No / A series of 19 huprines has been evaluated for their activity against cultured bloodstream forms of Trypanosoma brucei and Plasmodium falciparum. Moreover, cytotoxicity against rat myoblast L6 cells was assessed for selected huprines. All the tested huprines are moderately potent and selective trypanocidal agents, exhibiting IC50 values against T. brucei in the submicromolar to low micromolar range and selectivity indices for T. brucei over L6 cells of approximately 15, thus constituting interesting trypanocidal lead compounds. Two of these huprines were also found to be active against a chloroquine-resistant strain of P. falciparum, thus emerging as interesting trypanocidal–antiplasmodial dual acting compounds, but they exhibited little selectivity for P. falciparum over L6 cells.

Partindo-se de piperonal e succinato de metila, obteve-se o ácido 4-(3,4- metilenodioxifenil)-3-metoxicarbonil-3-butenóico (3), com rendimento de 60% e partindo-se deste, por redução catalítica obteve-se o ácido 4-(3,4- metilenodioxifenil)-3-metoxicarbonil-3-butanóico (4), com rendimento de 80%. A partir do (4), reagindo-se com Ca(BH4)2 e H+, obteve-se a 4-(3,4- metilenodioxifenil)-4,5-di-hidro-2(3H)-furanona (5), com rendimento de 70 %. Pela adição de piperonal, sintetizou-se a 7-hidroxi-hinoquinina (6), com rendimento de 89% da mistura dos diasteroisômeros (6a e 6b), os quais foram separados por cristalização. A reação de ambos os compostos (6a e 6b) com CF3CO forneceu o derivado ariltetralínico (7), com 98% de rendimento. A poligamaina (7) foi reduzida com DIBAL-H em THF, fornecendo o composto (9). O derivado (9), constituído de uma mistura enanciomérica foi separado em CLAE quiral. Os derivados foram analisados por RMN 1H, BB e DEPT. Com relação aos ensaios biológicos, os compostos 6, 7 e 9 foram avaliados patógenos bucais para determinação dos valores de CIM. Os melhores resultados obtidos para o composto (+) 9 foram contra S. mutans (250 µM), S. salivarius (250 µM), S. sobrinus (280 µM) e S. mitis (280 µM). O isômero (-) 9 foi ativo contra S. sanguinis (280 µM) enquanto (9) mostrou melhor atividade contra L. casei (370 µM) e E. faecalis (710 µM). No ensaio tripanocida, pode-se observar que o melhor resultado foi obtido para a mistura de enanciômeros (9), a qual apresentou IC50 = 1,4 µM e lise de 61,9% ± 0,9 na concentração de 32 µM. Por outro lado, ambos os enanciômeros isolados foram menos ativos apresentando IC50 de 351,8 µM e 135 µM para (-) 9 e (+) 9, respectivamente e lise de 47,3% ± 5,9 na concentração de 128 µM, para o enanciômero (+). / The (3,4-methylenodioxiphenyl)-3-methoxycarbonyl-3-butenoic acid (3) was obtained in 60 % yield by reacting pyperonal and methyl succinate. Acid 3 was submitted to catalytic reduction furnishing the 4-(3,4-methylenedioxiphenyl)-3- methoxicarbonyl-3-butanoic acid (4), yielding 80 %. Then, compound 4 was reacted with Ca(BH4)2 and H+, furnishing 4-(3,4-methylenedioxiphenyl)-4,5-dihydro-2(3H)-furanone (5), yielding 70 %. Piperonal was added to compound 5 to produce 7-hidroxyhinoquinin (6), yielding 89% of a mixture of diasteroisomers (6a and 6b), which was separate by crystallization. The reaction of both compounds 6a e 6b with CF3CO furnished an aryltetralin lignan derivative poligamain (7), yielding 98 %. Poligamain was reduced by using DIBAL-H in THF, to furnish compound 9. Compound 9, constituted of an enantiomeric mixture was separated by chiral HPLC. All the obtained compounds were analyzed by 1H NMR, BB and DEPT techniques. Regarding the biological assays, the compounds 6, 7 and 9 were assayed against oral pathogens by determining its MIC values. The best results obtained for the (+) 9 isomer was against S. mutans (250 µM), S. salivarius (250 µM), S. sobrinus (280 µM) and S. mitis (280 µM). For the (-) 9 isomer it was active against S. sanguinis (280 µM) while (9) displayed higher activity against L. Casei (370 µM) and E. faecalis (710 µM). Regarding the in vitro trypanocidal assay, on one hand the best result was observed for the mixture of enantiomers (9), which displayed IC50 = 1.4 µM and lysis of 61.9% ± 0.9 at 32 µM. On the other hand, both isolated enantiomers were less active by displaying IC50 of 351.8 µM and 135 µM for (-) 9 and (+) 9, respectively and lysis of 47.3% ± 5.9 at 128 µM, for (+) enantiomer.

