que contemplassem resíduos estruturais do eugenol ou diidroeugenol e uma subunidade sulfonamídica. As oito substâncias finais propostas foram obtidas com sucesso a partir da condensação do cloreto de p-acetamidobenzenossulfonila com derivados orto e meta-aminofenóis, originados por sua vez de derivados nitrados do eugenol ou de seu análogo, diidroeugenol. Os produtos tiveram suas identidades confirmadas por meio de espectroscopia no infravermelho, de ressonância magnética nuclear e de massas. Na sequência, foram avaliados como antimicrobianos contra bactérias Gram-positivas (Staphylococcus aureus, Bacillus cereus e Enterococcus faecalis) e Gram-negativas (Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa e Salmonella typhimurium) e contra espécies patogênicas ou oportunistas de Candida (C. albicans, C. tropicalis, C. krusei, C. glabrata e C. parapsilosis). Avaliou-se, ainda, a atividade anti-Trypanosoma cruzi em formas epimastigotas do parasito e também a atividade antiproliferativa contra linhagens celulares derivadas de cânceres humanos (A549, HepG2, HT144 e MCF7). Três derivados sulfonamídicos (7a, 7b e 7c) apresentaram atividade antibacteriana com valores de CI50 na faixa de 299,40 a 297,62 μM, frente Bacillus cereus e Staphylococcus aureus. Seis derivados sulfonamídicos (6a, 6c, 7a, 7b, 7c e 7d) exibiram atividade antifúngica com valores de CI50 entre 664,89 a 748,50 μM, frente C. albicans, C. krusei, C. glabrata e C. parapsilosis. Na avaliação da atividade tripanocida, todos os oito derivados sulfonamídicos mostraram-se ativos com valores de CI50 na faixa de 217,26 a 420,21 μM. Já na avaliação da atividade antiproliferativa, apenas três derivados (6b, 6d e 7a) exibiram atividade promissora frente a linhagem de adenocarcinoma de mama (MCF7) com valores de CI50 entre 116,60 a 164,90 μM. Mesmo que os valores de CI50 encontrados nestes ensaios biológicos sejam maiores que aqueles obtidos para os fármacos referência, é importante destacar que, em alguns, casos as substâncias híbridas propostas resultaram em produtos menos tóxicos e com maior atividade que seus precursores fenilpropanoides. Por conseguinte, representam moléculas inéditas passíveis de alteração estrutural para otimização de atividade. / Bioactive natural products are potential sources for the treatment of various diseases associated with high mortality rates in the world population, such as cancers and infectious diseases. Some phenylpropanoids, especially eugenol, which are present in the essential oils of several plant species, demonstrate relevant activities as antimicrobials and antiparasitics. In addition, there are several scientific reports that demonstrate the antiproliferative potential of eugenol against distinct lines of tumor cells. Likewise, several substances containing the sulfonamide functional group have been cited as responsible for important biological effects such as antibacterial, antifungal, antiparasitic and anticancer. In order to obtain new bioactive products and in view of the biological actions related to the use of eugenol and sulfonamides, it was proposed herein the use of molecular hybridization strategy in the design of new substances that contained structural motifs of eugenol or dihydroeugenol and a sulfonamide subunit. The eight final proposed substances were successfully obtained from the condensation of p-acetamidobenzenesulfonyl chloride with ortho and meta-aminophenols derivatives, which came from nitrated derivatives of eugenol or dihydroeugenol. The products checked by infrared spectroscopy, nuclear magnetic resonance and mass spectroscopy. They were evaluated as antimicrobials against Gram-positive (Staphylococcus aureus, Bacillus cereus and Enterococcus faecalis) and Gram-negative bacteria (Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa and Salmonella typhimurium) and against pathogenic or opportunistic species of Candida (C. albicans, C. tropicalis, C. krusei, C. glabrata and C. parapsilosis). Anti-Trypanosoma cruzi activity in epimastigote forms of the parasite and antiproliferative activity against cell lines derived from human cancers (A549, HepG2, HT144 and MCF7) were also evaluated. Three sulfonamides derivatives (7a, 7b and 7c) presented antibacterial activity with IC50 values ranging from 299.40 