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Previous issue date: 2014-03-19 / Fungal species are already available in the market and the mushrooms have been reported as producers of milk coagulating enzymes for cheese production. The objective of this study was to investigate the growth of Pleurotus florida DPUA 1534 and Pleurotus ostreatus DPUA 1533 in vegetable substrate to select a species with potential proteolytic coagulant for the application in the food industry. The results of vertical mycelial growth, although P. florida DPUA 1534 and P. ostreatus DPUA 1533 have colonized natural residues tested, P. florida DPUA 1534 was the species that showed a significant increase (p> 0.05) after 15 days given that determined the choice of this species for the production of the mushroom. In producing the substrate formulated based on cupuaçu bark supplemented with rice bran 20%, 20 mycelial inoculum discs (Ø = 10 mm) resulted in better biological efficiency (14.2%) and the remaining analyzes were performed with P. florida DPUA 1534 produced under those conditions. The analysis showed the mushroom highlighted in the following nutritional characteristics P. florida DPUA 1534 proteins (25.94%), carbohydrate (49.72%), iron (89.82%) and zinc (85.08%) and the presence of all essential amino acids. In the crude extract of the mushroom P. florida DPUA 1534 to coagulant activity and the AUC ratio was 67.68 and 2.15, respectively. Optimum activity was shown at pH 7.0 at 40 ° C. The enzyme extract was stable between 25 ° C and 40 ° C and at pH between 4 and 10 showed about 80 to 90% of activity in the first 90 minutes of incubation. The enzymatic extract showed susceptibility to inhibitors of the serine protease class (90%), metalloprotease (93%), cysteine proteases (92%) and aspartic protease (94%). The most effective compound was Pepstatin A, suggesting the presence of aspartic protease enzymes showing aspartic residues in the active site, indicating the possibility of its application in the dairy industry. Regarding toxicity results showed that P. florida DPUA 1534 produces proteases with biological activity on Artemia salina (LC50 = 25,5μg) and showed hemolytic activity in blood of sheep trading in ascending order with respect to extract concentrations (0, 2 to 1.0 mL), LC50 = 363,88μg and LC50 = 241,51μg after 1h and 24h of incubation, respectively. The in vivo test indicated that the extract when administered at a dose of 1000 mg.Kg-1 in rats, no deaths or clinical signs of toxicity in any of the treated animals did not cause significant changes in haematological and biochemical parameters when compared to the group control, and histological analyzes revealed no acute toxicity under the experimental conditions. Therefore, the extract of P. florida DPUA 1534 showed potential for use as coagulating milk. / Espécies de fungos já estão disponíveis no mercado e os cogumelos têm sido reportados como produtores de enzimas coagulantes do leite para produção de queijos. O objetivo do presente trabalho foi investigar o crescimento de Pleurotus florida DPUA 1534 e Pleurotus ostreatus DPUA 1533 em substrato vegetal para selecionar uma espécie com potencial proteolítico coagulante para fins de aplicação na indústria de alimentos. Nos resultados do crescimento micelial vertical, embora P. florida DPUA 1534 e Pleurotus ostreatus DPUA 1533 tenham colonizado os resíduos naturais testados, P. florida DPUA 1534 foi a espécie que apresentou crescimento significativo (p>0,05) ao final de 15 dias, dado que determinou a escolha dessa espécie para produção dos basidiomas. Na produção o substrato formulado a base de casca de cupuaçu suplementado com farelo de arroz 20%, inóculo de 20 discos miceliais (Ø= 10 mm) resultou na melhor eficiência biológica (14,2%) e as demais análises foram realizadas do cogumelo de P. florida DPUA 1534 produzido nessas condições. A análise dos basidiomas mostrou em destaque a seguinte característica nutricional de P. florida DPUA 1534, proteínas (25,94%), carboidratos (49,72%), ferro (89,82%) e zinco (85,08%), além da presença de todos os aminoácidos essenciais. No extrato bruto dos basidiomas de P. florida DPUA 1534 a atividade coagulante e a razão foi de 67,68 UAC e 2,15, respectivamente. A atividade ótima foi demonstrada em pH 7,0 a 40 °C. O extrato enzimático mostrou-se estável entre 25 °C e 40 °C, e na faixa de pH entre 4 a 10 apresentou cerca de 80 a 90% de atividade nos primeiros 90 minutos de incubação. O extrato enzimático mostrou susceptibilidade aos inibidores das classes de serino-protease (90%), metaloprotease (93%), cisteíno-protease (92%) e protease aspártica (94%). O composto mais eficaz foi Pepstatin A, sugerindo a presença de protease aspártica, enzimas que apresentam resíduos aspárticos no sítio ativo, indicando a possibilidade de sua aplicação na indústria de laticínios. Em relação à toxicidade os resultados demonstraram que P. florida DPUA 1534 produz proteases com atividade biológica frente à Artemia salina (CL50= 25,5μg) e apresentou atividade hemolítica em sangue de carneiro comercial em ordem crescente em relação à concentração do extrato (0,2 a 1,0 mL), com CL50= 363,88μg e CL50= 241,51μg após 1h e 24h de incubação, respectivamente. O teste in vivo indicou que o extrato quando administrado na dose de 1000 mg.Kg-1 em ratos Wistar, não ocorreu óbito ou sinais clínicos de toxicidade em nenhum dos animais tratados, não promoveu alterações significativas dos parâmetros hematológicos e bioquímicos quando comparados ao grupo controle, e as análises histológicas revelaram que não houve toxicidade aguda nas condições do experimento. Portanto, o extrato de P. florida DPUA 1534 apresentou potencial para utilização como coagulante do leite.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:tede2:tede2/4698 |
| Date | 19 March 2014 |
| Creators | NEVES, Kilma Cristiane Silva |
| Contributors | Porto, Ana Lúcia Figueiredo, Teixeira, Maria Francisca Simas, Marques, Daniela de Araújo Viana, Maia, Maria de Mascena Diniz, Motta, Cristina Maria de Souza, Porto, Tatiana de Souza |
| Publisher | Universidade Federal Rural de Pernambuco, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia (Renorbio), UFRPE, Brasil, Rede Nordeste de Biotecnologia |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFRPE, instname:Universidade Federal Rural de Pernambuco, instacron:UFRPE |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 7794227690756777355, 600, 600, 600, -8104576588452276421, 6209957791494323825 |
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