Partindo-se de piperonal e succinato de metila, obteve-se o ácido 4-(3,4- metilenodioxifenil)-3-metoxicarbonil-3-butenóico (3), com rendimento de 60% e partindo-se deste, por redução catalítica obteve-se o ácido 4-(3,4- metilenodioxifenil)-3-metoxicarbonil-3-butanóico (4), com rendimento de 80%. A partir do (4), reagindo-se com Ca(BH4)2 e H+, obteve-se a 4-(3,4- metilenodioxifenil)-4,5-di-hidro-2(3H)-furanona (5), com rendimento de 70 %. Pela adição de piperonal, sintetizou-se a 7-hidroxi-hinoquinina (6), com rendimento de 89% da mistura dos diasteroisômeros (6a e 6b), os quais foram separados por cristalização. A reação de ambos os compostos (6a e 6b) com CF3CO forneceu o derivado ariltetralínico (7), com 98% de rendimento. A poligamaina (7) foi reduzida com DIBAL-H em THF, fornecendo o composto (9). O derivado (9), constituído de uma mistura enanciomérica foi separado em CLAE quiral. Os derivados foram analisados por RMN 1H, BB e DEPT. Com relação aos ensaios biológicos, os compostos 6, 7 e 9 foram avaliados patógenos bucais para determinação dos valores de CIM. Os melhores resultados obtidos para o composto (+) 9 foram contra S. mutans (250 µM), S. salivarius (250 µM), S. sobrinus (280 µM) e S. mitis (280 µM). O isômero (-) 9 foi ativo contra S. sanguinis (280 µM) enquanto (9) mostrou melhor atividade contra L. casei (370 µM) e E. faecalis (710 µM). No ensaio tripanocida, pode-se observar que o melhor resultado foi obtido para a mistura de enanciômeros (9), a qual apresentou IC50 = 1,4 µM e lise de 61,9% ± 0,9 na concentração de 32 µM. Por outro lado, ambos os enanciômeros isolados foram menos ativos apresentando IC50 de 351,8 µM e 135 µM para (-) 9 e (+) 9, respectivamente e lise de 47,3% ± 5,9 na concentração de 128 µM, para o enanciômero (+). / The (3,4-methylenodioxiphenyl)-3-methoxycarbonyl-3-butenoic acid (3) was obtained in 60 % yield by reacting pyperonal and methyl succinate. Acid 3 was submitted to catalytic reduction furnishing the 4-(3,4-methylenedioxiphenyl)-3- methoxicarbonyl-3-butanoic acid (4), yielding 80 %. Then, compound 4 was reacted with Ca(BH4)2 and H+, furnishing 4-(3,4-methylenedioxiphenyl)-4,5-dihydro-2(3H)-furanone (5), yielding 70 %. Piperonal was added to compound 5 to produce 7-hidroxyhinoquinin (6), yielding 89% of a mixture of diasteroisomers (6a and 6b), which was separate by crystallization. The reaction of both compounds 6a e 6b with CF3CO furnished an aryltetralin lignan derivative poligamain (7), yielding 98 %. Poligamain was reduced by using DIBAL-H in THF, to furnish compound 9. Compound 9, constituted of an enantiomeric mixture was separated by chiral HPLC. All the obtained compounds were analyzed by 1H NMR, BB and DEPT techniques. Regarding the biological assays, the compounds 6, 7 and 9 were assayed against oral pathogens by determining its MIC values. The best results obtained for the (+) 9 isomer was against S. mutans (250 µM), S. salivarius (250 µM), S. sobrinus (280 µM) and S. mitis (280 µM). For the (-) 9 isomer it was active against S. sanguinis (280 µM) while (9) displayed higher activity against L. Casei (370 µM) and E. faecalis (710 µM). Regarding the in vitro trypanocidal assay, on one hand the best result was observed for the mixture of enantiomers (9), which displayed IC50 = 1.4 µM and lysis of 61.9% ± 0.9 at 32 µM. On the other hand, both isolated enantiomers were less active by displaying IC50 of 351.8 µM and 135 µM for (-) 9 and (+) 9, respectively and lysis of 47.3% ± 5.9 at 128 µM, for (+) enantiomer.