to 297.62 μM, against Bacillus cereus and Staphylococcus aureus. Six sulfonamides derivatives (6a, 6c, 7a, 7b, 7c and 7d) exhibited antifungal activity with IC50 values between 664.89 and 748.50 μM, against C. albicans, C. krusei, C. glabrata and C. parapsilosis. In the evaluation of trypanocidal activity, all eight sulfonamides derivatives were active with IC50 values in the range of 217.26 to 420.21 μM. In the evaluation of antiproliferative activity, only three derivatives (6b, 6d and 7a) exhibited promising activity against the breast adenocarcinoma line (MCF7) with IC50 values between 116.60 and 164.90 μM. Even though the IC50 values found in these biological assays are higher than those obtained for the reference drugs, it is important to note that in some cases the proposed hybrid substances have resulted in less toxic and more active products than their phenylpropanoid precursors. Therefore, they represent new molecules that can be altered structurally for optimization of activity. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-02-24T18:54:00Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO Talita Atanazio Rosa.pdf: 4227708 bytes, checksum: 52f1a5ef37c5cb88a92e6004eb76401f (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-24T18:54:00Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO Talita Atanazio Rosa.pdf: 4227708 bytes, checksum: 52f1a5ef37c5cb88a92e6004eb76401f (MD5) Previous issue date: 2015-02-25 / CAPES / O benznidazol é único fármaco aprovado no Brasil para o tratamento da doença de Chagas e está disponível sob a forma de comprimido de uso adulto e pediátrico de liberação imediata. Sabendo-se que as formas de liberação prolongada possuem vantagens como a redução de efeitos adversos e o aumento da adesão terapêutica, o objetivo deste trabalho foi investigar por ensaios de liberação in vitro formas farmacêuticas de liberação prolongada e confrontá-las com resultados dos comprimidos de liberação imediata. Para isto, foram obtidos três lotes de liberação prolongada (LBI, LBII e LBIII) utilizando os polímeros hidroxipropilmetilcelulose K100LV, K100M e K4M, respectivamente. O estudo de dissolução realizado avaliou quatro tipos de meios de dissolução: tampão pH 1,2; tampão pH 1,2 adicionado de 1% de lauril sulfato de sódio; fluido biorrelevante gástrico em jejum (FASSGF); FASSGF por 4h e fluido biorrelevante intestinal em jejum (FASSIF) nas horas seguintes. Modelos cinéticos de ordem zero, primeira ordem, Higuchi, Korsmeyer-Peppas e Peppas-Sahlin foram utilizados para avaliar o mecanismo da liberação in vitro, enquanto que o teste ANOVA univariada e fatores f1 e f2 foram utilizados para avaliar a similaridade dos perfis. Estudos in vivo foram realizados por grupo de pesquisa da UNESP, sendo utilizados os dados obtidos para estimar a correlação in vitro/in vivo. Os testes de controle de qualidade descartam o lote LBI por não atender ao critério de uniformidade de conteúdo, enquanto que os lotes LBII e LBIII demonstraram atender aos critérios de qualidade. Os estudos de dissolução constataram o aumento do tempo total de liberação de 2 h em comprimidos comerciais para 24-72 h nos lotes LBII e LBIII. O ajuste a modelos cinéticos sugeriu a liberação do fármaco por mecanismos de relaxamento polimérico e difusão fickiana. Os métodos avaliados de dissolução mostraram-se discriminativos em relação aos resultados de ANOVA univariada e fator f1 e f2. Foi possível estabelecer uma correlação de nível A para os comprimidos pediátricos e para o lote LBIII de dissolução prolongada, sendo o método II de dissolução o que refletiu melhor as condições in vivo. Dessa forma, o projeto contribuiu com o desenvolvimento de uma nova forma farmacêutica de liberação prolongada, assim como o estabelecimento de correlação in vitro/in vivo. / The benznidazole is the only drug approved in Brazil for the treatment of Chagas disease and it is available in the form of immediate release tablet of adult and pediatric use. Whereas the extended-release forms have advantages such as reducing side effects and increasing adherence, the aim of this study was to investigate the in vitro release assays of extended-release dosage forms and compare them with results of immediate release tablets. It were obtained three lots of extended-release (LBI, LBII and LBIII) using the polymers hydroxypropyl methylcellulose K100LV, K100M and K4M, respectively. The dissolution study evaluated four different dissolution media: pH 1.2 buffer; pH 1.2 buffer plus 1% sodium lauryl sulfate; Fasted State Simulated Gastric Fluid (FASSGF); FASSGF medium till 4 h and Fasted State Simulated Instestinal Fluid (FaSSIF) medium in the following hours. Kinetic models such as zero order, first order, Higuchi, Korsmeyer-Peppas and Peppas-Sahlin were used to evaluate the mechanism of in vitro release, whereas the univariate ANOVA and f1 and f2 factors were used to evaluate the similarity of the profiles. In vivo studies were performed by the UNESP research group, the results were used to estimate obtained in vitro/in vivo correlation. The results showed that LBI batch failed at criteria of uniformity of content, while lots LBII and LBIII showed meet quality criteria. Dissolution studies have found an increase in the total time of 2 hours in commercial release tablets to 24-72 h in lots LBII and LBIII. The kinetic models suggested adjustment to the release of drug per polymer relaxation mechanisms and Fickian diffusion. The dissolution methods evaluated proved to be discriminatory in relation to the results of univariate ANOVA and factor f1 and f2. It was possible to establish a level A correlation for pediatric tablets and the LBIII lot of extended release tablets and the method II dissolution which better reflect the conditions in vivo. Thus, the project contributed to the development of a new pharmaceutical form of extended-release, as well as the establishment of correlation in vitro/in vivo.

A doença de Chagas, também conhecida como tripanossomíase americana é causada pelo protozoário flagelado Trypanosoma cruzi e afeta aproximadamente 10 milhões de pessoas em áreas endêmicas do México, America central e do Sul. A quimioterapia disponível atualmente limita-se a dois compostos: Nifurtimox e o Benzonidazol. Ambos os fármacos reduzem os sintomas da doença e a mortalidade das pessoas infectadas, quando utilizadas na fase aguda, mas sua eficácia na fase crônica é controversa. Além do mais apresentam vários efeitos colaterais. O T. cruzi é capaz de utilizar carboidratos e aminoácidos como fonte de energia e carbono. O nosso grupo tem estudado o envolvimento do glutamato na resistência do parasita ao estresse térmico, oxidativo e metabólico como também a importância do aminoácido GABA no metabolismo do T. cruzi, visto que este também é transportado pelo parasita. Nesse contexto, o objetivo desse trabalho foi avaliar a interferência de fármacos, que atuam via receptores ou transportadores de GABA e glutamato, no ciclo de vida do T. cruzi. Os fármacos selecionados foram: Vigabatrina, Pregabalina, MK-801, MTEP e Memantina. Os resultados demonstram que apenas Memantina apresentou um melhor efeito tripanocida. Inibiu a proliferação de formas epimastigotas, interferiu na metaciclogênese, como também afetou o metabolismo energético do parasita com a diminuição dos níveis de ATP, além de desencadear mecanismos que levam a apoptose das formas epimastigotas. Memantina também interferiu no ciclo intracelular do parasita, mais especificamente no estágio amastigota. Interessantemente as fases do ciclo do parasita que são mais afetadas, são as fases que requerem mais energia: estágios replicativos (amastigota e epimastigota), como também os processos de diferenciação e invasão celular. Apesar de apresentar valores de IC50 que podem ser considerados altos em relação aos valores descritos para formas epimastigotas tratadas com Benzonidazol, esses resultados mostram perspectivas promissoras, visto que o Memantina poderá ser utilizado como composto líder para o desenho de derivados com atividade tripanocida otimizada. / Chagas disease, also known as American trypanosomiasis is caused by the flagellate protozoan Trypanosoma cruzi and affects approximately 10 million people in endemic areas of Mexico, Central America and South America, with about 25 million people living in areas at risk of infection. The currently available chemotherapy is limited to two compounds, which are: Nifurtimox and Benznidazole. Both drugs reduce symptoms of the disease and mortality of infected people when used in the acute phase, but