Ligantes oxindolimínicos foram sintetizados através de procedimentos já desenvolvidos em nosso laboratório, a partir do 2,3-dioxindol (isatina) e aminas ou diaminas selecionadas, e em seguida metalados. Foram investigados dois complexos de cobre(II) com os ligantes isaepy, preparado a partir de 2-(2-aminoetilpiridina) e isapn, a partir de 1,2-diaminoetano, e os correspondentes complexos de zinco(II). Após caracterização por diversas técnicas, sua reatividade com relação a biomoléculas (HSA e DNA) foi verificada, através de medidas de fluorescência e dicroísmo circular. Posteriormente, sua reatividade antiparasitária frente a T. cruzi foi testada. Todos eles apresentaram atividade tóxica frente às formas tripomastigota e amastigota do parasita, com índices de seletividade bastante promissores, quando comparados à droga atualmente em uso (benzonidazol) e outras alternativas descritas na literatura. Anteriormente estes complexos já haviam demonstrado atividade pró-apoptótica frente a diversas células tumorais, baseado em sua capacidade de gerar espécies reativas (EROs) e de inibir proteínas específicas, como a topoisomerase humana IB. Os resultados aqui obtidos deram origem a um pedido de patente (BR10 2013 026558-6, depositado junto ao INPI em 15/outubro/2013) visando o possível desenvolvimento de novos fármacos para a doença de Chagas. / Oxindolimine ligands were synthesized by procedures previously developed in our laboratory, from 2,3-dioxoindole(isatin) and amines or selected diamines, by condensation reactions, followed by metallation. Two copper(II) complexes with isaepy and isapn ligands, prepared from 2-(2-aminoethylpiridine) and 1,2-diaminoethane respectively, and their corresponding complexes of zinc(II) were investigated. After characterization by various techniques, their reactivity with respect to biomolecules (HSA and DNA) was verified, through measurements of fluorescence and circular dichroism. Subsequently, their antiparasitary reactivity against T. cruzi was tested. All complexes tested presents toxic activity against trypomastigote and amastigote forms of the parasite, with promising selectivity index, compared to drugs currently in use (benznidazole) and other alternative compounds described in literature. Previously, these complexes had shown pro-apoptotic activity against several tumor cells, based on their ability to generate reactive species and inhibit specific proteins, such as topoisomerases. The results obtained here gave rise to a patent application (BR10 2013 026558-6, deposited on INPI in October 15th, 2013), looking for a possible development of new drugs for Chagas disease.

A doença de Chagas, também chamada de tripanossomíase americana é a terceira doença parasítica mais presente no mundo, perdendo apenas para malária e esquistossomose. As terapias existentes atualmente para essa tripanossomíase são insatisfatórias e pouca atenção tem sido dada para o desenvolvimento de novos fármacos. Os medicamentos utilizados atualmente apresentam boa atividade apenas na fase inicial da doença e geram efeitos colaterais severos nos pacientes. <br /> As hidrazonas representam uma classe de compostos imínicos de grande versatilidade estrutural e importante atividade biológica em diversos níveis, sendo observados resultados de atividade tripanocida interessantes de hidrazonas coordenadas a rutênio. Por outro lado, complexos com oxovanádio coordenado a derivados de quinoxalinas apresentam melhores atividades do que os ligantes na forma livre e que complexos formados por essas quinoxalinas com outros metais. <br /> Esse trabalho buscou unir as propriedades biológicas das hidrazonas e vanádio de forma a obter complexos com boa atividade tripanocida. Foram sintetizados dois ligantes hidrazonas derivados da 2-tiofenofenohidrazida, e através dos mesmos foram desenvolvidos dez novos complexos de oxovanádio (V). Os produtos foram caracterizados por ponto de fusão, análise elementar, espectroscopia na região do infravermelho e do UV-Vis., ressonância magnética nuclear (RMN 1H) e difração de raios X em monocristal, sendo obtidos três classes de complexos. Duas classe são formadas por complexos com ligantes mistos, na forma [VO(L)(OR)] com R=metil, etil, n-propil e L=hidrazona, e na forma [VO(L)(mal)] com L=hidrazona e mal= pirona maltol. Outra classe obtida é formada por binucleares de oxovanádio na forma [(VOL)2(&mu;-O)] com L=hidrazona e os centros de vanádio ligados por uma ponte &mu;-oxo. As estruturas obtidas para os complexos mistos com os alcóxidos e para os dímeros apresentam geometria piramidal quadrática distorcida, enquanto que os complexos mistos com maltol apresentam geométrica octaédrica distorcida. <br /> Ensaios in vitro contra cepas de T. cruzi mostraram resultados interessantes (SI iguais ou maiores que 10) para que continue a exploração dos tipos de complexos formados e novos ensaios biológicos devem ser realizados para verificar o mecanismo de ação e a atividade in vivo desses compostos, com intuito de obter um novo fármaco antichagásico baseado em vanádio no futuro. / Chagas disease, also called American trypanosomiasis is the third most present parasitic disease in the world. The existing therapies for this trypanosomiasis are unsatisfactory and a little attention has been given to the development of new drugs. The drugs currently used exhibit good activity only in the early phase of the disease and generate severe side effects in patients. <br /> Hydrazones represent a class of iminic compounds with good structural variability and important biological activity at various levels, and interesting results of trypanocidal activity are observed for hydrazones coordinated to ruthenium. On the other hand, complexes with oxovanadium coordinated to quinoxaline derivatives have better activities than the free ligands and complexes with other metals coordinated to that quinoxalines. <br /> This study aimed to unite the biological properties of hydrazones and vanadium to obtain complexes with good trypanocidal activity. Two hydrazones ligands derived from 2- tiofenofenohidrazida were synthesized, and through that ligands, ten new complexes of oxovanadium (V) were developed. The products were characterized by melting point, elemental analysis, infrared and UV - Vis. spectroscopies, nuclear magnetic resonance (1H NMR) and single crystals x-ray diffraction. Three classes of complexes were obtained. Two of them are formed by complexes with mixed ligands, one at [VO(L)(OR) ] form, with R = methyl , ethyl , n- propyl and L = hydrazone , and the other one with the [VO(L)(mal)] empirical form, with L = hydrazone and mal = pyrone maltol. Another class consists of binuclear oxovanadium complexes obtained at [(VOL)2(&mu;-O)] form, with L = hydrazone and the vanadium centers connected by a &mu;-oxo bridge. The structures obtained for the mixed complexes with the alkoxides and dimers have quadratic distorted pyramidal geometry, while the mixed maltol complexes have distorted octahedral geometry. <br /> In vitro assays against T. cruzi strains showed interesting results (SI equal to or greater than 10) to continue the exploration of the types of complexes formed and new biological tests must be conducted to verify the mechanism of action and in vivo activity of these compounds, in order to obtain a new vanadium-based antichagasic drug in the future.

A doença de Chagas, também conhecida como tripanossomíase americana é causada pelo protozoário flagelado Trypanosoma cruzi e afeta aproximadamente 10 milhões de pessoas em áreas endêmicas do México, America central e do Sul. A quimioterapia disponível atualmente limita-se a dois compostos: Nifurtimox e o Benzonidazol. Ambos os fármacos reduzem os sintomas da doença e a mortalidade das pessoas infectadas, quando utilizadas na fase aguda, mas sua eficácia na fase crônica é controversa. Além do mais apresentam vários efeitos colaterais. O T. cruzi é capaz de utilizar carboidratos e aminoácidos como fonte de energia e carbono. O nosso grupo tem estudado o envolvimento do glutamato na resistência do parasita ao estresse térmico, oxidativo e metabólico como também a importância do aminoácido GABA no metabolismo do T. cruzi, visto que este também é transportado pelo parasita. Nesse contexto, o objetivo desse trabalho foi avaliar a interferência de fármacos, que atuam via receptores ou transportadores de GABA e glutamato, no ciclo de vida do T. cruzi. Os fármacos selecionados foram: Vigabatrina, Pregabalina, MK-801, MTEP e Memantina. Os resultados demonstram que apenas Memantina apresentou um melhor efeito tripanocida. Inibiu a proliferação de formas epimastigotas, interferiu na metaciclogênese, como também afetou o metabolismo energético do parasita com a diminuição dos níveis de ATP, além de desencadear mecanismos que levam a apoptose das formas epimastigotas. Memantina também interferiu no ciclo intracelular do parasita, mais especificamente no estágio amastigota. Interessantemente as fases do ciclo do parasita que são mais afetadas, são as fases que requerem mais energia: estágios replicativos (amastigota e epimastigota), como também os processos de diferenciação e invasão celular. Apesar de apresentar valores de IC50 que podem ser considerados altos em relação aos valores descritos para formas epimastigotas tratadas com Benzonidazol, esses resultados mostram perspectivas promissoras, visto que o Memantina