its efficacy in chronic phase (phase in which the majority of cases are diagnosed) is still controversial. Moreover these drugs have several side effects. T. cruzi is able to utilize carbohydrate and amino acids as carbon and energy source. Our group has studied the involvement of glutamate in parasite resistance to thermal, oxidative and metabolic stress, as well as the importance of the amino acid GABA metabolism in T. cruzi. The aim of this study was to evaluate the interference of drugs, that act in GABA and glutamate transporters or receptors, in the life cycle of T. cruzi. The drugs selected were: vigabatrin, pregabalin, MK-801, memantine and MTEP. The results showed that only memantine has a better trypanocidal effect. Memantine inhibited the proliferation of epimastigotes, interfered in metacyclogenesis, and affected the energy metabolism of the parasite with decreased levels of ATP, and trigger mechanisms that lead to apoptosis of epimastigotes. Moreover interferes with intracellular cycle of the parasite, specifically in amastigote stage. Interesting that stages of the parasite that require more energy are more affected: replicative stages (epimastigote and amastigote) as well as the processes of differentiation and cell invasion. IC50 value is more than that described to epimastigotes treateds with Benznidazole, but Memantine could be used as leader compound for the design of drugs with optimized trypanocidal activity.

Submitted by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2012-10-18T20:17:52Z No. of bitstreams: 1 anissa_daliry_ioc_bcm_0031_2011.pdf: 14613668 bytes, checksum: 93e5077e14be3ffeb54129fc214799c9 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-10-18T20:17:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 anissa_daliry_ioc_bcm_0031_2011.pdf: 14613668 bytes, checksum: 93e5077e14be3ffeb54129fc214799c9 (MD5) Previous issue date: 2011 / Universidade Federal do Rio de Janeiro. Instituto de Biofísica Carlos Chagas Filho. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A doença de Chagas, causada pelo Trypanosoma cruzi, é endêmica na América Latina, afetando mais de 15 milhões de pessoas. Como seu tratamento apresenta eficácia limitada e considerável toxicidade novas drogas são necessárias. Neste contexto, com a colaboração de grupos de química medicinal, nosso objetivo é a investigação da atividade tripanocida, seletividade, alvos celulares e mecanismos de ação de diamidinas aromáticas (DAs) e análogos. Inicialmente avaliamos o efeito tripanocida de onze DAs sobre as formas tripomastigotas e amastigotas intracelulares, assim como sua toxicidade para células de mamíferos e localização intracelular no parasito. Entre estes onze compostos, 2, 5 e 7 foram os mais ativos, com valores de IC50 na faixa micromolar e um alto índice de seletividade sobre as duas formas de T. cruzi. Através de microscopia de fluorescência (MF) foi possível localizar todos os compostos em organelas ricas em DNA, núcleo e mitocôndria (kDNA) e a análise ultraestrutural utilizando os compostos 5 e 7 revelou que estes compostos levam a danos mitocondriais, incluindo desorganização do kDNA em formas tripomastigotas. O acúmulo das diamidinas foi maior no kDNA do que no núcleo, porém tal acúmulo não está correlacionado a uma maior atividade tripanocida. A seguir, visando um melhor entendimento do mecanismo de ação de diamidinas e análogos, investigamos uma possível correlação entre as propriedades de ligação ao kDNA de treze compostos com a atividade tripanocida, através de estudos de desnaturação térmica (Tm) e dicroísmo circular (DiC). Nossos resultados mostram tanto com kDNA purificado de epimastigotas como com uma sequência conservada de 22-mer presente em minicírculos de T. cruzi, que a forte interação de amidinas ao kDNA não é o fator determinante para desencadear sua atividade tripanocida. Nosso próximo passo foi a avaliação de alterações topológicas induzidas por dez compostos aromáticos sobre o kDNA de T. cruzi através de alteração da mobilidade em gel e MF. Os estudos eletroforéticos foram conduzidos pela incubação de fragmentos de kDNA, obtidos pela digestão com as endonucleases EcoRI e CvQI, com os compostos por análise em gel de poliacrilamida. As diamidinas DB889 e DB185 induziram consideráveis alterações