poderá ser utilizado como composto líder para o desenho de derivados com atividade tripanocida otimizada. / Chagas disease, also known as American trypanosomiasis is caused by the flagellate protozoan Trypanosoma cruzi and affects approximately 10 million people in endemic areas of Mexico, Central America and South America, with about 25 million people living in areas at risk of infection. The currently available chemotherapy is limited to two compounds, which are: Nifurtimox and Benznidazole. Both drugs reduce symptoms of the disease and mortality of infected people when used in the acute phase, but its efficacy in chronic phase (phase in which the majority of cases are diagnosed) is still controversial. Moreover these drugs have several side effects. T. cruzi is able to utilize carbohydrate and amino acids as carbon and energy source. Our group has studied the involvement of glutamate in parasite resistance to thermal, oxidative and metabolic stress, as well as the importance of the amino acid GABA metabolism in T. cruzi. The aim of this study was to evaluate the interference of drugs, that act in GABA and glutamate transporters or receptors, in the life cycle of T. cruzi. The drugs selected were: vigabatrin, pregabalin, MK-801, memantine and MTEP. The results showed that only memantine has a better trypanocidal effect. Memantine inhibited the proliferation of epimastigotes, interfered in metacyclogenesis, and affected the energy metabolism of the parasite with decreased levels of ATP, and trigger mechanisms that lead to apoptosis of epimastigotes. Moreover interferes with intracellular cycle of the parasite, specifically in amastigote stage. Interesting that stages of the parasite that require more energy are more affected: replicative stages (epimastigote and amastigote) as well as the processes of differentiation and cell invasion. IC50 value is more than that described to epimastigotes treateds with Benznidazole, but Memantine could be used as leader compound for the design of drugs with optimized trypanocidal activity.

Ligantes oxindolimínicos foram sintetizados através de procedimentos já desenvolvidos em nosso laboratório, a partir do 2,3-dioxindol (isatina) e aminas ou diaminas selecionadas, e em seguida metalados. Foram investigados dois complexos de cobre(II) com os ligantes isaepy, preparado a partir de 2-(2-aminoetilpiridina) e isapn, a partir de 1,2-diaminoetano, e os correspondentes complexos de zinco(II). Após caracterização por diversas técnicas, sua reatividade com relação a biomoléculas (HSA e DNA) foi verificada, através de medidas de fluorescência e dicroísmo circular. Posteriormente, sua reatividade antiparasitária frente a T. cruzi foi testada. Todos eles apresentaram atividade tóxica frente às formas tripomastigota e amastigota do parasita, com índices de seletividade bastante promissores, quando comparados à droga atualmente em uso (benzonidazol) e outras alternativas descritas na literatura. Anteriormente estes complexos já haviam demonstrado atividade pró-apoptótica frente a diversas células tumorais, baseado em sua capacidade de gerar espécies reativas (EROs) e de inibir proteínas específicas, como a topoisomerase humana IB. Os resultados aqui obtidos deram origem a um pedido de patente (BR10 2013 026558-6, depositado junto ao INPI em 15/outubro/2013) visando o possível desenvolvimento de novos fármacos para a doença de Chagas. / Oxindolimine ligands were synthesized by procedures previously developed in our laboratory, from 2,3-dioxoindole(isatin) and amines or selected diamines, by condensation reactions, followed by metallation. Two copper(II) complexes with isaepy and isapn ligands, prepared from 2-(2-aminoethylpiridine) and 1,2-diaminoethane respectively, and their corresponding complexes of zinc(II) were investigated. After characterization by various techniques, their reactivity with respect to biomolecules (HSA and DNA) was verified, through measurements of fluorescence and circular dichroism. Subsequently, their antiparasitary reactivity against T. cruzi was tested. All complexes tested presents toxic activity against trypomastigote and amastigote forms of the parasite, with promising selectivity index, compared to drugs currently in use (benznidazole) and other alternative compounds described in literature. Previously, these complexes had shown pro-apoptotic activity against several tumor cells, based on their ability to generate reactive species and inhibit specific proteins, such as topoisomerases. The results obtained here gave rise to a patent application (BR10 2013 026558-6, deposited on INPI in October 15th, 2013), looking for a possible development of new drugs for Chagas disease.

O partenolídeo é uma lactona sesquiterpênica do tipo germacrolídeo, considerado como marcador da espécie Tanacetum parthenium e responsável pela atividade biológica do extrato das folhas desta planta. O extrato padronizado é comercializado como medicamento fitoterápico de registro simplificado pela ANVISA para profilaxia de enxaqueca. Além disso, existem vários estudos recentes demonstrando diversas atividades biológicas desta substância, como atividade antineoplásica e antiparasitária. Desta maneira, surge a necessidade de conhecimento da toxicologia deste composto, como os dados farmacocinéticos, farmacodinâmicos e de toxicidade. Neste trabalho foi avaliado o estudo introdutório de metabolismo in vitro do partenolídeo, ou seja, a avaliação dos possíveis metabólitos formados através das reações que mimetizam a oxidação pelo sistema citocromo P-450, utilizando catalisadores biomiméticos e pela biotransformação utilizando microssomas de rato. Através do modelo biomimético foi verificada a formação de um metabólito putativo majoritário, o qual foi isolado da reação do partenolídeo com MCPBA catalisada pela metaloporfirina FeTFPPCl e caracterizado como 1(R),10(R)-epóxi-partenolídeo. A avaliação da reatividade do partenolídeo, neste modelo oxidativo, foi realizada através da variação do agente oxidante e do catalisador. Na catálise em meio biológico utilizando microssoma de rato foi detectado um único metabólito, o qual apresentou espectro de massas e tempo de retenção similar ao produto isolado da reação biomimética com FeTFPPCl e MCPBA, sugerindo desta maneira, tratar-se da mesma substância. Ainda, neste estudo, foram realizados ensaios preliminares de citotoxicidade do partenolídeo e de seu metabólito putativo, sendo ambos os compostos ativos. / Parthenolide is a sesquiterpene lactone (germacrolide moiety) considered as a chemical marker ofTanacetum parthenium species and described as responsible for the biological activity of the leaves extract. The standardized extract is presented in Brazilian market as an herbal medicine for headache preventing (simplified registration at ANVISA). Moreover, several investigations in the literature have demonstrated its antiparasitic and antineoplastic activity. However, there is a need for knowledge on its toxicology, such as pharmacokinetic, pharmacodynamic and toxicity evaluations. Thus, the aim of this work is the in vitro analysis of parthenolide biomimetic metabolism (like cytochrome P-450 system) applying organometallic catalysts and biotransformation by rat microsomes. A major putative metabolite was isolated from parthenolide biomimetic oxidative reaction with MCPBA catalyzed by metalloporphyrin FeTFPPCl and it was characterized as 1(R),10(R)-epoxyparthenolide. The reactivity of parthenolide (at this oxidative model) was performed by varying the oxidizing agent and catalyst amounts. At rat microsome model, only a single metabolite was detected, which showed identical mass spectrum and retention time of the previously isolated putative metabolite (from the biomimetic reaction with MCPBA and FeTFPPCl). In addition, parthenolide and its putative metabolite were preliminary evaluated for the trypanocidal and leishmanicidal activity and both compounds showed significant biological activity.