na mobilidade dos fragmentos. Além disso, incubando a rede intacta e purificada de kDNA com a DB75 e monitorando o efeito por MF, obervarmos a capacidade desta DA de induzir um grande aumento da área da rede. Em resumo, nossos resultados revelam que diamidinas e congêneres são capazes de induzir profundas alterações na topologia do kDNA do T. cruzi sugerindo que esta estrutura pode ser um dos possíveis alvos destes compostos. Entretanto, a localização preferencial dos compostos no kDNA, assim como sua afinidade à esta estrutura e capacidade de alterar a mobilidade dos fragmentos em géis de poliacrilamida não está correlacionada com sua atividade tripanocida. Estes dados sugerem fortemente que outros fatores podem estar envolvidos no mecanismo de ação destes compostos, operando de modo primário ou secundário a interação composto:kDNA. Outros estudos serão necessários para melhor identificar os mecanismos envolvidos na ação destes compostos, visando contribuir para o desenho racional de compostos líderes para o tratamento da doença de Chagas. / Chagas disease, caused by Trypanosoma cruzi, is endemic in Latin America, affecting more de 15 million people. Due to the limited efficacy and considerable toxicity, the therapy for Chagas disease is far from being considerable ideal and thus alternative drugs are urgently needed. In this context, with the collaborations of medicinal chemistry groups, our aim was to investigate the trypanocidal activity, selectivity, cellular targets and mechanisms of action of aromatic diamidines (ADs) and analogues. First, we tested the trypanocidal effect of eleven ADs upon intracellular amastigotes and trypomastigotes, their toxicity towards mammalian cells and their sub-cellular localization. Compounds 2, 5 and 7 were the most active, presenting IC50 values on the micromolar range and displaying high selectivity indexes for both T. cruzi forms. Using fluorescence microscopy (FM), all the compounds were localized in organelles rich in DNA, nucleus and mitochondrion (kDNA) and in bloodstream forms treated with the compounds 5 and 7 we observed ultrastructural damages on mitochondrial organelle, including kDNA disorganization. The accumulation of the diamidines was higher in the kDNA than in the nucleus, but such accumulation could not be correlated with a higher trypanocidal activity. Next, aiming to better understand the mechanism of action of diamidines and analogues, we investigated the possible correlation between kDNA binding properties of thirteen compounds with their anti-T. cruzi effect, through thermal denaturation (T m) and circular dichroism (CiD) studies. Our data demonstrated using the purified kDNA of epimastigotes or a conserved synthetic parasite sequence of 22-mer present in T. cruzi minicircles, that the strong interaction of the amidines with the kDNA is not a determinant factor to the triggering of the trypanocidal activity. Our next step was the evaluation of topological changes induced by ten aromatic compounds on T. cruzi kDNA, through gel mobility shifts and FM. The eletrophoretic studies were conducted by the incubation of kDNA fragments obtained by digestion with the endonucleases EcoRI e CvQI with the compounds and analysis by poliacrylamide gel. The diamidines DB889 and DB185 induced substantial mobility shifts in the fragmented bands. Additionally, by FM of whole kDNA network incubated with DB75 we observed the ability of this diamidine to cause a striking expansion of the kDNA network area. Taken together our results suggest that diamidines and related compounds provoke profound alterations in the normal topology of T. cruzi kDNA suggesting that this structure may represent one of the potential targets of these compounds. However, the compound preferential accumulation in kDNA, as well as their affinity and capability of inducing topological changes in that structure is not correlated with their anti-T. cruzi activity. These findings strongly suggest that other molecular mechanisms may be also operating primarily or secondarily to the drug:KDNA interaction. Further studies are needed to better identify the mechanisms involved in the activity of this class of chemical, aiming to contribute to the rational design of lead compounds for the treatment of Chagas disease .