A doença de Chagas é um problema de saúde pública, com dados preocupantes referentes ao número de pessoas contaminadas e daquelas que ainda permanecem expostas ao risco de infecção. As doenças tropicais desafiam as pesquisas científicas, pois os medicamentos existentes apresentam sérios efeitos colaterais. As tripanossomíases são doenças de grande importância no Brasil, como é o caso da doença de Chagas. Estudos realizados em diversos países têm relatado que muitas espécies vegetais possuem atividade contra o agente etiológico da doença de Chagas, Trypanosoma cruzi. Ácido ursólico e seu isômero, ácido oleanólico, pertencem à classe de compostos triterpenóides e são amplamente distribuídos no reino vegetal e têm sido frequentemente isolados como mistura isomérica. Nesse sentido, a proposta para o presente estudo foi avaliar a atividade tripanocida, sobre a cepa Y e Bolívia de T. cruzi, dos triterpenos ácido ursólico e ácido oleanólico, sintetizar e avaliar a atividade tripanocida do sal derivado de ácido ursólico. As substâncias foram administradas nas concentrações de 20 e 50 mg/kg por via intraperitoneal e oral, após a avaliação da dose letal média (DL50). As três substâncias empregadas nas concentrações de 20 e 50 mg/kg, administradas por via intraperitoneal não foram capazes de reduzir a parasitemia dos animais experimentalmente infectados com as cepas Y e Bolívia de T. cruzi. Entretanto, as três substâncias exibiram atividade tripanocida significativa, na concentração de 50 mg/kg, administradas por via oral, em animais infectados com a cepa Y de T. cruzi. Para a cepa Bolívia de T. cruzi, as substâncias administradas por via oral exibiram atividade biológica na concentração de 20 mg/kg, sendo significativa apenas para o triterpeno ácido ursólico. A análise histológica realizada não demonstrou uma correlação significativa entre os níveis parasitêmicos e o parasitismo tecidual, para todos os grupos avaliados. A avaliação do perfil hepatobiliar e renal das substâncias foi realizada a fim de se verificar possíveis efeitos tóxicos das mesmas. Entretanto, não foi observada nenhuma diferença estatisticamente significativa entre os grupos tratados e o grupo controle, indicando que o aumento dos níveis parasitêmicos não está associado ao efeito das substâncias no tecido. Através da avaliação do efeito dos triterpenos sobre a resposta imune, verificamos uma diminuição dos níveis plasmáticos de IFN- e um aumento das concentrações de IL-10. Dessa maneira, nós sugerimos que o tratamento com essas substâncias pode direcionar a resposta imune para o padrão Th2 e, em conseqüência desse efeito imunossupressor, uma maior quantidade de formas tripomastigotas poderia ser observada na circulação do hospedeiro. / Chagas disease is a public health problem with worrisome data on the number of infected people, not to mention the population that still remains at risk of infection. Tropical diseases defy scientific research since the existing drugs have serious side effects. Trypanosomiases, such as Chagas disease, are of great importance in Brazil. Studies in several countries have reported that many plant species display activity against Trypanosoma cruzi, the causative agent of Chagas disease. Ursolic acid and its isomer, oleanolic acid, belong to a class of triterpenoid compounds that is widely distributed in the plant kingdom and has frequently been isolated as an isomeric mixture. In the present study, the trypanocidal activity of the triterpenoids ursolic acid and oleanolic acid was evaluated against the Y and Bolivia strains of T. cruzi. In addition, the potassium salt derivative of ursolic acid was synthesized and also tested. The triterpenoids were administered intraperitoneally and orally at concentrations of 20 and 50 mg / kg, after evaluation of the median lethal dose (LD50). At the concentrations of 20 and 50 mg / kg, the intraperitoneal administration of each of the substances was not able to reduce parasitemia of the animals infected with the Y and Bolivia strains of T. cruzi. However, ursolic and oleanolic acid, as well as the potassium salt derivative of ursolic acid exhibited significant trypanocidal activity at a concentration of 50 mg / kg when they were orally administered to animals infected with the Y strain of T. cruzi. On the other hand, oral administration of the tested compounds at a concentration of 20 mg / kg evidenced biological activity, which was significant for ursolic acid only. For the most of studied groups, histological analysis did not demonstrate a significant correlation between the levels of parasitemia and tissue parasitism. Determination and evaluation of biochemical parameters in the serum of experimental animals was performed, to assess the hepatic, biliary, and renal toxic effects of the substances. There were no statistically significant differences between the treated groups and the control group, indicating that the increase in parasitemia is not associated with the effects of the substances in the tissue. We suggest the hypothesis of an immunosuppressive effect, since there was a decreased plasma levels of IFN- after treatment with the triterpenes. Moreover, the treated groups also exhibited increased levels of IL-10. Therefore, we suggest that treatment with the substances could be directing the immune response toward the Th2 type and, as a consequence of this immunosuppressive effect, a greater amount of trypomastigotes could be observed in the circulation of the host.

Neste trabalho o metilpluviatolido (1), o matairesinol (7), a hinoquinina (11), a cubebina (17) e seus respectivos derivados, providos de algumas modificações estruturais foram submetidos a testes in vitro para a determinação da atividade citotoxica e tripanocida. As substâncias não apresentaram atividade citotoxica significativa para a linhagem celular utilizada (LLC-MK2). Nos ensaios tripanocida in vitro o dimetoximorelensin (8) e 11 foram as substâncias que determinaram as maiores atividades tripanocida sobre as varias formas e cepas de T. cruzi utilizadas e juntamente com a cubebina foram submetidas os ensaios in vivo. As substâncias determinaram alterações significativas no curso da infecção chagásica experimental. No entanto apenas a 8 apresentou efeito semelhante ao do benzonidazol para ambas as cepas, sendo a cepa BOL em relação a cepa Y mais resistente as substâncias 11 e 17. Algumas rotas metabólicas foram avaliadas como mecanismo de ação das substâncias. As substâncias não apresentaram atividade inibitória sobre a enzima gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase (GAPDH) de Trypanosoma cruzi, não induziram a produção de H2O2 e outros peróxidos, bem como não induziram a produção de óxido nítrico, tendo algumas inibindo esta produção. No entanto, apresentaram efeito inibitório sobre a respiração celular e efeito inibitório sobre a enzima ferro superóxido dismutase (Fe-SOD) de Trypanosoma cruzi. Adicionalmente foi demonstrado que em sistema livre de células as substâncias não apresentam atividade scavenger de radicais livres e que o tratamento com a substancia 8, avaliado por microscopia eletrônica, provoca alterações nucleares nas formas epimastigotas do parasita, sugerindo que a atividade tripanocida desta substancia envolva a inibição da síntese de DNA e RNA. Dessa forma, podemos concluir que a atividade tripanocida das varias lignano-lactonas avaliadas é promissora e que a produção de H2O2 e outros peróxidos, atividade inibitória sobre a enzima gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase (GAPDH) de Trypanosoma cruzi, bem como a capacidade de indução de óxido nítrico pelos derivados bioativos são mecanismos que parecem não estar envolvidos na atividade tripanocida das substâncias. Além disso, que o efeito inibitório sobre a respiração celular parece contribuir para a atividade tripanocida e pode estar envolvido no mecanismo de citotoxicidade destas substâncias. Ainda, que o efeito inibitório sobre a enzima ferro superóxido dismutase (Fe- SOD) de Trypanosoma cruzi parece ser um dos principais mecanismos envolvidos na atividade tripanocida das substâncias. / In this work the compounds methylpluviatolide (1), matairesinol (7), hinokinin (11), cubebin (17) and its derivatives bearing some structural modifications were submitted to in vitro trypanocidal and citotoxic assays. The compounds do not show significant citotoxicity for the LLC-MK2 cells used. In the in vitro trypanocidal assays, the compounds more active against the different strains and forms of T. cruzi were the dimethoxymorelensin (8) and hinokinin (11). These compounds and cubebin (17) were submitted to in vivo trypanocidal assay. The compounds display significant modifications on the experimental chagasic infection. However, for both strains, Y and BOL, only the 8 displayed similar effect of the benznidazole. The BOL strain was more resistant than Y strain to treatment with 11 and 17. Some metabolic routes were evaluated as compounds action mechanism. The compounds do not showed inhibitory activity under enzyme glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) of Trypanosoma cruzi, they do not induced the production of H2O2 and others peroxides and also do not induced the nitric oxide production, instead some compounds decrease this production. On the other hand, they showed inhibitory effect under the cellular respiration and the enzyme iron superoxide dismutase (Fe-SOD) of Trypanosoma cruzi. In addition, it was demonstrated that on system cells free, the compounds do not showed free radicals scavenger activity and that the treatment with the compound 8, evaluated in electron microscopy, display nuclear alterations on epimastigotes forms, suggesting an inhibitory effect on T. cruzi DNA and RNA biosynthesis. In conclusion, the compounds trypanocidal activity is promising and the production of H2O2 and others peroxides, the activity under enzyme glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) of Trypanosoma cruzi, and the induction of nitric oxide production seem do not be involved in the trypanocidal and citotoxity activity of these group of compounds. The inhibitory effect under cellular respiration seems to be contributing for trypanocidal activity and may be involved on its citotoxic mechanism. Moreover, the inhibitory effect under the enzyme iron superoxide dismutase (Fe-SOD) of Trypanosoma cruzi seems to be the main mechanism involved on trypanocidal activity of these compounds.