Submitted by Irene Nascimento (irene.kessia@ufpe.br) on 2017-05-04T18:15:26Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação-Final (5).pdf: 1546136 bytes, checksum: 53adafdfff412dd5657ebbb3bab08a78 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-04T18:15:26Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação-Final (5).pdf: 1546136 bytes, checksum: 53adafdfff412dd5657ebbb3bab08a78 (MD5) Previous issue date: 2016-02-24 / O benznidazol (BNZ) é um derivado de 2-nitroimidazol com largo espectro de atividade farmacológica antiparasitária. Um dos grandes problemas deste fármaco são as grandes doses administradas, tratamentos prolongados, bem como a alta incidência de reações adversas, o que, provavelmente, estão relacionados com a sua baixa solubilidade. Parte destes problemas pode ser reduzidos com associação do fármaco a uma estrutura que aumente a sua solubilidade e modifique a liberação do mesmo, modulando-a e prolongando a sua dissolução. Assim, esse trabalho objetivou obter e caracterizar sistemas microparticulados do BNZ a uma estrutura organometálica - Metal Organic Framework (MOF) chamada Zeolitic Imidazolate Framework (ZIF-8), a fim deser utilizada nos estudos de pré-formulação de forma farmacêutica de liberação prolongada para o tratamento alternativo da doença de Chagas. Os sistemas foram obtidos após agitação do fármaco e da ZIF-8 em diferentes solventes (água e acetona) para que fosse escolhido o melhor método, seguindo a obtenção com a secagem. Quanto às caracterizações, estas foram realizadas através de diferentes técnicas analíticas (espectroscopia de absorção na região do ultravioleta-visível, análise térmica, espectroscopia de absorção na região do infravermelho com transformada de Fourier, difratometria de raios-x, microscopia eletrônica de varredura, microscopia de luz polarizada, tamanho de partícula por granulometria à laser, análise de área superficial e tamanho e volume de poros) para garantir a obtenção do sistema, prosseguindo com os ensaios de dissolução que evidenciaram o comportamento de liberação do BNZ em diferentes pH’s quando associado aos materiais organometálicos. Os perfis de dissolução foram analisados através da área sob a curva (AUC), eficiência de dissolução (ED%) e ajuste de seus resultados quanto aos modelos cinéticos. Por meio dos métodos desenvolvidos o escolhido para obtenção foi o realizado com a acetona como solvente, onde foi possível conseguir um valor de 38% de incorporação do fármaco à ZIF-8. Através das análises térmicas, ficou comprovada a obtenção do sistema, indicando que o mesmo também pode influenciar positivamente a estabilidade térmica do fármaco. Já os espectros de FT-IR, difratogramas de DR-X e demais análises realizadas corroboraram os resultados, confirmando a formação do sistema microparticulado BNZ:ZIF-8. Com o estudo de dissolução, verificou-se que houve modulação da liberação do fármaco de acordo com o pH utilizado, onde em pH 4,5 o sistema liberou uma grande quantidade de fármaco em um curto intervalo de tempo, atingindo 80% de liberação em 2h, já em pH 7,6 houve uma liberação gradual atingindo essa mesma porcentagem em 7h, além dessa modulação o sistema apresentou incremento de solubilidade quando comparado ao BNZ isolado. O presente trabalho trouxe informações relevantes para o desenvolvimento de formas farmacêuticas de liberação prolongada que utilize o BNZ como insumo farmacêutico ativo. / The benznidazole (BNZ) is a 2-nitroimidazole derived with broad-spectrum antiparasitic drug activity. Among the problems with this drug are: large doses, long term treatment and the high incidence of adverse reactions, which are probably related to its low solubility. Many of these problems can be reduced associating the drug with a structure that increases the its solubility and modulates its release. Thus, this study aimed to obtain and characterize the BNZ microparticulate systems with a Metal Organic Framework (MOF) called Zeolitic Imidazolate Framework (ZIF-8), to be used in pre-formulation studies of extended release dosage form, as an alternative treatment of Chagas' disease. The systems were obtained after stirring the drug and ZIF-8 in different solvents (water and acetone), followed by drying, in order to choose the best method of obtaining. The characterizations were performed using different techniques (absorption spectroscopy in the ultraviolet region, thermal analysis, absorption spectroscopy in the infrared with Fourier transform, x-ray diffractometry, scanning electron microscopy, polarized light microscopy, particle size by laser granulometry, surface area nalysis and size and pore volume) to ensure the achievement of the system. Then they were carried out dissolution tests, which showed the BNZ release behavior at different pH’s when associated with organometallic materials. The dissolution profiles were analyzed by area under the curve (AUC), dissolution efficiency (DE%) and release kinetic models. The method using acetone to obtain the system reach a value of 38% of drug incorporation on ZIF-8 and it was determined as the standard obtaining method. Thermal analysis, FTIR, XRD and other analyses corroborate the results that confirms the formation of BNZ:ZIF-8 microparticulate system. With dissolution study it was found that there was modulation of drug release according to the pH used. At pH 4.5 the system released a large amount of drug in a short period of time, up to 80% release in 2 hours. At pH 7.6 there was a gradual release over time until it reaches the same percentage in 7 hours. In addition to this modulation, the system showed increased solubility when compared to the isolated BNZ. This study brought relevant information for the development of extendedrelease dosage forms using the BNZ as an active pharmaceutical ingredient.

A doença de Chagas, também conhecida como tripanossomíase americana é causada pelo protozoário flagelado Trypanosoma cruzi e afeta aproximadamente 10 milhões de pessoas em áreas endêmicas do México, America central e do Sul. A quimioterapia disponível atualmente limita-se a dois compostos: Nifurtimox e o Benzonidazol. Ambos os fármacos reduzem os sintomas da doença e a mortalidade das pessoas infectadas, quando utilizadas na fase aguda, mas sua eficácia na fase crônica é controversa. Além do mais apresentam vários efeitos colaterais. O T. cruzi é capaz de utilizar carboidratos e aminoácidos como fonte de energia e carbono. O nosso grupo tem estudado o envolvimento do glutamato na resistência do parasita ao estresse térmico, oxidativo e metabólico como também a importância do aminoácido GABA no metabolismo do T. cruzi, visto que este também é transportado pelo parasita. Nesse contexto, o objetivo desse trabalho foi avaliar a interferência de fármacos, que atuam via receptores ou transportadores de GABA e glutamato, no ciclo de vida do T. cruzi. Os fármacos selecionados foram: Vigabatrina, Pregabalina, MK-801, MTEP e Memantina. Os resultados demonstram que apenas Memantina apresentou um melhor efeito tripanocida. Inibiu a proliferação de formas epimastigotas, interferiu na metaciclogênese, como também afetou o metabolismo energético do parasita com a diminuição dos níveis de ATP, além de desencadear mecanismos que levam a apoptose das formas epimastigotas. Memantina também interferiu no ciclo intracelular do parasita, mais especificamente no estágio amastigota. Interessantemente as fases do ciclo do parasita que são mais afetadas, são as fases que requerem mais energia: estágios replicativos (amastigota e epimastigota), como também os processos de diferenciação e invasão celular. Apesar de apresentar valores de IC50 que podem ser considerados altos em relação aos valores descritos para formas epimastigotas tratadas com Benzonidazol, esses resultados mostram perspectivas promissoras, visto que o Memantina poderá ser utilizado como composto líder para o desenho de derivados com atividade tripanocida otimizada. / Chagas disease, also known as American trypanosomiasis is caused by the flagellate protozoan Trypanosoma cruzi and affects approximately 10 million people in endemic areas of Mexico, Central America and South America, with about 25 million people living in areas at risk of infection. The currently available chemotherapy is limited to two compounds, which are: Nifurtimox and Benznidazole. Both drugs reduce symptoms of the disease and mortality of infected people when used in the acute phase, but its efficacy in chronic phase (phase in which the majority of cases are diagnosed) is still controversial. Moreover these drugs have several side effects. T. cruzi is able to utilize carbohydrate and amino acids as carbon and energy source. Our group has studied the involvement of glutamate in parasite resistance to thermal, oxidative and metabolic stress, as well as the importance of the amino acid GABA metabolism in T. cruzi. The aim of this study was to evaluate the interference of drugs, that act in GABA and glutamate transporters or receptors, in the life cycle of T. cruzi. The drugs selected were: vigabatrin, pregabalin, MK-801, memantine and MTEP. The results showed that only memantine has a better trypanocidal effect. Memantine inhibited the proliferation of epimastigotes, interfered in metacyclogenesis, and affected the energy metabolism of the parasite with decreased levels of ATP, and trigger mechanisms that lead to apoptosis of epimastigotes. Moreover interferes with intracellular cycle of the parasite, specifically in amastigote stage. Interesting that stages of the parasite that require more energy are more affected: replicative stages (epimastigote and amastigote) as well as the processes of differentiation and cell invasion. IC50 value is more than that described to epimastigotes treateds with Benznidazole, but Memantine could be used as leader compound for the design of drugs with optimized trypanocidal activity.

Made available in DSpace on 2015-05-22T18:39:48Z (GMT). No. of bitstreams: 2 207.pdf: 6020624 bytes, checksum: f6db5979961b8cf83ff182a31ae3f66f (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2012 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil / A doença de Chagas, causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi, é considerada um problema de saúde pública. A quimioterapia usada causa efeitos colaterias graves e sua utilização na fase crônica ainda é controversa. Neste sentido, a investigação de novas estratégias terapêuticas continua a ser uma prioridade. Os óleos essenciais (OEs) de plantas aparecem como fonte promissora de compostos bioativos. Neste trabalho investigamos as atividades tripanocida e citotóxica de OEs de Lippia sidoides (LS), Lippia origanoides (LO), Chenopodium ambrosioides (CA), Justicia pectoralis (JP), Ocimum gratissimum e Vitex agnus-castus (VAC). A caracterização química dos Oes, através da espectometria de massa, mostrou que o timol e carvacrol foram os principais componentes do LS e LO, enquanto que, o eugenol e 1,8-cineol foram os principais compostos de OG e VAC. Terpinoleno foi o principal constituinte de JP e CA. Todos os OEs foram ativos apresentando baixa toxicidade em macrófagos e alta seletividade para os parasitas. OEs de LS, LO, CA e OG foram os mais eficazes contra tripomastigota e inibiram eficientemente a sobrevivência de amastigotas no interior dos macrófagos. Nenhum destes OEs foi capaz de induzir alterações na produção de óxido nítrico. O tratamento com os OEs de LS, LO, OG e CA induziu alterações morfológicas compatíveis com a perda de viabilidade e morte celular. LS e LO causaram perda de viabilidade celular e da integridade da membrana, demonstrado pela redução da marcação com calceína e o aumento na proporção de células HE-positivas. Uma diminuição considerável na Rodamina 123 e aumento na intensidade de fluorescência do MitoSox foram indicativos de perda do potencial mitocondrial e geração de espécies reativas de oxigênio, o que em última instância conduzem à morte do parasita. Em conjunto nossos resultados apontam os OEs de LS, LO, CA e OG agentes promissores contra doença de Chagas